生成及使用經(jīng)遺傳修飾的非人動物的方法技術(shù)

提供了經(jīng)遺傳修飾的非人動物，其可以用于對人造血細胞形成、功能或疾病建模。經(jīng)遺傳修飾的非人動物包含與IL?6啟動子可操作連接的編碼人IL?6的核酸。在一些例子中，表達人IL?6的經(jīng)遺傳修飾的非人動物還表達人M?CSF、人IL?3、人GM?CSF、人SIRPa或人TPO中至少一種。在一些例子中，經(jīng)遺傳修飾的非人動物是免疫缺陷的。在一些此類例子中，將健康或患病的人造血細胞移入經(jīng)遺傳修飾的非人動物。還提供了在對人造血細胞形成、功能和/或疾病建模中使用主題經(jīng)遺傳修飾的非人動物的方法，及在生成主題經(jīng)遺傳修飾的非人動物和/或?qū)嵤┲黝}方法中得到應用的試劑和試劑盒。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】【專利說明】 關(guān)于得到聯(lián)邦政府資助的研究或開發(fā)的聲明 本專利技術(shù)在由（美國）國家衛(wèi)生研究所（NIH)授予的撥款號5R01CA156689-04下得 到政府支持完成。政府具有本專利技術(shù)的某些權(quán)利。 對相關(guān)申請的交叉引用 按照35U.S.C. § 119(e)，本申請要求2012年11月5日提交的美國臨時專利申請 流水號61/722, 437的申請日的優(yōu)先權(quán)；其全部公開內(nèi)容通過提及收入本文。[000引專利技術(shù)背景 生物醫(yī)學研究的目的是更好地了解人生理學W及使用此知識來預防、治療或治愈 人疾病。由于對人受試者進行實驗的實際和倫理障礙，許多研究是對小型動物模型（諸如 小鼠）進行的。因此，需要該些人疾病的動物模型。 例如，在美國，20, 000名左右的患者每年新診斷為患有多發(fā)性骨髓瘤（MM)， 即一種大多不能治愈的抗體分泌性終末分化B細胞惡性化ideshima等，2007,化t RevCancer. 7:585-98;Kuehl和Bergsagel, 2002,P'JatRevCancer. 2:175-87)。MMW 骨髓炬M)中惡性漿細胞的浸潤為特征，并且臨床表現(xiàn)包括骨疾病、高巧血癥、血細胞 減少癥、腎功能障礙和周圍神經(jīng)病化ideshima等，2007,化tRevCancer. 7:585-98; Kuehl和Bergsagel, 2002,化tRevCancer. 2:175-87)。在大多數(shù)病例中，MM之前有 稱作不確定意義的單克隆丙種球蛋白病（monoclonalgammopathyofundetermined si即ificance,MGU巧的惡性前狀況，其影響3 %左右的年齡大于50歲的人（Landgren 等，2009，Blood113:5412-7)。復雜的異質(zhì)遺傳異常表征匪細胞，包括核型變化及 I巧易位（Kuehl和Bergsagel, 2002,P'JatRevCancer. 2:175-87 ;化an等，2006,Blood 108:2020-8)。認為MGUS中擴充的漿細胞克隆具有與骨髓瘤漿細胞相似的遺傳和表 型概況（Chng等，2005,Blood106:2156-61;化nseca等，2002,Blood100:1417-24; Kaufmann等，2004,Le址emia. 18:1879-82)。雖然已經(jīng)提示細胞周期蛋白D基因中的突變 驅(qū)動MM的形成，但是尚未結(jié)論性地證明其它因素的潛在貢獻炬ergsagel等，2005,Blood 106:296-303)。不過，可遺傳的遺傳變化不是MM細胞行為的唯一決定因素。取而代之，對 藥物的抗性和對細胞因子的異常生物學應答受到與微環(huán)境的相互作用強烈影響，提供開發(fā) 新穎治療學的機會。[000引與許多其它腫瘤一樣，MMW與創(chuàng)建支持性環(huán)境的非惡性基質(zhì)細胞強烈相互作用的 異質(zhì)細胞群體為特征值eRaeve和Vanderkerken, 2005,HistolHistopathol. 20:1227-50 ; Dhodapkar，2009，AmJHematol.84:395-6)。MM細胞的BM微環(huán)境由多種多樣的胞外基質(zhì) 巧CM)及造血和非造血起源兩者的細胞成分組成。雖然BM為正常造血提供受到保護的環(huán) 境，但是匪細胞與ECM蛋白和佐細胞的相互作用在匪發(fā)病機制中發(fā)揮至關(guān)重要的作用 值eRaeve和Vanderkerken, 2005,HistolHistopathol. 20:1227-50 ;Dhodapkar, 2009,Am JHematol. 84:395-6;Hideshima等，2007,P'JatRevCancer. 7:585-98)。