本發明專利技術涉及一種潔麗香菇多糖蛋白復合物及其制備方法及其應用，屬于天然藥物開發領域。將潔麗香菇菌種接種于種子培養基內，培養14～16d，制得一級種子液，將該一級種子液以10-20％接種量接入發酵培養基中，發酵條件為：溫度24-26℃，轉速140-160r/min，培養7-8d后，離心，轉速5000r/min-8000r/min，收集上清液，將粗多糖蛋白復合物發酵液旋轉蒸發濃縮至原體的1/10-1/8，加入3-5倍體積無水乙醇4℃沉淀12～16h，離心10-20min,轉速3000-5000r/min，收集沉淀，45-50℃干燥。本發明專利技術可以提高正常小鼠脾淋巴細胞數量、血清中細胞因子數、免疫抑制小鼠抗體生成細胞數量和血清血溶素含量，且可改善正常小鼠和免疫抑制小鼠T淋巴細胞亞群CD4+/CD8+比值。該多糖還可以有效抑制H22，S180荷瘤小鼠腫瘤生長。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于天然藥物開發領域，涉及一種從潔麗香菇發酵液中提取具有免疫調 節、抗腫瘤復合物的方法及其應用。
技術介紹
惡性腫瘤是當今世界嚴重威脅人類生命和健康的惡性疾病之一，近年來惡性腫瘤 的發生率呈逐年上升趨勢，死亡率居各疾病之首。據世界衛生組織統計，2008年死于腫瘤疾 病的人數達到760萬人。目前，死亡率仍不斷上升，專家估計到2030年死亡人數可能會達 到1310萬人。因此，對惡性腫瘤的防治已成為生命科學領域的重要課題。 目前，臨床上治療惡性腫瘤的主要手段是手術切除以及放療和化療等方法。然而， 手術無法在根本上殺死腫瘤細胞。放療和化療在殺傷患者體內腫瘤細胞的同時也會破壞機 體的正常細胞和組織，具有較大毒副作用。因此，尋找一種治療效果好，毒副作用少的天然 抗腫瘤藥物成為當務之急。食藥用菌是一類十分重要的天然藥物資源。研宄表明，食藥用 菌中含有多糖、蛋白、黃酮等多種活性物質，具有提高機體免疫力、抗腫瘤、抗氧化等多種藥 理學作用。潔麗香葫（Lentinus lepideus (Fr.) Fr.)，另Ij名豹皮香葫，隸屬于擔子菌門、傘菌 綱、多孔目、多孔科、香菇屬是一種重要的食藥用菌。研宄表明，潔麗香菇具有抗氧化和免疫 調節活性，然而其抗腫瘤成分及其抗腫瘤作用尚未被發現和報道。
技術實現思路
本專利技術提供。 本專利技術采取的技術方案是： ( -）發酵：將潔麗香菇菌種接種于種子培養基內，培養條件為：溫度24-26?，轉 速140-160r/min，培養14~16d，制得一級種子液，將該一級種子液以10-20%接種量接 入發酵培養基中，發酵條件為：溫度24-26°C，轉速140-160r/min，培養7-8d后，離心，轉速 5000r/min-8000r/min，收集上清液獲得粗多糖蛋白復合物發酵液； (二）提取：將粗多糖蛋白復合物發酵液旋轉蒸發濃縮至原體的1/10-1/8,加入 3-5倍體積無水乙醇4°C沉淀12~16h，離心10-20min，轉速3000-5000r/min，收集沉淀， 45-50°C干燥，即得。 所述的種子培養基組成為：玉米粉7-10%、葡萄糖2-3%、蛋白胨0.2-0. 4%、酵母 浸粉 0· 2-0. 4%、K2PO4O. 15-0. 20%、MgSO4O. 1-0.1 S^JB10.0 1-0. 02%。 所述的發酵培養基組成為：玉米粉7-10%、乳糖3-5%、蛋白胨0. 3-0. 5%、酵母浸 粉 0· 3-0. 5%、K2PO4O. 15-0. 20%、MgS040. 075-0. 01-0. 02%。 本專利技術通過苯酚-硫酸法測定其中多糖含量為30% -48%，通過考馬斯亮藍法測 定蛋白含量為7. 14-10%。 所述的一種潔麗香菇多糖蛋白復合物在制備免疫調節劑和抗腫瘤藥物中的應用。 所述的一種潔麗香菇多糖蛋白復合物在制備提高正常小鼠脾淋巴細胞數量、血清 中細胞因子數、免疫抑制小鼠抗體生成細胞數量和血清血溶素含量，且可改善正常小鼠和 免疫抑制小鼠 T淋巴細胞亞群⑶47⑶8+比值的藥物中的應用。 所述的一種潔麗香菇多糖蛋白復合物在制備有效抑制H22, S180荷瘤小鼠腫瘤生 長的藥物中的應用。 本專利技術的積極效果在于：從潔麗香菇發酵液中發現了一種尚未報道過的新的多糖 蛋白復合物，可以提高正常小鼠脾淋巴細胞數量、血清中細胞因子數、免疫抑制小鼠抗體生 成細胞數量和血清血溶素含量，且可改善正常小鼠和免疫抑制小鼠 T淋巴細胞亞群CD4+/ ⑶8+比值。該多糖還可以有效抑制H22，S180荷瘤小鼠腫瘤生長。該潔麗香菇多糖蛋白復 合物對于新的天然無毒副作用的抗腫瘤藥物的開發提供了重要研宄基礎。