一種源于象草的內(nèi)生鞘氨醇單胞菌及其用途制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種源于象草的內(nèi)生鞘氨醇單胞菌及其用途，具體涉及一種促進(jìn)雜交狼尾草生長發(fā)育功能的植物內(nèi)生菌鞘氨醇單胞菌的分離、培養(yǎng)方法和用于促進(jìn)雜交狼尾草苗生長的用途，屬于農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物技術(shù)領(lǐng)域；該內(nèi)生鞘氨醇單胞菌為象草內(nèi)生菌菌株pp01，分類名為鞘氨醇單胞菌屬Sphingomonas?sp.?pp01，于2014年7月4號在中國微生物保藏中心保藏，保藏號CGMCC?9414；該菌株是一種優(yōu)良的植物促生內(nèi)生菌菌株，具產(chǎn)IAA、固氮、產(chǎn)鐵載體等特性，且在植物根部有很好的定殖能力；利用該菌株侵染雜交狼尾草，能顯著提高處理植株對鹽脅迫的抗性，促進(jìn)植物生長發(fā)育，其地上部鮮重相對未接種的陰性對照組增加101.1％；干重相增加138.6％；植株高度增加42.4％；本發(fā)明專利技術(shù)可用于促進(jìn)鹽堿邊際土地植物的生長發(fā)育，對于微生物肥料研制，鹽堿邊際土地資源的利用有重要作用。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種源于象草的內(nèi)生鞘氨醇單胞菌及其用途，具體涉及一種促進(jìn)雜交 狼尾草生長發(fā)育功能的植物內(nèi)生菌鞘氨醇單胞菌的分離、培養(yǎng)方法和用于促進(jìn)雜交狼尾草 苗生長的用途，屬于農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物

技術(shù)介紹
： 象草schum)及雜交狼尾草作為禾本科多年生Oi草本植物， 是熱帶和亞熱帶地區(qū)廣泛栽培的一種優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、用途廣泛的牧草。近年來，以其生物量大， 再生能力強，纖維素、半纖維素含量高，生態(tài)適應(yīng)性強，適應(yīng)性廣及利用年限長等特性，是能 源作物的首選資源之一。我國具有大面積的宜能邊際性土地，據(jù)預(yù)測，我國邊際性土地的生 物質(zhì)生產(chǎn)潛力超過2億噸標(biāo)準(zhǔn)煤。因此，在宜能邊際性土地種植象草等能源草，開發(fā)生物質(zhì) 能源，符合我國"不與糧爭地，不與人爭糧"的能源發(fā)展目標(biāo)。但是這些區(qū)域生產(chǎn)條件較差， 缺乏灌溉保障，鹽堿危害嚴(yán)重，影響象草、雜交狼尾草的產(chǎn)量。植物促生內(nèi)生菌（Plant Growth-Promoting bacteria endophyte, PGPE)是指一 類能夠定殖在植物體內(nèi)，并與植物體形成特異的共生關(guān)系，并因此對雙方都有益處的細(xì)菌。 它對提高土壤中營養(yǎng)物質(zhì)的利用率、增強植物對逆境的適應(yīng)性及耐受性，促進(jìn)植物的生長 發(fā)育有重要作用，成為可持續(xù)性農(nóng)業(yè)的重要發(fā)展方向。植物促生內(nèi)生菌可以通過固氮作用、 分泌植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、合成鐵載體及抑制一些疾病的發(fā)生等方式促進(jìn)植物的生長。 雖然現(xiàn)在已經(jīng)篩選到多種促生長作用的植物內(nèi)生細(xì)菌，主要是來自水稻，玉米， 小麥，甘庶，蘋果，柑橘，高叢藍(lán)莓，桑葚，杏，它們在正?；蛎{迫條件下能促進(jìn)植物健康生 長，提高其產(chǎn)量（（1) Kloepper, J.W. 1"4. Plant growth promoting bacteria (other systems) . In: Okon, J. (Ed. ), Azospirillum/Plant Association. CRC Press, Boca Raton, pp. 137 - 154. ； (2) De Silva, A. , Petterson, K. , Rothrock, C. , Moore, J. Growth promotion of high bush blue berry by fungal and bacterial inoculants. 2000. HortScience 35, 1228 - 1230. ； (3) Sudhakar, P. , Chattopadhyay, G. N., Gangwar, S. K. , Ghosh, J. K. Effect of foliar application of Azotobacter, Azospirillum and Beijerinckia on leaf yield and quality of mulberry (Morus alba), 2000, J. Agric. Sci. 134, 227 - 234. ； (4) Esitken, A., Karlidag, H., Ercisli, S. , Sahin, F. Effects of foliar application of Bacillus