一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌，該小麥蒼白桿菌以保藏編號(hào)CGMCC?No.?10665保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。本發(fā)明專利技術(shù)的可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌菌株，可以利用林可霉素為唯一碳源生長(zhǎng)，該菌株對(duì)林可霉素的降解能力在24小時(shí)以內(nèi)可達(dá)到100%。可將該菌株用于林可霉素工業(yè)生產(chǎn)中發(fā)酵菌渣的無(wú)害化處理，該處理方法高效，綠色環(huán)保，節(jié)約資源，處理成本低，徹底消除了林可霉素廢菌絲對(duì)環(huán)境的不利影響。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌
本專利技術(shù)涉及微生物
，尤其是涉及一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌。
技術(shù)介紹
林可霉素(lincomycin)是一種由林肯鏈霉菌產(chǎn)生的堿性廣譜抗生素，其廣泛用于治療由革蘭氏陽(yáng)性菌引發(fā)的炎癥。目前工業(yè)上林可霉素的生產(chǎn)主要是用淀粉、玉米漿、豆餅粉等為培養(yǎng)基，經(jīng)鏈霉菌發(fā)酵、萃取、純化而成。該發(fā)酵液經(jīng)預(yù)處理進(jìn)行固液分離后形成的副產(chǎn)物菌絲部分即為生產(chǎn)廢渣，該生產(chǎn)廢渣中含有林可霉素殘留以及粗蛋白、纖維素和粗脂肪等。由于廢渣中殘留林可霉素的理化性質(zhì)穩(wěn)定，具有長(zhǎng)期的殘留性、生物蓄積性，其進(jìn)入生物鏈后容易引起生物耐藥性等各種安全隱患。根據(jù)目前國(guó)際及國(guó)內(nèi)法律法規(guī)規(guī)定，菌渣只能按照危險(xiǎn)廢物標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行焚燒，這樣不但會(huì)對(duì)環(huán)境造成一定程度的破壞，同時(shí)會(huì)造成糧食資源的浪費(fèi)以及相關(guān)企業(yè)生產(chǎn)成本的提高。國(guó)內(nèi)每年產(chǎn)生的林可霉素菌渣能達(dá)到15000噸以上，廢渣(濕菌體)中林可霉素殘留含量約為0.2-0.5g/kg。而現(xiàn)有技術(shù)中沒(méi)有對(duì)菌渣中殘留的林可霉素進(jìn)行無(wú)害化處理的方法，因此，如何利用綠色環(huán)保的手段對(duì)菌渣中殘留林可霉素進(jìn)行適當(dāng)無(wú)害化處理并進(jìn)行有效利用，成為相關(guān)行業(yè)的技術(shù)難題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌，其具有高效降解林可霉素的能力，可對(duì)林可霉素的發(fā)酵菌株進(jìn)行無(wú)害化處理，具有綠色環(huán)保，節(jié)約能源，成本低的優(yōu)點(diǎn)。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本專利技術(shù)提供一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌，該小麥蒼白桿菌以保藏編號(hào)CGMCCNo.10665保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例中，所述小麥蒼白桿菌在富集培養(yǎng)基上形成的菌落特征為：圓形，淡黃色，粘稠，表面光滑，邊緣整齊，直徑為0.5-0.7mm；菌體特征為：革蘭氏陰性，菌體短桿狀，大小約為0.4μm×0.6-1.5μm，成對(duì)或成堆排列。本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例中，所述小麥蒼白桿菌的氧化酶、脲酶陽(yáng)性；鳥(niǎo)氨酸、精氨酸脫羧酶陰性；蜜二糖、阿拉伯糖發(fā)酵陰性。本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例中，所述小麥蒼白桿菌可以林可霉素為唯一碳源生長(zhǎng)。本專利技術(shù)提供一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌，其通過(guò)誘變或遺傳轉(zhuǎn)化上述所述的小麥蒼白桿菌得到。本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例中，所述的小麥蒼白桿菌16SrDNA的全部堿基序列如SEQUENCELISTING所示。本專利技術(shù)還提供一種可降解林可霉素的細(xì)胞級(jí)分，其通過(guò)上述所述的小麥蒼白桿菌獲得。本專利技術(shù)的有益效果為：本專利技術(shù)的可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌菌株，其可以利用林可霉素為唯一碳源生長(zhǎng)，該菌株對(duì)林可霉素的降解能力在24小時(shí)以內(nèi)可達(dá)到100％。可將該菌株用于林可霉素工業(yè)生產(chǎn)中發(fā)酵菌渣的無(wú)害化處理，該處理方法高效、綠色環(huán)保，節(jié)約資源，處理成本低，徹底消除了林可霉素廢菌絲對(duì)環(huán)境的不利影響。附圖說(shuō)明圖1為本專利技術(shù)的可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌的菌體形態(tài)圖。具體實(shí)施方式本專利技術(shù)的小麥蒼白桿菌菌株(Ochrobactrumtritici)，其為可高效降解抗生素林可霉素的降解菌，該菌株編號(hào)為KDSP-J0105，該菌株于2015年3月25日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏單位的地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。其保藏號(hào)為CGMCCNo.10665。本專利技術(shù)的小麥蒼白桿菌(Ochrobactrumtritici)菌株，具有高效降解林可霉素的能力，能夠?qū)Πl(fā)酵工業(yè)產(chǎn)生的菌絲體中的林可霉素進(jìn)行有效降解，以消除林可霉素廢菌絲中抗生素殘留，可用于林可霉素工業(yè)生產(chǎn)中發(fā)酵菌渣的無(wú)害化處理，為菌絲的無(wú)害化處理提供了有效的途徑。