本發明專利技術公開了一種血管緊張素轉化酶抑制肽及其制備方法，血管緊張素轉化酶抑制肽的氨基酸序列為Gly-Pro-Gly-Ala-Ala-Gly-Asp-Asp-Gly-Ala。本發明專利技術所制備的血管緊張素轉化酶抑制肽來源于食物，安全無毒，對血壓正常的人沒有作用，同時經過體內酶解，有利于消化吸收，降血壓作用顯著；采用酶膜耦聯技術分離該血管緊張素轉化酶抑制肽方法簡單，工序步驟少。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬生物
，涉及。
技術介紹
高血壓是一種以動脈收縮壓或舒張壓升高為特征的臨床綜合癥，它伴有心臟、血管、腦和腎等器官器質性病變，是導致中風、冠心病的危險致病因子，在我國其發病率在成年人中高達20%，已經成為生命“第一殺手”，防治高血壓成為全球醫務界的一項艱巨任務。高血壓的病因復雜，已知體內許多系統與血壓調節有密切關系，其中最重要的是升壓系統一腎素-血管緊張素系統(Renin-Ang1tensin System, RAS)和降壓系統一激肽釋放酶-激肽系統(Kallikrein-Kinin System, KKS)。系統中存在的血管緊張素轉化酶是影響RAS和KKS的關鍵酶。在RAS中，血管緊張素轉化酶水解無升壓活性的血管緊張素I，生成具有升壓活性的血管緊張素II。而在KKS中，血管緊張素轉化酶能夠降解具有降壓活性的緩激肽，使之失去降血壓活性。血管緊張素轉化酶通過以上兩種途徑參與了體內血壓調節，造成血壓的升高，引發高血壓。近年來，具有抑制血管緊張素轉化酶作用的生物活性肽的研宄呈明顯上升趨勢，人們已經從很多生物資源中分離得到血管緊張素轉化酶抑制肽，來源于食物中的血管緊張素轉化酶抑制肽具有降壓活性顯著、沒有毒副作用、安全性高、成本低、易吸收等特點，而常規的降血壓藥都有明顯的副作用，在高血壓已成為危及人類身體健康的主要疾病的今天，食物中血管緊張素轉化酶抑制肽更加符合人們的需求。目前從食物蛋白質中通過酶技術等現代生物技術獲得血管緊張素轉化酶抑制活性肽為高效安全的抗高血壓藥的研宄提供了豐富的依據。海蜇作為一種藥食同源的大型水母，在我國有廣闊的資源分布和悠久的應用歷史，早在一千六百多年前就已經開始為世人所食用。海蜇除食用外，全身均可入藥，祖國醫學認為其性味咸平，入肺、肝兩經，有潤肺、化痰、止咳、清熱、消食、潤腸等功效。據李時珍《本草綱目》所述，海蜇“氣味咸溫無毒、主治婦，入勞損、積血帶下，小兒風疾丹毒，燙火傷”等，對氣管炎、哮喘、高血壓、胃潰瘍、單純性甲狀腺腫大等癥均有療效。近年來我國醫衛部門關于海蜇的藥用價值也有許多報道。認為對治療高血壓、慢性氣管炎、哮喘、熱痰咳嗽、胃潰瘍，單純性甲狀腺腫和頸淋巴結腫等，有一定療效。尤其是海蜇的降壓作用比較顯著，藥理研宄證明:海蜇蛋白酶解產物對腎動脈狹窄高血壓模型動物具有明顯的降壓作用。海蜇主要是由水，蛋白質、灰分、碳水化合物、脂肪等物質組成。近代研宄分析表明:每10g海蜇食部中，含水分65.0g，灰分18.7g，蛋白質12.3g，碳水化合物3.9g，脂肪0.lg，鈣182mg，鐵9.5mg，硫胺素0.0lmg，核黃素0.04mg，尼克酸0.2mg，膽固醇16mg。海蜇的許多藥理活性都與蛋白質有關，由此推測海蜇降壓的主要原因可能是通過所含有的活性肽抑制血管緊張素轉化酶活性而發揮作用的。因此海蜇是酶解分離血管緊張素轉化酶抑制肽的優質資源。
技術實現思路
本專利技術的第一個目的是提供一種從海蜇中制備的血管緊張素轉化酶抑制肽，以提供一種新的食物來源的血管緊張素轉化酶抑制肽。該從海蜇中制備的血管緊張素轉化酶抑制肽具有10個氨基酸，其序列為Gly-P1-Gly-Ala-Ala-Gly-Asp-Asp-Gly-Ala,具有較高的血管緊張素轉化酶抑制活性。本專利技術的第二個目的是提供一種從海蜇中制備血管緊張素轉化酶抑制肽的方法。本專利技術通過以下技術方案實現上述專利技術目的，所述從海蜇中制備血管緊張素轉化酶抑制肽的方法，包括I)海蜇蛋白酶解產物的制備:海蜇用酸性蛋白酶水解后，收集相對分子質量小于3000Da的組分，脫鹽，得到海蜇蛋白酶解產物；2)血管緊張素轉化酶抑制肽的分離純化:所述海蜇蛋白酶解產物首先經SPSephadex C-25陽離子交換柱分離，收集具有抑制血管緊張素轉化酶活性的組分，該活性組分再經Sephadex G_25凝膠柱和反相高效液相色譜純化。