substilis Osu-142 on the yield, growth and control of shot-hole disease (Coryneum blight) of apricot, 2002, Gartenbauwissenschaft 67, 139 - 142. ；(5)Esitken, A., Karlidag, H. , Ercisli, S., Turan, M. , Sahin, F. The effect of spraying a growth promoting bacterium on the yield, growth and nutrient element composition of leaves of apricotCPrunus armeniaca L. cv. Hacihaliloglu), 2003, Aus. J. Agric. Res. 54，377 - 380)。但是沒有專門來源于象草的促生內(nèi)生菌，本專利技術(shù)提供的來源于象草 的優(yōu)良促生內(nèi)生菌鞘氨醇單胞菌，為更有效地增強象草、雜交狼尾草的抗逆性、提高其在沿 海灘涂、鹽堿地、貧瘠地等邊際性土地的產(chǎn)量提供保障。
技術(shù)實現(xiàn)思路
： 本專利技術(shù)的目的在于提供一種來源于象草的鞘氨醇單胞菌，該菌株能在植物內(nèi)定殖，并 具有分泌IAA、固氮、產(chǎn)鐵載體等促生性能，可用于促進(jìn)鹽脅迫下的雜交狼尾草苗生長，有助 于促進(jìn)象草及雜交狼尾草作為能源草在在鹽堿性邊際土地上的種植。 為了實現(xiàn)以上目的，本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案是： 所述的來源于象草的鞘氨醇單胞菌是從象草植株中分離到的一株內(nèi)生菌，經(jīng)傳統(tǒng)方法 鑒定和分子鑒定表明它屬于鞘氨醇單胞菌，將其命名為鞘氨醇單胞菌PP〇l (從 sp. ppOl)，于2014年7月4號在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC) 保藏，保藏地址為中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研宄所，保藏號 CGMCC 9414。 本專利技術(shù)的象草內(nèi)生菌鞘氨醇單胞菌ppOl，是按如下方法從象草中分離培養(yǎng)得到 的： (1) 取自江蘇省農(nóng)科院試驗田的象草蘇牧2號，取根部經(jīng)表面消毒殺滅供試材料表 面微生物，加適量石英砂研磨，加無菌水混勻，100 y L涂布于LB固體培養(yǎng)基上，30°C，培養(yǎng) 48h ； (2) 挑取單菌落在LB固體培養(yǎng)基上反復(fù)劃線純化，直到得到純系菌株為止； (3) 將純系菌株接種于LB液體培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)18h，取菌液700 y L加入質(zhì)量濃度 為50%的甘油300 y L，混合后置于-70°C冰柜中冷凍保存； (4) 將所得的純系菌株，通過侵染雜交狼尾草苗驗證其促生長活性后，鑒定，并保存菌 種，其中一株分離純化所得的內(nèi)生細(xì)菌命名為PP〇 1。 本專利技術(shù)的象草內(nèi)生菌鞘氨醇單胞菌ppOl，具有如下生物學(xué)特征： 1. 菌落形態(tài)特征：在LB固體培養(yǎng)基上生長良好，菌落呈圓形，黃色，全緣，光滑，菌落中 心突起脊?fàn)睿?2. 菌體形態(tài)特征：桿狀，直徑0. 6~1. 6 ym，革蘭氏陰性； 3. 部分生理生化特征：可在LB培養(yǎng)基上良好生長，最適生長溫度30°C，最適生長pH 6. 0 ； 4. 遺傳學(xué)特征：根據(jù)《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》（東秀珠，蔡妙英，科學(xué)出版社，2001)， 本專利技術(shù)的鞘氨醇單胞菌CGMCC 9414形態(tài)特征與鞘氨醇屬最接近，該鞘氨醇單胞菌經(jīng)16S rDNA通用引物27F和534R進(jìn)行PCR擴(kuò)增部分基因序列（442bp)已向美國國家生物技術(shù) 信息中心（NCBI)的Genbank基因序列數(shù)據(jù)庫提交，登錄號為KM220524。該鞘氨醇單胞 菌CGMCC 9414 16S rDNA序列分析表明，與Genbank國際數(shù)據(jù)庫中記錄的最相似的菌株 SphingomonaspaucimobilisDSM 30198 (NR 104893. 1) 98%〇 氨醇單胞菌CGMCC 9414應(yīng)屬于鞘氨醇單胞菌屬sp.本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種內(nèi)生鞘氨醇單胞菌pp01（Sphingomonas?sp.?pp01），于2014年7月4號在中國微生物保藏中心保藏，保藏號CGMCC?9414。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李霞，孫建中，耿小燕，梅傳生，蔣建雄，高璐，傅蕾，
申請(專利權(quán))人：江蘇大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32