本發明專利技術涉及新穎乙型肝炎病毒(HBV)和/或丁型肝炎病毒(HDV)受體及其用于開發易受HBV和/或HDV感染且可用于免疫學研究和/或用于篩選藥物、進入后限制因子和宿主依賴因子的細胞、細胞系和非人動物的用途。其進一步涉及所述受體用于鑒定可用于治療HBV和/或HDV感染的化合物的用途。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】【專利說明】HBV和/或HDV易感細胞、細胞系和非人動物的開發 本專利技術涉及新穎乙型肝炎病毒（HBV)和/或丁型肝炎病毒（HDV)受體及其用于開 發易受HBV和/或HDV感染且可用于免疫學研宄和/或用于篩選藥物、進入后限制因子和 宿主依賴因子的細胞、細胞系和非人動物的用途。其進一步涉及所述受體用于鑒定可用于 治療HBV和/或HDV感染的化合物的用途。 人乙型肝炎病毒（HBV)引起急性和慢性肝臟感染。3. 5億人持續感染（Cornberg 等人，fesiroefliero/ iT/eio/ 2010，56 (4)，451-465)。慢性乙型肝炎仍將是一 個主要的全球健康問題，盡管有疫苗可用。治療（IFNa和五種核苷類似物）是有限的，且 主要是非治愈性的。 HBV是嗜肝DNA病毒科的成員。嗜肝DNA病毒是最小的包膜DNA病毒，其經由pgRNA 中間體的逆轉錄復制。在裝配過程中，核衣殼獲取稱為大（L)、中（M)和小（S)的三種病毒 包膜蛋白。它們被編碼在一個開放閱讀框中，并且共享對于膜錨定所需的S結構域。除了 S-結構域以外，M含有55個氨基酸的N端親水性延伸（preS2)，而L進一步延伸107、117 或118個氨基酸（基因型依賴性），被稱為preSl (Urban, /7Witfre KiroJr. 2008，3(3)， 253-264)。丁型肝炎病毒（HDV)是利用HBV包膜蛋白用于進入肝細胞的衛星擬病毒。已知 L的肉豆蔻酰化的preSl-結構域在HBV和HDV感染性中發揮關鍵作用。 嗜肝DNA病毒顯示顯著的物種特異性。小鼠和大鼠對于HBV是抗感染的事實 已歸因于缺乏一種或多種進入因子或存在進入后限制因子（post-entry restriction factor)。由于將質粒編碼的HBV-基因組遞送至非易感物種的肝細胞促進病毒體分泌，所 以假設宿主約束條件與早期感染事件相關。HBV的另一個特點是在體內選擇性感染肝細胞 的效力。物種特異性和非凡的肝臟向性與HBV感染的早期步驟（例如，特異性受體識別） 相關的假說是有吸引力的。 目前，只有原代人（PHH)、原代緬甸樹_ (tupeia belangeri) (PTH)肝細胞和分化 的H印aRG細胞支持完整的HBV復制周期。后者是DMSO處理后能夠分化成PHH樣細胞的肝 祖細胞系。原代小鼠（PMH)和原代大鼠肝細胞（PRH)對于HBV是抗感染的。因此，小鼠和 大鼠既不支持從頭HBV感染，也不支持病毒傳播。（具有免疫能力的）小動物模型的缺乏 是HBV研宄的一個主要障礙，所述HBV研宄要求闡明潛在的分子限制因子。其導致開發替 代系統，如具有超長（over-length) HBV基因組的整合物的HBV轉基因小鼠，或免疫缺陷的 PHH移植的uPA/Scid小鼠。 本專利技術人先前已經鑒定了 HBV L-蛋白衍生的脂肽，其阻斷HBV和HDV感染PHH 和 H印aRG 細胞（Gripon 等人，/Kiro/ 2005，79(3)，1613-1622; Schulze 等人，/ Kiro/ 2010，84(4)，1989-2000; TO 2009/092611 Al)。它們代表了 HBV 的 preSl-結構 域的N-端47個氨基酸（HBVpreS/2-48_)，并且包括天然存在的肉豆蔻酸修飾。由于細胞 與^3\^^3/2-48_預孵育阻斷感染，因此它們據推測針對受體（address a receptor)，然 而，所述受體是迄今未知的。 因此，本專利技術的一個目標是鑒定負責這些HBV L-蛋白衍生脂肽的結合的受體。 本專利技術的一個進一步目標是開發通過表達所述受體易受HBV和/或HDV感染的細 胞和細胞系。 本專利技術的又一個進一步目標是提供易受HBV和/或HDV感染的非人轉基因動物。 此類轉基因細胞、細胞系和動物然后可用于免疫學研宄和/或用于篩選藥物、進 入后限制因子和宿主依賴因子（host dependency factor)。