一種百兩金皂苷B原料或其制劑的檢測方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種百兩金皂苷B原料或其制劑的檢測方法，該方法采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ELSD)測定活性成分百兩金皂苷B的含量，從而使百兩金皂苷B原料及其制劑的內(nèi)在質(zhì)量能夠得到有效控制。該方法線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率、耐受性等均符合定量分析要求。利用該方法首次測定了百兩金皂苷B原料及其制劑的含量，為百兩金皂苷B的新藥開發(fā)研究提供了新的檢測方法。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于醫(yī)藥
，設(shè)及藥品的質(zhì)量控制方法，具體是指百兩金皂巧B原 料或其制劑的分析檢測方法。
技術(shù)介紹
百兩金皂巧B的化學(xué)名稱為西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2) - 0 -D-葡萄 化喃糖-(1 一 4) - -a 阿拉伯化喃糖巧，是存在于紫金牛 科紫金牛屬植物百兩金、朱砂根、紅毛走馬胎等多種植物中的有效成分，具有細(xì)胞毒活性和 抗腫瘤、抗炎等藥理作用。在深入研究開發(fā)該活性成分的過程中，需要將其提取制備成含量 大于90%的中藥1類新藥原料，并進(jìn)而制備成制劑。目前未見百兩金皂巧B原料藥及其制 劑的定量分析方法，為深入探討本品的成藥性及藥理活性，我們從該藥材中提取分離得到 百兩金皂巧B單體，并按照對照品研究技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行了純化及結(jié)構(gòu)鑒定。本專利技術(shù)采用 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD)建立起百兩金皂巧B原料或其制劑的定量 分析方法，為進(jìn)一步的深入研究和新藥開發(fā)提供新的分析手段和參考數(shù)據(jù)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供一種使用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC-ELSD)測定百兩金 皂巧B原料或其制劑的定量分析方法，其特征在于W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；W 體積比為30 : 70~40 : 60己膳-水為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按百 兩金皂巧B計算不得低于5000 ;其主要步驟包括色譜系統(tǒng)適用性試驗、對照品和樣品溶液 制備、進(jìn)樣分析測定并計算含量。 根據(jù)前述的檢測方法，其中，所述百兩金皂巧B原料采用如下方法制備：將百兩金 粉碎，用50 %~80 %的己醇提取，將提取液減壓濃縮，上大孔吸附樹脂，分別用水和30 %己 醇沖洗除雜，再用80%己醇洗脫，洗脫液減壓濃縮干燥，上硅膠柱層析，W體積比為70 : 30 的己酸己醋-甲醇洗脫，合并富含百兩金皂巧B的流份，除去溶劑，甲醇重結(jié)晶，干燥、即得； 其制劑為百兩金皂巧B原料用常規(guī)工藝制備而成的膠囊或片劑。 根據(jù)前述的檢測方法，其中，所述百兩金皂巧B對照品是采用制備型高效液相色 譜儀對百兩金皂巧B原料進(jìn)行分離純化而得，其制備的色譜條件為；W十八烷基硅烷鍵合 硅膠為填充劑；體積比為60 : 40~70 : 30的甲醇-水為流動相；在205皿波長下監(jiān)測； 其供試品采用制備液相使用的流動相配制成飽和溶液，取上清液進(jìn)樣，收集目標(biāo)峰流出液， 濃縮、干燥、檢查純度，即得。 根據(jù)前述的檢測方法，其中，所述百兩金皂巧B原料或其制劑的供試品溶液是用 50 %~70 %的甲醇或己醇水溶液作為溶劑提取。[000引根據(jù)前述的檢測方法，其中，所述采用HPLC-ELSD法測定百兩金皂巧B原料或其制 劑含量的方法包括如下步驟和優(yōu)化條件： 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VID)測定： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；己膳-水 (35 : 65)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按百兩金皂巧B計算不得低于 4000。 對照品溶液制備取百兩金皂巧B對照品適量，精密稱定，加50 %甲醇制成每1ml含 0. 3mg的百兩金皂巧B對照品溶液，即得。[001引供試品溶液制備取百兩金皂巧B原料30mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加入50% 己醇適量，超聲處理使溶解，用50 %己醇稀釋至刻度，搖勻，過濾或離屯、，取續(xù)濾液或上清 液，即得。[001引測定方法分別精密吸取對照品溶液5yL、20yL;供試品溶液10yL;注入液相色 譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得。 