一種治療癌癥的活性肽及其用途制造技術

本發明專利技術提供了一種抗舌癌的系列多肽，同時提供了一種多肽的提取方法。該系列多肽具有較強的穩定性以及抑制舌癌細胞生長的能力。這些多肽可以用于癌癥的治療。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及的是生物
，具體涉及從芋螺中分離得到的治療舌癌的活性 肽。
技術介紹
癌癥是對人類生命健康危害最大的疾病之一，每年都有大量的人死于癌癥?？拱?藥物的研發一直是藥學研宄的熱點?？鼓[瘤藥物中有74%是天然產物或其衍生物，如紫杉 醇及其衍生物就是目前臨床上應用效果比較好的抗腫瘤藥物。因此，從天然產物中尋找抗 癌化合物或先導化合物具有重要的意義。 舌癌早期可表現為潰瘍、外生與浸潤3種類型。有的病例的第一癥狀僅為舌痛，有 時可反射至顳部或耳部。外生型可來自乳頭狀瘤惡變。浸潤型表面可無突起或潰瘍。潰 瘍型及浸潤型癌常伴有自發性疼痛和程度不同的舌運動受限；外生型一般舌運動障礙不明 顯，較少自發痛。舌癌進入晚期可直接超越中線或侵犯口底，亦可浸潤下頒骨舌側骨膜、骨 板或骨質。向后則可延及舌根或咽前柱和咽側壁。此時舌運動可嚴重受限、固定、涎液增多 外溢。進食、吞咽、言語均感困難。疼痛劇烈，可反射至半側頭部。關于舌癌早期診斷的醫 療器械目前還未見報道。 芋螺，亦稱雞心螺，系軟體動物門，腹足綱，前鰓亞綱，芋螺科（Conidae)動物之總 稱。殼呈圓錐形或紡錘形，表面常有各色花紋。殼口窄長，厴小而不能遮蓋殼口。全球有約 500種，我國有百余種。它們分布于熱帶海域中的淺水區，少數在廣東、廣西沿海，海南島北 部，個別種延伸到東海。芋螺雖然種類很多，個體大小和食物類型有很大差異，但它們都是 食肉動物，而且是靠它們的毒液來捕食獵物。按照食性，芋螺大致可分為三類，食魚芋螺、食 其它軟體動物的食螺芋螺和以蠕蟲為食的食蟲芋螺。其中食魚芋螺毒液的毒性最高，食蟲 芋螺的毒性最低。 至今已有數種芋螺毒素申請美國專利，它們在鎮痛、局部缺血性保護、癲癇治療、 某些疾病診斷和受體研宄中具有廣泛的應用價值，有的已進入臨床研宄或已被FDA正式批 準為治療新藥，用作特異診斷試劑和鎮痛藥。如由Olivera等從幻芋螺（Conus magus)中 分離的ω-CTX，MVIIA，已被美國FAD正式批準為治療頑痛的藥物，其商品名Ziconotide。 申請人通過研宄發現，芋螺體內的一系列的小肽具有較好的抑制癌癥的效果。
技術實現思路
-方面本專利技術涉及一類治療舌癌的多肽。其結構具有以下形式： CM-03 ：AQNDCGSSYQFSV CM -05 ： GNNRSARRVDDSP CM -06 ： DCCCPPMKLLIIGSSSRSR CM -09 ： AAAYYSSVRRVffffTSPGEQ CM -11 ： QPPEEGNDRCGSGRVPAM CM -12 ： NRGSTWYILLPPGSSRPS CM -14 ： VVGSSEEQGHIPARDCCRV CM -16 ： IKDCMMPGSRAARRGSRLL CM -19 : QPTWGECDDQQHILARVPSS CM -20 ： KKPARDDNRAGSKKSSVP CM -21 ： DDARMMKLHGSSQQEPSRV CM -23 ： APDDGSSRVPTKQEPR CM -27 ： GRVILPDKRVPPSSAKff CM -29 ： IGRMDKQQNRGSSff CM -31 ： VRPGSRDKILLPPGAR CM -34 ： GSNNPQTTSRVCPRSGGG 另一方面，本專利技術提供一種分離所述多肽的方法，（I)將芋螺先用PBS緩沖液清洗，然 后用13mmol/L HCl溶液勻漿在10攝氏度條件下制備成粗制液；（2)將步驟（1)所得粗制液 用8000轉/分鐘離心20分鐘，收集上清液，將上清液用三層紗布過濾，而后加入木瓜蛋白 酶(酶活力為800AU/g) lkg，繼續保溫并不斷攪拌進行酶解反應3h，得到酶解液。用葡聚糖 G-50 (Sephadex G-50) (I. 5cmX 90cm)分離，19mmol/L HCl 溶液洗脫，流速 I. 3mL/ 分鐘，收 集洗脫產物，調節溶液至PH6. 