一種牛樟芝化合物組分分離提取方法技術

本發明專利技術公開了一種牛樟芝化合物組分分離提取方法，以牛樟芝子實體粉或菌絲體為原料，采用酶解、超臨界CO2萃取、離子交換色譜、膜分離超濾和層析法純化相結合的技術實現牛樟芝化合物組分的分離提取。本發明專利技術具有有效活性組分分離效果好，純化純度高，成分不易被分解破壞、無有害化學試劑和重金屬殘留、提取效率高等優點，可以同時脫除多糖液中的鹽分和水，實現對多糖和三萜類化合物稀溶液的純化和分離，作為新原料、中間體應用于功能食品、保健食品、藥品、化妝品等產業的研究開發。本發明專利技術具有很高的工業應用價值，是一項既環保、經濟又可工業化生產的現代生物醫藥活性物質的制備技術。

【技術實現步驟摘要】
一種牛樟芝化合物組分分離提取方法
本專利技術屬于食（藥）用菌活性組分分離提取
，具體涉及一種牛樟芝化合物組分分離提取方法。
技術介紹
牛樟芝又名牛樟菇，屬于非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌屬、多年生蕈菌類，拉丁名為Antrodiacamphorata，是1990年才被生化界發表的新種。其生長區域為臺灣山區海拔450-2000米山林間，只生長在臺灣特有百年以上的牛樟樹樹干腐朽之心材內壁，或枯死倒伏之牛樟樹木材潮濕表面，野生樟芝生長期在每年六至十月，采集極為不易。牛樟芝額的子實體形態多變化，有板狀、鐘狀、馬蹄狀或塔狀；初生時鮮紅色，漸長變為白色、淡紅褐色、淡褐色或淡黃褐色。牛樟芝氣芳香味辛苦、平。有祛風行氣、化淤活血、溫中消結、解毒消腫、鎮靜止痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、提升機體免疫力之效；對于治療胃腸疼痛、腹瀉嘔吐、食物中毒、毒蕈中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有獨特功能。牛樟芝是有許多的生理活性成分，如多糖體、三萜類化合物、超氧歧化酶、腺苷、蛋白質(含免疫蛋白)、維生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、纖維素、血壓穩定物質等。牛樟芝的有效成分中以三萜類化合物為最特別，是其他菇菌無法相比的，三萜類化合物使牛樟芝具有抗癌、保肝等功效。由于樟芝在臺灣被視為獨特而珍貴的藥用真菌，因此具有極高的研究和商業價值，也是目前臺灣最昂貴的野生真菌，在港澳被稱為"神芝"，臺灣譽為"森林中的紅寶石"。研究表明，牛樟芝成分有多糖、萜類、甾體類化合物、馬來酸及琥珀酸衍生物等主要活性化合物，具有護肝、抗癌、調節免疫、去過敏、解毒和抗炎等功效。其中多醣(Polysaccharides)，牛樟芝在子實體含有多醣體，具有免疫生理活性、預防及控制腫瘤等生理活性，主要含β-D-glucan(β-D-葡聚糖))其作用是透過激發巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞以及自然殺手細胞等來增強免疫功能，進而達到抗腫瘤的效果。樟芝多醣體中有強心、降血壓、降血糖等功效。三萜類化合物(Terpenoids)，三萜類化合物是目前樟芝子實體發現最多的萜類化學成分，一般被認為牛樟芝萃取物中苦味成份的主要來源。其中多達10多種新發現三萜類為樟芝所獨有，實驗證實：這些三萜類化合物能抑制肝癌細胞的增殖、毒殺老鼠血癌(P-388murineleukemia)細胞活性、抗副交感神經作用、抗血清素活性、活化神經細胞生長能力等功能；比多醣體扮演著更重要的抗腫瘤活性調節角色。高血壓患者往往因為血壓高，導致腦血管破裂而中風，三萜類化合物能有效的抑制AngiotensinConvertingEnzyme(ACE)的活性，進而降低血糖。β-D-葡聚醣具有預防腫瘤的免疫生理活性，增強人體免疫功能，具有抗過敏的作用，幫助調解高血糖。近年來牛樟芝的藥理作用得到醫學界的廣泛重視，提取分離牛樟芝化合物組分，研制開發新技術新產品前景十分廣闊。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種牛樟芝化合物組分分離提取方法，具有有效活性組分分離效果好，純化純度高，成分不易被分解破壞、無有害化學試劑和重金屬殘留、提取效率高等優點。為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：一種牛樟芝化合物組分分離提取方法：以牛樟芝子實體粉或菌絲體為原料，采用酶解、超臨界CO2萃取、離子交換色譜、膜分離超濾和層析法純化相結合的技術實現牛樟芝化合物組分的分離提取。具體步驟如下：（1）將合格牛樟芝干燥至水分含量≤8%，粉碎，過20-30目篩；（2）將牛樟芝粉用純化水浸泡，料液比為1：10-12，調節pH=4.5-5.5，溫度50-60℃，時間6h；加入淀粉酶和木聚糖酶，攪拌均勻，超聲輔助酶解2-3h；將料液升溫至100℃，滅酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（1）；（3）在步驟（2）的濾渣中加入其重量10倍的純化水，攪拌均勻，再加入纖維素酶，酶解2-3h，將料液升溫至100℃，滅酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（2）；（4）將酶解提取液（1）和酶解提取液（2）合并，混合均勻，0.09MPa減壓濃縮至可溶性固形物含量為10-12%，濃縮液的濃度Brix=16.0-18.0%；（5）將濃縮液采用超臨界CO2萃取，條件為：萃取釜壓力25-30MPa，萃取溫度50-55℃，分離溫度40℃，I級分離釜壓力8-10MPa，Ⅱ級分離釜壓力6MPa，CO2流速2-2.5L/min，萃取時間4-5h，分離釜收集得到牛樟芝化合物組分的綜合萃取物；（6）采用離子交換色譜和凝膠層析進行分離，吸附部分得α-葡聚糖苷酶，未吸附部分得β-葡聚糖苷酶；（7）采用膜分離超濾技術分離提取純多糖部分；（8）采用硅膠薄層層析分離，經脫水分餾，得三萜類化合物。步驟（2）中所述的淀粉酶的酶活力為20萬U/g，木聚糖酶的酶活力為12萬U/g，用量分別為牛樟芝粉重量的0.1-0.2%；超聲波頻率為25-30kHz。步驟（3）中所述的纖維素酶的酶活力為20萬U/g，用量為濾渣重量的0.2-0.3%。步驟（6）的具體步驟如下：（1）將葡聚糖凝膠在7-10倍量的蒸餾水中充分溶脹1-2小時；（2）將凝膠裝填入垂直的層析柱中，柱長100cm，直徑5cm；（3）萃取物濃縮液體積為凝膠總床體積的15%-20%，萃取物濃縮液與洗脫液的相對粘度為1.5-2。步驟（7）的工藝參數如下：超濾膜為中空纖維式納米膜，中空纖維外徑0.4-2.0mm，內徑0.3-1.4mm，過濾精度0.005-0.01μm；超濾溫度為25℃，pH值接近浸提介質的pH，超濾壓力為0.15-0.18MPa。步驟（8）的具體步驟如下：（1）用95wt.%乙醇溶液浸漬2h，溫度40-45℃，回流2次，將體積比為10：3：1的甲苯-乙酸乙酯-乙酸作為展開劑；（2）采用梯度洗脫，收集的規格：上液量200g，200-300目的硅膠50g，50ml收一餾分。本專利技術的顯著優點在于：本專利技術具有有效活性組分分離效果好，純化純度高，成分不易被分解破壞、無有害化學試劑和重金屬殘留、提取效率高等優點，可以同時脫除多糖液中的鹽分和水，實現對多糖和三萜類化合物稀溶液的純化和分離，作為新原料、中間體應用于功能食品、保健食品、藥品、化妝品等產業的研究開發。本專利技術具有很高的工業應用價值，是一項既環保、經濟又可工業化生產的現代生物醫藥活性物質的制備技術。附圖說明圖1是本專利技術的工藝流程圖。具體實施方式實施例1：牛樟芝組分分離原料：牛樟樹椴木為培養基材栽培的牛樟芝。培養時間為二年。步驟：（1）將牛樟芝子實體凈選除雜，干燥至水分≤8%，粉碎20-30目，稱量牛樟芝子實體粉碎粉1000g。（2）將步驟(1)的牛樟芝粉粹粉，按料液比為1：10-12，調節pH4.5-5.5，溫度50-60℃，用純化水浸泡6h后，再加入淀粉酶1.5g和木聚糖酶1.5g，攪均，酶反應2-3h。所述的淀粉酶酶活力為20萬U/g，木聚糖酶酶活力為12萬U/g，用量分別為粉粹粉重量的0.15%；上述酶解過程在超聲輔助條件下進行，超聲波頻率25-30kHz。酶解反應后將料液升溫至100℃，滅酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液(Ⅰ)備用。（3）將步驟(2)的濾渣加純化水10倍，加入纖維素酶2.5g，反應2-3h，所述的纖本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種牛樟芝化合物組分分離提取方法，其特征在于：以牛樟芝子實體粉或菌絲體為原料，采用酶解、超臨界CO2萃取、離子交換色譜、膜分離超濾和層析法純化相結合的技術實現牛樟芝化合物組分的分離提取。