SP Sephadex C-25陽離子交換柱洗脫條件為:洗脫液為20mM醋酸緩沖液，pH4.0，洗脫速度為0.6mL/min。Sephadex G_25凝膠柱分離條件為:洗脫液為雙蒸水，洗脫速度為0.6mL/min。SP Sephadex C-25陽離子交換柱和Sephadex G-25凝膠柱的洗脫液的檢測波長均為280nm ;高效液相色譜的檢測波長為220nm。本專利技術的優點是:1.所制備的血管緊張素轉化酶抑制肽來源于食物，安全無毒，對血壓正常的人沒有作用，同時經過體內酶解，有利于消化吸收，降血壓作用顯著；2.采用酶膜耦聯技術分離該血管緊張素轉化酶抑制肽方法簡單，工序步驟少。【附圖說明】圖1S^hadex C-25 洗脫曲線圖2Sephadex G-25 洗脫曲線圖32-2組分高效液相分析圖譜(檢測波長220nm)圖4Pji分高效液相色譜分析(檢測波長220nm)【具體實施方式】1.血管緊張素轉化酶抑制活性的測定將Cushman-Cheung(1971)方法略作修改。原理是:在37°C、pH 8.3條件下，血管緊張素轉化酶催化水解血管緊張素I (Ang I )模擬物馬尿酰組氨酰亮氨酸(HHL)產生馬尿酸(Hip)。馬尿酸在紫外228nm處具有特征吸收峰，通過生成物馬尿酸的變化計算血管緊張素轉化酶抑制率。具體操作如下:用1.5mL離心管，空白對照組加入10yL 5mmol/LHHL,用pH 8.3硼酸緩沖液補足至120 μ L，37°C恒溫水浴保溫5min，加入5 μ L 0.lU/mL血管緊張素轉化酶啟動反應；樣品組加入100 μ L 5mmol/L HHL和20 μ L水解液后，37°C恒溫水浴保溫5min，加入5μL 0.lU/mL血管緊張素轉化酶啟動反應，之后兩組均在37°C恒溫保持30min后，加入lmol/L HCl 200 μ L中止反應，再加入1.5ml冷的乙酸乙酯，振搖15s，4000r/min離心1min后取出1.0mL乙酸乙酯層轉入另一離心管中，置于95°C烘箱中烘干，再用ImL去離子水溶解后，在228nm處測定吸光值。ACE抑制活性按照下式計算:ACE 抑制率(% ) = X 100%其中，Atl為不存在抑制劑時的吸光值;A 3為存在樣品與酶時的吸光值。用IC5tl表示抑制率為50%時ACE活性所需的抑制劑的濃度。2.海蜇蛋白酶解產物的制備將三礬海蜇洗凈除去泥沙等雜質，切塊，加入10倍量水，浸泡5?6小時，用清水洗滌后，重復上述操作三次，瀝干后加10倍量水打漿，以海蜇蛋白含量計，先加入2%胃蛋白酶，調整pH至3.0，37°C水解4h后，再加入6 %木瓜蛋白酶，調整pH至5.0，50°C水解Ih，100°C加熱lOmin，滅酶后，4000轉/分離心15min，取上清液。采用分子量為3000Da的超濾膜將酶解液過濾，收集超濾分子量小于3000Da的部分，再進行納濾處理脫鹽，得海蜇蛋白酶解液。納濾條件:分子量為150?300截留膜，進膜壓力llBar，出膜壓力llBar。將海蜇蛋白酶解液冷凍干燥，冷凍干燥條件:溫度O?50min，0°C升至 20°C ;50 ?300min，20°C ；300 ?350min，20°C升至 40°C ；350 ?750min，40°C ；750 ?800min，40 °C降本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種從海蜇中制備的血管緊張素轉化酶抑制肽，其特征是：其氨基酸序列為Gly?Pro?Gly?Ala?Ala?Gly?Asp?Asp?Gly?Ala。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫振亮，馮景，
申請(專利權)人：上海市奉賢區中心醫院，
類型：發明
國別省市：上海;31
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