本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種用于檢測(cè)玉米植物DBN9927的核酸序列及其檢測(cè)方法，所述玉米植物的核酸序列包括SEQ?ID?NO:1或其互補(bǔ)序列、或者SEQ?ID?NO:2或其互補(bǔ)序列。本發(fā)明專利技術(shù)玉米植物DBN9927對(duì)鱗翅目昆蟲具有較好的抗性并對(duì)草甘膦除草劑具有較好的耐受性，對(duì)產(chǎn)量無(wú)影響，且檢測(cè)方法可以準(zhǔn)確快速的鑒定生物樣品中是否包含轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927的DNA分子。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種用于檢測(cè)玉米植物DBN9927的核酸序列及其檢測(cè)方法，特別是涉 及一種對(duì)昆蟲具有抗性且耐受草甘膦除草劑施用的轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927和用于檢測(cè) 生物樣品中是否包含特定轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927的核酸序列及其檢測(cè)方法。
技術(shù)介紹
玉米（Zea mays L.)在世界上很多地區(qū)都是主要的糧食作物。生物技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用 于玉米以改善其農(nóng)藝性狀和品質(zhì)。在玉米生產(chǎn)中昆蟲抗性是一項(xiàng)重要的農(nóng)藝性狀，特別是 對(duì)鱗翅目昆蟲的抗性，例如玉米螟、棉鈴蟲、黏蟲等。玉米對(duì)鱗翅目昆蟲的抗性可以通過轉(zhuǎn) 基因的方法使鱗翅目昆蟲的抗性基因在玉米植物中表達(dá)而獲得。另一個(gè)重要的農(nóng)藝性狀是 除草劑耐受性，特別是耐受草甘膦除草劑。玉米對(duì)草甘膦除草劑的耐受性可以通過轉(zhuǎn)基因 的方法使草甘膦除草劑耐受型基因（如EPSPS)在玉米植物中表達(dá)而獲得。 已知外源基因在植物體內(nèi)的表達(dá)受到它們的染色體位置的影響，可能是由于染色 質(zhì)結(jié)構(gòu)（如異染色質(zhì)）或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件（如增強(qiáng)子）接近整合位點(diǎn)。為此，通常需要篩選大 量的事件才有可能鑒定出可以商業(yè)化的事件（即導(dǎo)入的目標(biāo)基因得到最優(yōu)表達(dá)的事件）。 例如，在植物和其他生物體中已經(jīng)觀察到導(dǎo)入基因的表達(dá)量在事件間可能有很大差異；在 表達(dá)的空間或時(shí)間模式上可能也存在差異，如在不同植物組織之間轉(zhuǎn)基因的相對(duì)表達(dá)存在 差異，這種差異表現(xiàn)在實(shí)際的表達(dá)模式可能與根據(jù)導(dǎo)入的基因構(gòu)建體中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件所 預(yù)期的表達(dá)模式不一致。因此，通常需要產(chǎn)生成百上千個(gè)不同的事件并從這些事件中篩選 出具有以商業(yè)化為目的所預(yù)期的轉(zhuǎn)基因表達(dá)量和表達(dá)模式的單一事件。具有預(yù)期的轉(zhuǎn)基因 表達(dá)量和表達(dá)模式的事件可用于采用常規(guī)育種方法通過有性異型雜交將轉(zhuǎn)基因滲入到其 他遺傳背景中。通過這種雜交方式產(chǎn)生的后代保持了原始轉(zhuǎn)化體的轉(zhuǎn)基因表達(dá)特征。應(yīng)用 這種策略模式可以確保在許多品種中具有可靠的基因表達(dá)，而這些品種能很好的適應(yīng)當(dāng)?shù)?的生長(zhǎng)條件。 能夠檢測(cè)特定事件的存在以確定有性雜交的后代是否包含目的基因?qū)⑹怯幸娴摹?此外，檢測(cè)特定事件的方法還將有助于遵守相關(guān)法規(guī)，例如來(lái)源于重組農(nóng)作物的食物在投 入市場(chǎng)前需要獲得正式批準(zhǔn)和進(jìn)行標(biāo)記。通過任何熟知的多核苷酸檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因 的存在都是可能的，例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)或利用多核苷酸探針的DNA雜交。這些檢 測(cè)方法通常集中于常用的遺傳元件，例如啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等。因此，除非與插入的 轉(zhuǎn)基因DNA相鄰的染色體DNA( "側(cè)翼DNA"）的序列是己知的，上述這種方法就不能夠用于 區(qū)別不同的事件，特別是那些用相同的DNA構(gòu)建體產(chǎn)生的事件。所以，目前常利用跨越了插 入的轉(zhuǎn)基因和側(cè)翼DNA的接合部位的一對(duì)引物通過PCR來(lái)鑒定轉(zhuǎn)基因特定事件，具體地說 是包含于側(cè)翼序列的第一引物和包含插入序列的第二引物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種用于檢測(cè)玉米植物DBN9927的核酸序列及其檢測(cè)方法， 轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927對(duì)昆蟲具有較好的抗性并對(duì)草甘膦除草劑具有較好的耐受性，且 檢測(cè)方法可以準(zhǔn)確快速的鑒定生物樣品中是否包含特定轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927的DNA分 子。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供了一種核酸序列，SEQ ID N0:3或其互補(bǔ)序列中至少 11個(gè)連續(xù)的核苷酸、和/或SEQ ID N0:4或其互補(bǔ)序列中至少11個(gè)連續(xù)的核苷酸。 優(yōu)選地，所述核酸序列包括SEQ ID NO: 1或其互補(bǔ)序列、和/或SEQ ID N0:2或其 互補(bǔ)序列。 