本專利技術(shù)所提供的百兩金皂巧B原料或其制劑中百兩金皂巧B含量的HPLC-ELSD檢 測方法具有如下優(yōu)點： (1)本專利技術(shù)提供的方法首次引入了百兩金皂巧B原料或其制劑中有效成分百兩金 皂巧B的含量測定，從而使百兩金皂巧B的質(zhì)量控制方法更加科學(xué)合理； (2)本專利技術(shù)所提供的的百兩金皂巧B原料或其制劑的分析方法首次將HPLC-ELSD 法用于百兩金皂巧B原料或其制劑中活性成分百兩金皂巧B的含量測定，具有良好的線性 關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、耐受性和回收率，測定簡便快速。【附圖說明】 圖1為百兩金皂巧B對照品溶液的HPLC-ELSD色譜圖； 圖2為百兩金皂巧B原料的HPLC-ELSD色譜圖； 圖3為百兩金皂巧B膠囊的HPLC-ELSD色譜圖。【具體實施方式】 1儀器、試藥與樣品 高效液相色譜儀（美國安捷倫1100系列），包括在線真空脫氣機(jī)佑1322A)， 四元梯度累佑1311A)，自動進(jìn)樣器佑1313A)，柱溫箱佑1316A)，DAD檢測器佑1314A)， 化emstation色譜工作站；Alltec證LSD2000型蒸發(fā)光散射檢測器；制備型高效液相色譜 儀（美國貝克曼庫爾特肥CHMAN125P型），包含SYSTEMGOLD125PSolventModule和16化 Detector等；Milli-Q超純水器（美國Milipore公司）；Microfuge18臺式離屯、機(jī)（美國貝 克曼庫爾特有限公司）；KQ-500DE超聲清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司，功率300W，頻率 40曲Z) ;BP-210D型電子分析天平（德國賽多利斯，十萬分之一）；過濾裝置（Autoscience) 及微孔濾膜化 45]im)。色譜柱；WatersSymmetiTCi8(150mmX4. 5mm，5]im);Phenomenex GeminiCi8(150mmX4.5mm，5]im);AlltechAltimmaCi8(250mmX4.5mm，5]im);制備色譜柱； 邸CHMANULTRAPREPC18 (21.ImmX150mm，10ym);保護(hù)巧；pheno皿exCig。 百兩金皂巧B自制（烙點；263-265°C，薄層色譜多個展開及顯色系統(tǒng)均顯示一個 斑點，采用HPLC-ELSD峰面積歸一化法計算其質(zhì)量濃度大于98%，符合定量分析用中藥化 學(xué)對照品純度的質(zhì)量要求）；己膳為色譜純，水為高純水；其余試劑均為分析純。百兩金藥 材購買于四川省某公司，經(jīng)本專利技術(shù)人鑒定為百兩金（ArdisiacrispaCrhunb. )DC.A.)。 2百兩金皂巧B對照品制備 將百兩金粉碎，用50%~80%的己醇提取，將提取液減壓濃縮，上大孔吸附樹脂， 用水和30%己醇沖洗除雜，再用80%己醇洗脫，洗脫液減壓濃縮干燥，上硅膠柱層析，W體 積比為70 : 30的己酸己醋-甲醇洗脫，合并富含百兩金皂巧B的流份，除去溶劑，甲醇重結(jié) 晶，用相應(yīng)流動相溶解結(jié)晶物使成飽和溶液，上清液注入制備型高效液相色譜儀分離純化； 色譜條件；Ci8柱；流動相：體積比為60 : 40~68 : 32的甲醇-水；檢測波長；205皿，收 集目標(biāo)峰流出液，濃縮、干燥，即得。將制得的百兩金皂巧B對照品采用高分辨質(zhì)譜化R-FAB-M巧給出精確分子量：m/zl097. 5432，對應(yīng)分子式為；〔53也〇22化（分子量計算值為；1〇97. 5509);其碳、 氨核磁共振信號根據(jù)gCOSY，HMQC，HMBC所顯示的相關(guān)關(guān)系得到了歸屬，結(jié)構(gòu)鑒定為西 克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2)-e-D-葡萄化喃糖-(1 一 4)--a 阿拉伯化喃糖巧。 本專利技術(shù)制備的虎舌紅素B經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光散射本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種使用高效液相色譜?蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC?ELSD)測定百兩金皂苷B原料或其制劑的定量分析方法，其特征在于以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為30∶70～40∶60的乙腈?水為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按百兩金皂苷B計算不得低于4000；其主要步驟包括色譜系統(tǒng)適用性試驗、對照品和樣品溶液制備、進(jìn)樣分析測定并計算含量。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張琦，饒開晴，伍紅，陳煉紅，
申請(專利權(quán))人：西南民族大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：四川;51