其中，小麥蒼白桿菌菌株通過(guò)誘變或遺傳轉(zhuǎn)化篩選得到的降解林可霉素突變菌株，該突變菌株至少保留了降解林可霉素的特性，其包括通過(guò)小麥蒼白桿菌菌株的插入突變、整合突變等得到的突變體。其次，本專利技術(shù)通過(guò)小麥蒼白桿菌菌株或者誘變、遺傳轉(zhuǎn)化的得到的可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌菌株的突變菌株得到的細(xì)胞級(jí)分。該細(xì)胞級(jí)分包括從上述菌株的培養(yǎng)物中得到的DNA制備物或者細(xì)菌壁制備物、上述菌株的得到的培養(yǎng)液，這些培養(yǎng)液的上清液以及該上清液的級(jí)分。該細(xì)胞級(jí)分具有降解林可霉素的作用。以及組合物包括小麥蒼白桿菌菌株，可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌菌株的突變菌株以及它們的細(xì)胞分級(jí)的培養(yǎng)液。下面通過(guò)具體實(shí)施例，進(jìn)一步說(shuō)明本專利技術(shù)實(shí)現(xiàn)的詳細(xì)過(guò)程。實(shí)施例1小麥蒼白桿菌菌株的篩選。步驟一：從石家莊一抗生素企業(yè)周邊采集污泥10g，接種到含有20mg林可霉素的100mL無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，于30℃，200rpm搖床震蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)開(kāi)始后每7天轉(zhuǎn)接一次，轉(zhuǎn)接時(shí)以10％(V/V)的接種量轉(zhuǎn)接到較高濃度的含林克霉素的培養(yǎng)基中，林克霉素的含藥濃度依次為20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L、依次類推，至640mg/L，得到不同濃度的含有菌體的富集培養(yǎng)液。其中，本專利技術(shù)中的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基的組成及配比為(g/L)：K2HPO41.6g，KH2PO40.4g，MgSO4·7H2O0.2g，CaCl2·2H2O0.025g，F(xiàn)eCl3·6H2O0.0023，NH4NO30.5g，瓊脂18.0g，用1mol/LHCL或NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0，121℃高壓滅菌30min。本專利技術(shù)中的富集培養(yǎng)基的組成及配比為(g/L)：蔗糖20.0g，瓊脂18.0g，20％馬鈴薯浸出液1000mL，調(diào)pH值至7.0，121℃高壓滅菌30min。步驟二：取0.1mL步驟一中含有細(xì)菌的富集培養(yǎng)液涂布到相應(yīng)含藥濃度的選擇平板上，30℃，培養(yǎng)48小時(shí)。得到一株生長(zhǎng)速度最快且菌落周圍出現(xiàn)明顯透明圈的菌株，將該菌株接種到含有20mg/L林可霉素的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基上，菌落周圍可出現(xiàn)清晰的透明圈，將該菌株編號(hào)為KDSP-J-0105。請(qǐng)配合參閱圖1所示，該編號(hào)為KDSP-J-0105菌株的主要生物學(xué)特性為：該菌株在富集培養(yǎng)基上形成的菌落為圓形，淡黃色，粘稠，表面光滑，邊緣整齊，直徑為0.5-0.7mm；該菌株的菌體特征為：革蘭氏陰性，菌體短桿狀，大小約為0.4μm×0.6-1.5μm，成對(duì)或成堆排列。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)定，該編號(hào)為KDSP-J-0105菌株的氧化酶、脲酶陽(yáng)性，鳥(niǎo)氨酸、精氨酸脫羧酶陰性，蜜二糖、阿拉伯糖發(fā)酵陰性。步驟三：通過(guò)液相色譜法測(cè)定在無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，該菌株對(duì)林可霉素具有降解能力。培養(yǎng)液中菌體的含量為每毫升培養(yǎng)液中108個(gè)，林可霉素的濃度為20mg/L，于30℃，200rpm搖床震蕩培養(yǎng)1天，經(jīng)測(cè)定，林可霉素的降解率為100％。同時(shí)，該菌株與發(fā)酵菌渣共培養(yǎng)一周，采用液相色譜法測(cè)定，該菌株對(duì)林可霉素的降解率可達(dá)到100％。實(shí)驗(yàn)證明，降解溶液體系為無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基，KDSP-J-0105菌株在pH7.0-8.0，溫度30至40℃生長(zhǎng)良好，能以林可霉素為唯一碳源生長(zhǎng)，是一株很有潛力的降解菌。測(cè)定該菌株的16SrDNA的序列，將該測(cè)定的16SrDNA序列與Genebank登錄號(hào)為KP341765的16SrDNA的基因序列進(jìn)行同源性分析。首先，采用DNA小量提取方法提取KDSP-J-0105菌株的總DNA。采用16SrRNA通用引物27F-1492R擴(kuò)增其16SrRNA基因序列，將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行測(cè)序(測(cè)序結(jié)果見(jiàn)序列表中SEQUENCELISTING)，將獲得的16S本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌，其特征在于，該小麥蒼白桿菌以保藏編號(hào)CGMCC?No.10665保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌，其特征在于，該小麥蒼白桿菌（Ochrobactrumtritici）以保藏編號(hào)CGMCCNo.10665保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可降解林可霉素的小麥蒼白桿菌，其特征在于，所述小麥蒼白桿菌在富集培養(yǎng)基上形成的菌落特征為：圓形，淡黃色，粘稠，表面光滑，邊緣整齊，直徑為0.5-0.7mm；菌體特征為：革蘭氏陰性，菌體短桿狀，大小為0.4μm×0.6-1.5μm，成對(duì)或成堆排列。3.根據(jù)權(quán)利要求1所...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉守信，王鵬，焦有景，馮娟，黃凈，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：河北科技大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：河北;13