進(jìn)一步地，所述核酸序列包括SEQIDN0:3或其互補(bǔ)序列、和/或SEQIDN0:4或 其互補(bǔ)序列。 更進(jìn)一步地，所述核酸序列包括SEQIDN0:5或其互補(bǔ)序列。 所述SEQ ID NO: 1或其互補(bǔ)序列為轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927中在插入序列的5' 末端位于插入接合部位附近的一個(gè)長(zhǎng)度為22個(gè)核苷酸的序列，所述SEQ ID N0:1或其互補(bǔ) 序列跨越了玉米插入位點(diǎn)的側(cè)翼基因組DNA序列和插入序列的5'末端的DNA序列，包含所 述SEQ ID N0:1或其互補(bǔ)序列即可鑒定為轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927的存在。所述SEQ ID N0:2或其互補(bǔ)序列為轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927中在插入序列的3'末端位于插入接合部位 附近的一個(gè)長(zhǎng)度為22個(gè)核苷酸的序列，所述SEQ ID N0:2或其互補(bǔ)序列跨越了插入序列的 3'末端的DNA序列和玉米插入位點(diǎn)的側(cè)翼基因組DNA序列，包含所述SEQ ID N0:2或其互 補(bǔ)序列即可鑒定為轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9927的存在。 本專利技術(shù)中，所述核酸序列可以為所述SEQ ID N0:3或其互補(bǔ)序列中轉(zhuǎn)基因插入序 列的任何部分的至少11個(gè)或更多個(gè)連續(xù)多核苷酸（第一核酸序列），或者為所述SEQ ID NO: 3或其互補(bǔ)序列中5'側(cè)翼玉米基因組DNA區(qū)域的任何部分的至少11個(gè)或更多個(gè)連續(xù) 多核苷酸（第二核酸序列）。所述核酸序列進(jìn)一步可以為同源于或互補(bǔ)于包含完整的所述 SEQ ID NO: 1的所述SEQ ID N0:3的一部分。當(dāng)?shù)谝缓怂嵝蛄泻偷诙怂嵝蛄幸黄鹗褂脮r(shí)， 這些核酸序列在產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物的DNA擴(kuò)增方法中包括DNA引物組。使用DNA引物對(duì)在DNA 擴(kuò)增方法中產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物是包括SEQ ID NO: 1的擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，可以診斷轉(zhuǎn)基因玉米事件 DBN9927或其后代的存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，第一和第二核酸序列不必僅僅由DNA組 成，也可包括RNA、DNA和RNA的混合物，或者DNA、RNA或其它不作為一種或多種聚合酶模板 的核苷酸或其類似物的組合。此外，本專利技術(shù)中所述探針或引物應(yīng)該是至少大約11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21或22個(gè)連續(xù)核苷酸的長(zhǎng)度，其可以選自5￡〇10勵(lì)：1、5￡〇10 N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4 和 SEQ ID N0:5 中所述的核苷酸。當(dāng)選自 SEQ ID N0:3、 SEQ ID N0:4和SEQ ID N0:5所示的核苷酸時(shí)，所述探針和引物可以為長(zhǎng)度是至少大約21 個(gè)到大約50個(gè)或更多的連續(xù)核苷酸。所述SEQ ID N0:3或其互補(bǔ)序列為轉(zhuǎn)基因玉米事件 DBN9927中在插入序列的5'末端位于插入接合部位附近的一個(gè)長(zhǎng)度為1178個(gè)核苷酸的序 列，所述SEQ ID N0:3或其互補(bǔ)序列由1048個(gè)核苷酸的玉米側(cè)翼基因組DNA序列（SEQ ID NO: 3的核苷酸1-1048)、77個(gè)核苷酸的DBN10124構(gòu)建體DNA序列（SEQ ID NO: 3的核苷酸 1049-1125)和53個(gè)核苷酸的tNos (胭脂堿合成酶）轉(zhuǎn)錄終止子的3'末端DNA序列（SEQ ID N0:3的核苷酸1126-1178)組成，包含所述SEQ ID N0:3或其互補(bǔ)序列即可鑒定為轉(zhuǎn)基 因玉米事件DBN9927的存在。 所述核酸序列可以為所述SEQIDN0:4或其互補(bǔ)序列中轉(zhuǎn)基因插入序列的任何部 分的至少11個(gè)或更多個(gè)連續(xù)多核苷酸（第三核酸序列），或者為所述SEQ ID NO: 4或其互 補(bǔ)序列中3'側(cè)翼玉米基因組DNA區(qū)域的任何部分的至少11個(gè)或更多個(gè)連續(xù)多核苷酸（第 四核酸序列）。所述核酸序列進(jìn)一步可以為同源于或互補(bǔ)于包含完整的所述SEQ ID N0:2 的所述SEQ本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種核酸序列，其特征在于，包括SEQ?ID?NO:3或其互補(bǔ)序列中至少11個(gè)連續(xù)的核苷酸、和/或SEQ?ID?NO:4或其互補(bǔ)序列中至少11個(gè)連續(xù)的核苷酸。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：丁德榮，康越景，張?jiān)浦?/a>，劉海利，龐潔，王利君，賈志偉，黃金存，郭函子，王磊，傅學(xué)乾，周毅，李風(fēng)，鮑曉明，呂玉平，張世平，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司，北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司生物技術(shù)中心，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：北京;11
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