8,10000轉/分鐘離心15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經十二 烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)，回收小分子量的條帶，經過驗證，獲得了 40 個小的多肽，經過試驗證實了其中有16個具有較好的生物學活性。 另一方面，本專利技術提供一種藥物組合物，所述的組合物含有如上所述的體多肽。 如上所述的藥物組合物，其還含有還包含一種或多種藥學上可接受的載體；優 選地，所述藥學上可接受的載體選自：水溶性填充劑、PH調節劑、穩定劑、注射用水和滲透 壓調節劑； 更優選地，所述水溶性填充劑選自以下的一種或幾種：甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨 醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖； 更優選地，所述PH調節劑為生理可接受的酸、堿和/或鹽，優選選自以下的一種或幾 種： 非揮發性酸如枸櫞酸、磷酸、乳酸、酒石酸或鹽酸，堿如氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀 或氫氧化銨，鹽如碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸銨鹽，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀或碳酸氫銨鹽； 更優選地，所述穩定劑為選自以下的一種或幾種：EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸 鈉、亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇 4000、十二烷基硫酸鈉或三羥甲基氨基甲烷等，進一步優選自：焦亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、 精氨酸、聚乙二醇6000、三羥甲基氨基甲烷中的一種或幾種； 更優選地，所述滲透壓調節劑選自氯化鈉和/或氯化鉀。 本專利技術再一方面還提供上述多肽在制備治療腫瘤的藥物中的應用。 并且，所述藥物組合物優選為注射劑，更優選地為凍干粉針或溶液注射劑。 本專利技術的又一方面還提供一種藥物組合物，包含上述所述的多肽。 優選地，還包含可接受的輔料成分。 本專利技術的優點在于： 提供了一種多肽能夠抗腫瘤，同時具有較好的穩定性?！揪唧w實施方式】 實施例1多肽的分離獲得 (1)將芋螺先用PBS緩沖液清洗，然后用13mmol/L HCl溶液勻漿在10攝氏度條件下制 備成粗制液；（2)將步驟（1)所得粗制液用8000轉/分鐘離心20分鐘，收集上清液，將上清 液用三層紗布過濾，而后加入木瓜蛋白酶(酶活力為800AU/g) lkg，繼續保溫并不斷攪拌進 行酶解反應3h，得到酶解液。用葡聚糖G-50(Sephadex G-50) (I. 5cmX90cm)分離，19mmol/ L HCl溶液洗脫，流速I. 3mL/分鐘，收集洗脫產物，調節溶液至pH6. 8,10000轉/分鐘離心 15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)，回收 小分子量的條帶，通過測序獲得其中的40個小的多肽相應的氨基酸的序列。 實施例2采用MTT法評價多肽對人舌癌細胞株的生長抑制作用 方法：處于生長對數期的細胞：人舌癌細胞株Tca8113和T6以2 X IO4濃度種于96 孔板中。細胞培養24 h貼壁后吸去原來的細胞培養基(為RPMI-1640培養基)。試驗分為 空白對照組、藥物處理組?？瞻捉M更換含10%胎牛血清的1640培養基；藥物處理組更換含 多肽濃度為50 μ M的細胞培養基。培養48 h后，加入濃度5 mg/mL的MTT，繼續放于CO2培養箱培養4 h，然后沿著培養液上部吸去100 μ L上清，加入100 μ L 本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種抗腫瘤多肽，其特征在于：來源于芋螺。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：查文娟，
申請(專利權)人：查文娟，
類型：發明
國別省市：浙江;33