基質(zhì)細胞、髓 樣細胞、破骨細胞和成骨細胞生成激活介導匪細胞遷移、存活和生長的信號途徑的生長 因子，諸如白介素6 (IL-6)、B細胞活化因子炬AFF)、成纖維細胞生長因子和基質(zhì)細胞衍 生因子la。特別地，由基質(zhì)細胞、破骨細胞和髓樣細胞生成的IL-6似乎是一種在早期階 段中及對于匪的發(fā)病機制至關(guān)重要的因子值eRaeve和Vanderkerken, 2005,Histol 化stopathol. 20:1227-50)。類似地，在與匪細胞相互作用時，破骨細胞和樹突細胞生 成BAFF和/或增殖誘導配體（APRIL)，提供也提高藥物抗性的抗調(diào)亡信號值eRaeve 和Vanderkerken, 2005,HistolHistopathol. 20:1227-50;Kukreja等，2006,JExp Med. 203:1859-65)。 癌發(fā)病機制中的主要事件（惡性細胞的不受控制的增殖、存活和擴散）取決于微 環(huán)境小生境中存在的支持性細胞類型和可溶性因子的特定組合。小鼠模型在表征人的惡性 轉(zhuǎn)化和疾病的驅(qū)動力的關(guān)鍵方面發(fā)揮重要作用。然而，它們很少表現(xiàn)人疾病的遺傳復雜性 和臨床病理學特征。雖然已經(jīng)廣泛采用將人腫瘤異種移植入免疫受損的小鼠中，但是可靠 的移入通常僅在高度侵入性腫瘤或細胞系的情況中是可行的。 目前可用于培養(yǎng)人腫瘤細胞的最佳模型是缺乏B細胞、T細胞和NK細胞的重 度免疫缺陷小鼠。在匪的情況中，將原代骨髓瘤細胞移入該些小鼠中尚未獲得成功， 但是原代骨髓瘤細胞在共移植入免疫受損的小鼠中時能夠移入人胎兒骨塊（Yaccoby 等，1998,Blood92:2908-13)。在此模型中，MM細胞存在于人骨中，但是在小鼠骨中或在外 圍中檢測不到，該證明了高殘留異種排斥和對人BM微環(huán)境的需要（Yaccoby等，1998,Blood 92:2908-13;Yaccoby和化stein, 1999,Blood94:3576-82)。證明其作為MM的體內(nèi)模型 的潛力，最近證明了NOD/Scid/ 丫 小鼠容許移入數(shù)種MM細胞系值ewan等，2004,Cancer Sci. 95:564-8;Miyakawa等，2004,BiochemBio地ysResCommun. 313:258-62)。然而，由 于不跨越物種屏障但是對于支持轉(zhuǎn)化細胞的生長和存活至關(guān)重要的大量因子，即使那些具 有低異種排斥的小鼠模型具有受到限制的生長環(huán)境（Manz，2007)。容許我們探查腫瘤與其 環(huán)境之間的復雜致病性相互影響的體內(nèi)模型對于設計新的藥物和療法會是至關(guān)重要的。 因此，存在著開發(fā)人源化非人動物和方法W在小鼠中可靠培養(yǎng)和研究人造血細胞 (包括原代人造血系統(tǒng)腫瘤細胞）的未滿足的需要。本專利技術(shù)解決本領(lǐng)域該些未滿足的需要。 [00 1引專利技術(shù)概述 提供了經(jīng)遺傳修飾的非人動物，其可W用于對人造血細胞形成、功能或疾病建模。 經(jīng)遺傳修飾的非人動物包含與IL-6啟動子可操作連接的編碼人IL-6的核酸。在一些例子 中，表達人IL-6的經(jīng)遺傳修飾的非人動物還表達人M-CSF、人IL-3、人GM-CSF、人SIRPa或 人TP0中至少一種。在一些例子中，經(jīng)遺傳修飾的非人動物是免疫缺陷的。在一些此類例 子中，將健康或患病的人造血細胞移入經(jīng)遺傳修飾的非人動物。還提供了在對人造血細胞 形成、功能和/或疾病建模中使用主題經(jīng)遺傳修飾的非人動物的方法，及在生成主題經(jīng)遺 傳修飾的非人動物和/或?qū)嵤┲黝}方法中得到應用的試劑及其試劑盒。 在本專利技術(shù)的各個方面，提供了經(jīng)遺傳修飾的非人動物，經(jīng)遺傳本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種經(jīng)遺傳修飾的非人動物，其包含：與IL?6啟動子可操作連接的編碼人IL?6的核酸，和至少一種選自下組的別的核酸：i)與SIRPa啟動子可操作連接的編碼人SIRPa的核酸，其中該核酸是隨機整合入非人動物的基因組中的；ii)與M?CSF啟動子可操作連接的編碼人M?CSF的核酸；iii)與IL?3啟動子可操作連接的編碼人IL?3的核酸；iv)與GM?CSF啟動子可操作連接的編碼人GM?CSF的核酸；和v)與TPO啟動子可操作連接的編碼人TPO的核酸。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：R·弗拉維爾，T·施特羅維希，M·G·曼茨，C·博爾索蒂，M·多達普卡，A·J·墨菲，S·史蒂文斯，G·D·雅克波羅斯，
申請(專利權(quán))人：再生元制藥公司，耶魯大學，生物醫(yī)學研究院，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US