本發明專利技術涉及一種黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，包括以下步驟：（1）標準曲線的繪制；（2）繪制酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線；（3）測定蛋白酶活力：吸取米曲浸出液，蒸餾水稀釋2倍，分別吸取稀釋酶液于離心管中，水浴預熱，空白管中加入三氯醋酸，酪素溶液，樣品管中加入酪素溶液，水浴中水解，樣品管中各加入三氯醋酸，搖勻，停止酶作用；離心后吸取上清液于三只試管中，加入Na2C03溶液以及福林試劑，水浴顯色，測定吸光度。本發明專利技術黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，能夠準確、有效地測定黃酒米曲的蛋白酶活力，為釀造優質的黃酒奠定了基礎。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術設及，屬于黃酒釀造的
技術介紹
米曲不僅是黃酒釀造中的糖化劑，小部分發酵劑，同時還賦予黃酒獨特的風味。由 于米曲在黃酒釀造中占有極其重要的地位，其質量的優劣，直接影響到黃酒的質量和產量， 因此被形象地喻為"酒之骨"。因此，測定米曲的蛋白酶活力是十分必要的。
技術實現思路
針對現有技術的上述技術問題，本專利技術的目的是提供一種黃酒米曲的蛋白酶活力 測定方法，準確測定黃酒米曲的蛋白酶活力，為釀造優質的黃酒奠定了基礎。 為達到上述目的，本專利技術是通過W下技術方案實現的： ，包括W下步驟： (1)標準曲線的繪制；0.Ig/L標準酪氨酸溶液稀釋，從各稀釋液中吸取ImL于另外的試 管中，準確加入5mL0. 4mol/LNa2C〇3溶液，ImL福林試劑稀釋液，于40°C恒溫水浴顯色20分 鐘，然后在680nm波長下測定各管吸光度； (2 )繪制酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線，線性表達式為y=0. 0099X-0. 0022，R2=0. 9999,X為酪氨酸濃度，單位為ug/mL，y為吸光度； (3)測定蛋白酶活力： a、 樣品前處理：吸取米曲浸出液5mU蒸饋水稀釋2倍，分別吸取ImL稀釋酶液于3支 離屯、管中，40°C恒溫水浴鍋中水浴預熱5分鐘，保溫比，每15min攬拌一次，用干濾紙或脫脂 棉過濾，去除濾液，用抑=3的緩沖液進行稀釋，W使吸光度的值在0. 2-0. 4之間為宜； b、 酪蛋白的水解：先將適量的2%酪素液和制備好的酶液放入40 + 0. 2°C的恒溫水浴鍋 中保溫3-55min，然后吸入2份保溫后的酶液1. 0血，各加入保溫后的酪素液1. 0血，搖勻， 40 + 0. 2°C恒溫水浴中水解15min，加入0.Amol/LCClsCOOH液2. 0血，搖勻，使蛋白質沉淀， 終止酶水解反應，并過濾備用； C、空白管中加入0.4mol/LS氯醋酸2mL，2%酪素溶液ImL，樣品管中加入2%酪素溶 液山以在40°C水浴中水解10分鐘后，樣品管中各加入S氯醋酸2mU搖勻，停止酶作用； 4000巧m離屯、5分鐘后，分別吸取ImL上清液于S只試管中，各加入0. 4mol/LNasCOs溶液 5血W及福林試劑ImL，于40°C水浴顯色20分鐘，在680皿波長下測定吸光度； 所述吸光度的計算公式為；蛋白酶活力；Ig絕干曲在40°C每分鐘分解酪蛋白為酪氨酸 的微克數， 酶活=(1/K)XAe8〇XVX4Xn/(wX10) K;標準曲線的斜率Aew;680nm波長下的吸光度 V冰曲浸出液的體積，單位為血 4 ;反應液體積，單位為mL n;稀釋倍數 W;絕干曲質量，單位為g10 ;酶反應時間，單位為min。 