此外，新鑒定的受體可用于鑒 定可用于治療HBV和/或HDV感染的進一步化合物。 本專利技術的目標通過乙型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受體解決，所述乙 型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受體具有 (a) SEQ ID NO: 1代表的氨基酸序列，或 (b) 包含以下的氨基酸序列， SEQ ID NO:2或與SEQ ID NO:2至少90%、優選至少91%、更優選至少92%相同的氨 基酸序列，和 具有通式Pro-Tyr-X-Gly-Ile 的氨基酸序列，其中X選自Lys、Arg和 Val0 本專利技術的目標還通過乙型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受體解決，所述 乙型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受體具有 (a) SEQ ID NO: 1代表的氨基酸序列，或 (b) 包含以下的氨基酸序列， SEQ ID NO:2或與SEQ ID NO:2至少90%、優選至少91%、更優選至少92%相同的氨 基酸序列，和 在對應于SEQ ID NO: 1的氨基酸158的位置具有Gly或在對應于SEQ ID NO: 1的氨基 酸158和159的位置具有序列Gly-IIe。 SEQ ID N0:1是人牛磺膽酸鈉協同轉運多肽NTCP/SLC10A1。 在本專利技術的優選實施方案中，"SEQ ID NO: 1代表的氨基酸序列"是指與SEQ ID NO :1至少90%、優選至少91%、更優選至少92%、更優選至少95%或99%相同或與SEQ ID NO: 1相同的氨基酸序列。 所述氨基酸序列（b)優選包含兩個區域或結構域： (1) 包含人NTCP的氨基酸265至291 (或具有至少90、91或92%同一性的序列）的區 域或結構域 QL：：HT i LNvAfr VIG?Lr'f r'rLLYH , 其中X選自K、R和V。 在一個實施方案中，所述氨基酸序列（b)的區域或結構域（2)包含（至少） -Gly，其在對應于SEQ ID NO: 1的氨基酸158的位置， 諸如在具有通式PYXGI 的氨基酸序列中； 或 -包含或具有在對應于SEQ ID NO: 1的氨基酸158和159的位置的序列Gly-Ile， 諸如在具有通式PYXGI 的氨基酸序列中。 在一個實施方案中，所述氨基酸序列（b)不包含多于450個氨基酸，優選不多于 400個氨基酸。 在一個實施方案中，所述氨基酸序列（b)進一步包含氨基酸序列 Gly-Mei-Ilc-IIe-Ilc-l.w-Lcu [SIiQ II) NO: 1。 在該實施方案中，所述氨基酸序列（b)包含三個區域或結構域： (1) 包含人NTCP的氨基酸265至291 (或具有至少90、91或92%同一性的序列）的區 域或結構域 Cl'心 S T 了 I ,N YA F P P F'V 1： G F: L FFF PI ,I { SEQ JD NO； 2]； (2) 包含具有以下通式的氨基酸序列的區域或結構域 PrXGl fSEQiDNO: 11], 其中X選自K、R和V。 (3)包含以下氨基酸序列的區域或結構域 G^TIILL 。 本專利技術的目標還通過如上定義的具有選自SEQ ID NO: 1和SEQ ID N0:3至8本文檔來自技高網...
【技術保護點】
乙型肝炎病毒(HBV)或丁型肝炎病毒(HDV)受體，其具有(a)?SEQ?ID?NO:1代表的氨基酸序列，其是與SEQ?ID?NO:1至少90％相同的氨基酸序列，或(b)?包含以下的氨基酸序列 SEQ?ID?NO:2或與SEQ?ID?NO:2至少90％相同的氨基酸序列，和 具有通式Pro?Tyr?X?Gly?Ile的氨基酸序列，其中X選自Lys、Arg和Val。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：S厄班，倪翼，
申請(專利權)人：海德堡呂布萊希特卡爾斯大學，
類型：發明
國別省市：德國;DE
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