一種高純度土霉素的生產工藝制造技術

本發明專利技術涉及生物制藥工藝技術領域，具體是一種高純度土霉素的生產工藝，其生產工藝流程包括發酵、酸化、純化、過濾、脫色、結晶、干燥七個階段。本發明專利技術在原有工藝的基礎上加以調整、創新，提供了一種高純度土霉素的生產工藝。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物制藥工藝
，具體是一種高純度土霉素的生產工藝。
技術介紹
土霉素又稱為地霉素或氧四環素，英文名稱(TerramycinOxytetracycline)屬于抗菌素的一種，對多種球菌和桿菌有抗菌作用，對立克次體和阿米巴病原蟲也有抑制作用，用來治療上呼吸道感染、胃腸道感染、斑瘆傷寒等，也用于畜禽藥及飼料添加劑。土霉素是通過生物合成得到的廣譜抗生素，目前國內土霉素提取工藝為用草酸(或磷酸)做酸化劑調節PH值，利用黃血鹽-硫酸鋅作凈化劑協同去除蛋白質等高分子雜質，然后用122樹脂脫色進一步凈化土霉素濾液，最后調PH至4.8左右結晶得到土霉素堿產品。此工藝在生產中一直沿用至今，不思創新。但該工藝所得的土霉素收率低，成品純度亦不足，純度僅有96%?97%。
技術實現思路
為了解決上述現有土霉素生產工藝的收率低，成品純度不足的缺點，本專利技術在原有工藝的基礎上加以調節、創新，提供了一種高純度土霉素的生產工藝。本專利技術的技術方案如下:一種高純度土霉素的生產工藝，包括以下步驟: (O發酵:首先培養三支斜面孢子，斜面孢子的培養基是由麩皮和瓊脂組成，用純凈水配制，控制培養基內溫度為36.5?36.8°C，相對濕度為50%?60%，培養時間設置為96?108小時；將制得的三支斜面孢子加入無菌水之后制成培養液，將培養液放置于4V?6V的冰箱中備用； 準備三個自帶有攪拌裝置和溫度自動調節裝置的發酵罐，分別命名為I號、2號、3號，使用前都采用蒸汽滅菌法滅菌；將上述冰箱中的培養液移入I號發酵罐內，設置罐內溫度為30°C，密封I號發酵罐，發酵28?30小時后，將培養液移入2號發酵罐； 設置2號發酵罐罐內溫度為31°C，密封2號發酵罐，發酵28?30小時后，用pH計測量培養液的PH值，若pH值大于6.0，將培養液移入3號發酵罐；否則繼續培養； 設置3號發酵罐罐內溫度為35°C，密封3號發酵罐，發酵80?100小時后，向罐內通入適量氧氣，向培養液內通入15%質量分數的氨水，同時用pH計測量pH值，當pH值大于6.4后，停止通入氨水；之后每隔10小時重復通入氧氣和氨水的操作；發酵150?160小時后，停止通入氧氣和氨水，然后再發酵15個小時，取出培養液； (2)酸化:向培養液中緩慢加入65%質量分數的鹽酸作為酸化劑，添加過程中，用pH計監測培養液的PH值，當pH值穩定在1.6?1.9內，停止加入酸化劑； (3)純化:向培養液中攪拌加入純化劑K2Fe(CN) 6 一 ZnS04，加入純化劑的容積約等于培養液容積的一半，二者反應后，溶液中出現大量蘭綠色絮狀物； (4)過濾:將上述產生沉淀的培養液經粗濾器、精濾器、超濾器三重過濾后，抽濾出凈化濾液，用10%質量分數的稀鹽酸調節pH值在4.8左右； (5)脫色:將上述凈化濾液通入脫色罐，由其中的122-2樹脂進行脫色； (6)結晶:取出上述脫色后的培養液，加入55%質量分數的氫氧化鈉溶液，調節pH值為4.5?4.8，控制培養液溫度在28?30°C;培養液經離心結晶設備連續結晶，控制結晶速度，使結晶時間控制住2?2.5小時，得到土霉素濕成品； (7)干燥:將上述土霉素濕成品經過搖擺機過40目的篩網，制成顆粒后進入三級旋風干燥器中，干燥后得到土霉素成品。所述3號發酵罐中的發酵過程會產生大量泡沫，需加入消沫劑進行消沫。所述I號發酵罐內發酵完成后，培養液趨于濃厚，并轉黃色，培養液的pH值在6.0?6.4內；所述2號發酵罐內發酵完成后，培養液的外觀為深粽色，濃稠狀，有少量氣泡產生。所述發酵過程中的使用三個發酵罐若有條件限制，可以改為使用一個發酵罐，但對應設置三段相同發酵條件的發酵過程。所述酸化過程中加入的酸化劑可以更改為65%質量分數的草酸或磷酸。本專利技術的優點:本專利技術在原有工藝的基礎上加以調整、創新，提供了一種高純度土霉素的生產工藝。