本專利技術的有益效果如下： 本專利技術黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，能夠準確、有效地測定黃酒米曲的蛋白酶活 力，為釀造優質的黃酒奠定了基礎。【附圖說明】 圖1為酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線。【具體實施方式】 下面結合具體實施例對本專利技術作進一步的說明，但本專利技術的保護范圍并不限于 此。[000引本專利技術黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，包括W下步驟： (1) 標準曲線的繪制；0.Ig/L標準酪氨酸溶液按下表1稀釋，從各稀釋液中吸取ImL于 另外的試管中，準確加入5mL0. 4mol/LNa2C03溶液，ImL福林試劑稀釋液，于40°C恒溫水浴顯 色20分鐘，然后在680nm波長下測定各管吸光度；(2) 繪制如圖1所示的酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線，線性表達式為 y=0. 0099X-0. 0022,R2=0. 9999,X為酪氨酸濃度，單位為ug/mL，y為吸光度； (3) 測定蛋白酶活力： a、 樣品前處理：吸取米曲浸出液5mU蒸饋水稀釋2倍，分別吸取ImL稀釋酶液于3支 離屯、管中，40°C恒溫水浴鍋中水浴預熱5分鐘，保溫比，每15min攬拌一次，用干濾紙或脫脂 棉過濾，去除濾液，用抑=3的緩沖液進行稀釋，W使吸光度的值在0. 2-0. 4之間為宜； b、 酪蛋白的水解：先將適量的2%酪素液和制備好的酶液放入40 + 0. 2°C的恒溫水浴鍋 中保溫3-55min，然后吸入2份保溫后的酶液1. 0血，各加入保溫后的酪素液1. 0血，搖勻， 40 + 0. 2°C恒溫水浴中水解15min，加入0.Amol/LCClsCOOH液2.OmL，搖勻，使蛋白質沉淀， 終止酶水解反應，并過濾備用； C、空白管中加入0.4mol/LS氯醋酸2血，2%酪素溶液1血，樣品管中加入2%酪素溶 液ImU在40°C水浴中水解10分鐘后，樣品管中各加入S氯醋酸2mU搖勻，停止酶作用； 4000巧m離屯、5分鐘后，分別吸取ImL上清液于S只試管中，各加入0. 4mol/LNasCOs溶液 5血W及福林試劑1血，于40°C水浴顯色20分鐘，在680皿波長下測定吸光度； 所述吸光度的計算公式為；蛋白酶活力；Ig絕干曲在40°C每分鐘分解酪蛋白為酪氨酸 的微克數， 酶活=(1/K)XAe80XVX4Xn/(wX10) K;標準曲線的斜率Ae8c;680nm波長下的吸光度 V冰曲浸出液的體積，單位為mL 4 ;反應液體積，單位為mL n;稀釋倍數 W;絕干曲質量，單位為g10 ;酶反應時間，單位為min。 本專利技術黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，能夠準確、有效地測定黃酒米曲的蛋白 酶活力，為釀造優質的黃酒奠定了基礎。 上述實施例僅用于解釋說明本專利技術的專利技術構思，而非對本專利技術權利保護的限定， 凡利用此構思對本專利技術進行非實質性的改動，均應落入本專利技術的保護范圍。【主權項】1. ，其特征在于包括以下步驟： (1)標準曲線的繪制：0. lg/L標準酪氨酸溶液稀釋，從各稀釋液中吸取ImL于另外的試 管中，準確加入5mL0. 4mol/LNa2C03溶液，ImL福林試劑稀釋液，于40°C恒溫水浴顯色20分 鐘，然后在680nm波長下測定各管吸光度； (2 )繪制酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線，線性表達式為y=0. 