【技術特征摘要】
1.一種牛樟芝化合物組分分離提取方法，其特征在于：以牛樟芝子實體粉或菌絲體為原料，采用酶解、超臨界CO2萃取、離子交換色譜、膜分離超濾和層析法純化相結合的技術實現牛樟芝化合物組分的分離提取；具體步驟如下：（1）將合格牛樟芝干燥至水分含量≤8%，粉碎，過20-30目篩；（2）將牛樟芝粉用純化水浸泡，料液比為1：10-12，調節pH=4.5-5.5，溫度50-60℃，時間6h；加入淀粉酶和木聚糖酶，攪拌均勻，超聲輔助酶解2-3h；將料液升溫至100℃，滅酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（1）；（3）在步驟（2）的濾渣中加入其重量10倍的純化水，攪拌均勻，再加入纖維素酶，酶解2-3h，將料液升溫至100℃，滅酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（2）；（4）將酶解提取液（1）和酶解提取液（2）合并，混合均勻，0.09MPa減壓濃縮至可溶性固形物含量為10-12%，濃縮液的濃度Brix=16.0-18.0%；（5）將濃縮液采用超臨界CO2萃取，條件為：萃取釜壓力25-30MPa，萃取溫度50-55℃，分離溫度40℃，I級分離釜壓力8-10MPa，Ⅱ級分離釜壓力6MPa，CO2流速2-2.5L/min，萃取時間4-5h，分離釜收集得到牛樟芝化合物組分的綜合萃取物；（6）綜合萃取物采用離子交換色譜和凝膠層析進行分離，經過凝膠層析后，吸附部分得α-葡聚糖苷酶，未吸附部分得β-葡聚糖苷酶；（7）綜合萃取物采用膜分離超...

【專利技術屬性】
技術研發人員：郭耀榮，吳松剛，郭震宇，
申請(專利權)人：福建天斯頓生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：福建;35