【具體實施方式】 為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合具體實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。一種高純度土霉素的生產工藝，包括以下步驟: (O發酵:首先培養三支斜面孢子，斜面孢子的培養基是由麩皮和瓊脂組成，用純凈水配制，控制培養基內溫度為336.8°C，相對濕度為60%，培養時間設置為100小時；將制得的三支斜面孢子加入無菌水之后制成培養液，將培養液放置于6°C的冰箱中備用；若培養基內溫度超過37°C 2小時則生產能力明顯下降，不可用于生產； 準備三個自帶有攪拌裝置和溫度自動調節裝置的發酵罐，分別命名為I號、2號、3號，使用前都采用蒸汽滅菌法滅菌；將上述冰箱中的培養液移入I號發酵罐內，設置罐內溫度為30°C，密封I號發酵罐，發酵30小時后，將培養液移入2號發酵罐；I號罐的罐內生長弱，未使用攪拌裝置； 設置2號發酵罐罐內溫度為31°C，密封2號發酵罐，發酵30小時后，用pH計測量培養液的PH值，若pH值大于6.0，將培養液移入3號發酵罐；否則繼續培養； 設置3號發酵罐罐內溫度為35°C，密封3號發酵罐，發酵100小時后，向罐內通入適量氧氣，向培養液內通入15%質量分數的氨水，同時用pH計測量pH值，當pH值大于6.4后，停止通入氨水；之后每隔10小時重復通入氧氣和氨水的操作；發酵160小時后，停止通入氧氣和氨水，然后再發酵15個小時，取出培養液； (2)酸化:向培養液中緩慢加入65%質量分數的鹽酸作為酸化劑，添加過程中，用pH計監測培養液的PH值，當pH值穩定在1.6?1.9內，停止加入酸化劑；土霉素能和鈣、鎂等金屬離子，某些季胺益、堿等形成復合物沉淀(即不溶性絡合物)，在發酵過程中，當前第1頁1 2 本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種高純度土霉素的生產工藝，其特征在于，包括以下步驟：（1）發酵：首先培養三支斜面孢子,?斜面孢子的培養基是由麩皮和瓊脂組成，用純凈水配制，控制培養基內溫度為36.5～36.8℃，相對濕度為50%～60%，培養時間設置為96～108小時；將制得的三支斜面孢子加入無菌水之后制成培養液，將培養液放置于4～6℃的冰箱中備用；準備三個自帶有攪拌裝置和溫度自動調節裝置的發酵罐，分別命名為1號、2號、3號，使用前都采用蒸汽滅菌法滅菌；將上述冰箱中的培養液移入1號發酵罐內，設置罐內溫度為30℃，密封1號發酵罐，發酵28～30小時后，將培養液移入2號發酵罐；設置2號發酵罐罐內溫度為31℃，密封2號發酵罐，發酵28～30小時后，用pH計測量培養液的pH值，若pH值大于6.0，將培養液移入3號發酵罐；否則繼續培養；設置3號發酵罐罐內溫度為35℃，密封3號發酵罐，發酵80～100小時后，向罐內通入適量氧氣，向培養液內通入15%質量分數的氨水，同時用pH計測量pH值，當pH值大于6.4后，停止通入氨水；之后每隔10小時重復通入氧氣和氨水的操作；發酵150～160小時后，停止通入氧氣和氨水，然后再發酵15個小時，取出培養液；（2）酸化：向培養液中緩慢加入65%質量分數的鹽酸作為酸化劑，添加過程中，用pH計監測培養液的pH值，當pH值穩定在1.6～1.9內，停止加入酸化劑；（3）純化：向培養液中攪拌加入純化劑K2Fe（CN）6－ZnSO4，加入純化劑的容積約等于培養液容積的一半，二者反應后，溶液中出現大量蘭綠色絮狀物；（4）過濾：將上述產生沉淀的培養液經粗濾器、精濾器、超濾器三重過濾后，抽濾出凈化濾液，用10%質量分數的稀鹽酸調節pH值在4.8左右；（5）脫色：將上述凈化濾液通入脫色罐，由其中的122?2樹脂進行脫色；（6）結晶：取出上述脫色后的培養液，加入55%質量分數的氫氧化鈉溶液，調節pH值為4.5～4.8，控制培養液溫度在28～30℃；培養液經離心結晶設備連續結晶，控制結晶速度，使結晶時間控制住2～2.5小時，得到土霉素濕成品；（7）干燥：將上述土霉素濕成品經過搖擺機過40目的篩網，制成顆粒后進入三級旋風干燥器中，干燥后得到土霉素成品。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：任磊，
申請(專利權)人：合肥卓元科技服務有限公司，
類型：發明
國別省市：安徽;34