【附圖說明】 圖1是本專利技術潔麗香菇多糖蛋白復合物對脾淋巴細胞增殖的影響圖。【具體實施方式】 實施例1 ( -）發酵：將潔麗香菇菌種接種于種子培養基內，培養條件為：溫度24°C，轉速 140r/min，培養16d，制得一級種子液，將該一級種子液以10 %接種量接入發酵培養基中， 發酵條件為：溫度24°C，轉速140r/min，培養9d后，離心，轉速5000r/min，收集上清液獲得 粗多糖蛋白復合物發酵液； (二）提取：將粗多糖蛋白復合物發酵液旋轉蒸發濃縮至原體的1/10,加入3倍體 積無水乙醇4°C沉淀12h，離心10min,轉速3000r/min，收集沉淀，45°C干燥，即得； 所述的種子培養基組成為：玉米粉7%、葡萄糖2%、蛋白胨0.2%、酵母浸粉 0. 2%, K2PO4O. 15%,MgSO4O. ^,VB10.0 1% ； 所述的發酵培養基組成為：玉米粉7 %、乳糖3 %、蛋白胨0. 3 %、酵母浸粉0. 3 %、 K2PO4O. 15%、MgSO4O. OTS^JB10.0 1%，其余為水。 實施例2 (一）發酵：將潔麗香菇菌種接種于種子培養基內，培養條件為：溫度25°C，轉速 150r/min，培養15d，制得一級種子液，將該一級種子液以15 %接種量接入發酵培養基中， 發酵條件為：溫度25°C，轉速150r/min，培養9d后，離心，轉速6500r/min，收集上清液獲得 粗多糖蛋白復合物發酵液； (二）提取：將粗多糖蛋白復合物發酵液旋轉蒸發濃縮至原體的1/9,加入4倍體 積無水乙醇4°C沉淀14h，離心15min,轉速4000r/min，收集沉淀，47. 5°C干燥，即得； 所述的種子培養基組成為：玉米粉8. 5%、葡萄糖2. 5%、蛋白胨0. 3%、酵母浸粉 0. 3%, K2PO4O. 18%,MgSO4O. 13%, VB10.0 15% ； 所述的發酵培養基組成為：玉米粉8. 5%、乳糖4%、蛋白胨0.4%、酵母浸粉 0· 4%、K2PO4O. 18%、MgSO4O. OSS^JB10.0 15%，其余為水。 實施例3 (一）發酵：將潔麗香菇菌種接種于種子培養基內，培養條件為：溫度26°C，轉速 160r/min，培養14d，制得一級種子液，將該一級種子液以20 %接種量接入發酵培養基中， 發酵條件為：溫度26°C，轉速160r/min，培養7d后，離心，轉速8000r/min，收集上清液獲得 粗多糖蛋白復合物發酵液； (二）提取：將粗多糖蛋白復合物發酵液旋轉蒸發濃縮至原體的1/8,加入5倍體 積無水乙醇4°C沉淀16h，離心20min,轉速5000r/min，收集沉淀，50°C干燥，即得； 所述的種子培養基組成為：玉米粉10%、葡萄糖3%、蛋白胨0.4%、酵母浸粉 0. 4%, K2PO4O. 20%,MgSO4O. 15%, VB10.0 2% ； 所述的發酵培養基組成為：玉米粉10%、乳糖5%、蛋白胨0.5%、酵母浸粉0.5%、 K2PO4O. 20 %、MgSO40.0 1 %、VB10.0 2 %，其余為水。 通過苯酚-硫酸法測定其中多糖含量為30 % -48 %，通過考馬斯亮藍法測定蛋白 含量為7. 14-10%。 下邊通過具體試驗例來進一步說明本專利技術的效果 試驗例1 小鼠脫頸處死，浸泡于75%乙醇中消毒5min，超凈工作臺內無菌取出脾臟，剔除 周圍的結締組織和筋膜，將脾放置于盛有預冷RPMI-1640培養液的平皿中，過200目篩網， 用針芯輕輕本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種潔麗香菇多糖蛋白復合物，其特征在于它是由下列方法得到的：(一)發酵：將潔麗香菇菌種接種于種子培養基內，培養條件為：溫度24?26℃，轉速140?160r/min，培養14～16d，制得一級種子液，將該一級種子液以10?20％接種量接入發酵培養基中，發酵條件為：溫度24?26℃，轉速140?160r/min，培養7?9d后，離心，轉速5000r/min?8000r/min，收集上清液獲得粗多糖蛋白復合物發酵液；(二)提取：將粗多糖蛋白復合物發酵液旋轉蒸發濃縮至原體的1/10?1/8，加入3?5倍體積無水乙醇4℃沉淀12～16h，離心10?20min,轉速3000?5000r/min，收集沉淀，45?50℃干燥，即得。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王琦，王瑞，劉洋，魏巍，朱相楊，朱宴妍，
申請(專利權)人：吉林農業大學，
類型：發明
國別省市：吉林;22
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