0099X-0. 0022， R2=O. 9999, X為酪氨酸濃度，單位為ug/mL，y為吸光度； (3)測定蛋白酶活力： a、 樣品前處理：吸取米曲浸出液5mL，蒸餾水稀釋2倍，分別吸取ImL稀釋酶液于3支 離心管中，40°C恒溫水浴鍋中水浴預熱5分鐘，保溫lh，每15min攪拌一次，用干濾紙或脫脂 棉過濾，去除濾液，用pH=3的緩沖液進行稀釋，以使吸光度的值在0. 2-0. 4之間為宜； b、 酪蛋白的水解：先將適量的2%酪素液和制備好的酶液放入40±0. 2°C的恒溫水浴鍋 中保溫3-55min，然后吸入2份保溫后的酶液1.0 mL，各加入保溫后的酪素液1.0 mL，搖勻， 40±0. 2°C恒溫水浴中水解15min，加入0. 4mol/LCCl3C00H液2. OmL，搖勻，使蛋白質沉淀， 終止酶水解反應，并過濾備用； c、 空白管中加入0. 4mol/L三氯醋酸2mL，2%酪素溶液lmL，樣品管中加入2%酪素溶 液lmL，在40°C水浴中水解10分鐘后，樣品管中各加入三氯醋酸2mL，搖勻，停止酶作用； 4000rpm離心5分鐘后，分別吸取ImL上清液于三只試管中，各加入0. 4mol/L Na2C03溶液本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種黃酒米曲的蛋白酶活力測定方法，其特征在于包括以下步驟：（1）標準曲線的繪制：0.1g/L標準酪氨酸溶液稀釋，從各稀釋液中吸取1mL于另外的試管中，準確加入5mL0.4mol/LNa2C03溶液，lmL福林試劑稀釋液，于40℃恒溫水浴顯色20分鐘，然后在680nm波長下測定各管吸光度；（2）繪制酪氨酸濃度于吸光度的線性回歸曲線，線性表達式為y=0.0099x?0.0022，R2=0.9999，x為酪氨酸濃度，單位為ug/mL，y為吸光度；（3）測定蛋白酶活力：a、樣品前處理：?吸取米曲浸出液5mL，蒸餾水稀釋2倍，分別吸取1mL稀釋酶液于3支離心管中，40℃恒溫水浴鍋中水浴預熱5分鐘，保溫1h，每15min攪拌一次，用干濾紙或脫脂棉過濾，去除濾液，用pH=3的緩沖液進行稀釋，以使吸光度的值在0.2?0.4之間為宜；b、酪蛋白的水解：先將適量的2%酪素液和制備好的酶液放入40±0.2℃的恒溫水浴鍋中保溫3?55min，然后吸入2份保溫后的酶液1.0mL，各加入保溫后的酪素液1.0mL，搖勻，40±0.2℃恒溫水浴中水解15min，加入0.4mol/LCCl3COOH液2.0mL，搖勻，使蛋白質沉淀，終止酶水解反應，并過濾備用；c、空白管中加入0.4mol/L三氯醋酸2mL，2％酪素溶液1mL，樣品管中加入2％酪素溶液1mL，在40℃水浴中水解10分鐘后，樣品管中各加入三氯醋酸2mL，搖勻，停止酶作用；4000rpm離心5分鐘后，分別吸取1mL上清液于三只試管中，各加入0.4mol/L?Na2C03溶液5mL以及福林試劑1mL，于40℃水浴顯色20分鐘，在680nm波長下測定吸光度；所述吸光度的計算公式為：蛋白酶活力：1g絕干曲在40℃每分鐘分解酪蛋白為酪氨酸的微克數，酶活=(1/K)×A680×V×4×n/(w×10)K：標準曲線的斜率A680：680nm波長下的吸光度V：米曲浸出液的體積，單位為mL4：反應液體積，單位為mLn：稀釋倍數w：絕干曲質量，單位為g10：酶反應時間，單位為min。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：張蘇敏，張新華，何紹木，魯志康，
申請(專利權)人：紹興文理學院，
類型：發明
國別省市：浙江;33
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