本發明專利技術涉及一種用于將UC-MSC分化為胰島細胞的誘導液及其應用，該誘導液包括尼克酰胺和堿性成纖維細胞生長因子，尼克酰胺能夠促進細胞的增殖分化，堿性成纖維細胞生長因子能夠促進細胞加速增殖,細胞體積增大。因此，采用本發明專利技術提供的誘導液誘導UC-MSC分化的胰島細胞不僅數量較多，細胞體積較大，且胰島細胞質量較好，能夠分泌較多的胰島素，對于臨床移植UC-MSC治療1型糖尿病具有重要意義。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術設及生物工程、組織工程和生物醫藥領域，特別設及用于將UC-MSC誘導轉 化為膜島細胞的誘導液。
技術介紹
糖尿病是膜島素分泌相對或絕對不足或膜島素受體等缺陷引起的糖、脂肪和蛋白 質代謝素亂性疾病。臨床上，I型及部分II型糖尿病多采用皮下注射膜島素來治療。而細 胞治療是糖尿病尤其是I型糖尿病的理想治療策略，尤其對于已經喪失膜島細胞功能的糖 尿病患者來說，植入能分泌膜島素的膜島細胞或其替代物是最理想的治療方法。目前，膜島 細胞移植治療糖尿病取得了一些療效，但供者細胞來源不足、嚴重的免疫排斥反應等困難 極大的限制了該種療法的應用。 干細胞具有極強的自我更新能力及多向分化潛能，是基因治療的理想祀細胞。干 細胞分為全能干細胞（如胚胎干細胞，可W分化為機體所有組織細胞）、多能干細胞胞（具 有多向分化潛能，可W分化為多種組織細胞，如間充質干細胞等）和專能干細胞（維持某一 特定組織細胞的單一方向自我更新，如腸上皮干細胞等）。干細胞技術的不斷突破及干細胞 本身所具有的特性使人類有可能在體外培養某些干細胞，定向誘導其分化為我們所需要的 各種組織細胞，或作為種子細胞用于組織工程W供臨床所需，W此為目的的干細胞工程設 及人體幾乎所有重要組織器官及人類面臨的大多數醫學難題，如屯、血管疾病、糖尿病、惡性 腫瘤、骨及軟骨缺損、老年性癡呆、帕金森病、燒傷、脊髓損傷和遺傳性缺陷等的治療。由于 人羊水、廝帶血、外周血和骨髓中的多能干細胞，具有增殖能力強、來源豐富、采集方便等優 點，此類干細胞移植在血液系統疾病、惡性腫瘤、自身免疫性疾病等的治療中發揮了重要的 作用。 對干細胞進行適當的基因修飾，使之成為能分泌膜島素的細胞，是治療I型糖尿 病的理想策略之一，而將干細胞分化為膜島細胞過程中，誘導液起到至關重要的作用，針對 干細胞不同的誘導方式，所需要的誘導液不同。然而，現有技術中最常用的誘導干細胞分化 為膜島細胞的方法為應用插入式細胞培養皿共培養板體外誘導UC-MSC(即廝帶間充質干 細胞）向膜島樣細胞分化具體為；選取第3代UC-MSC，用含10%FBS(胎牛血清）的L-DMEM 培養基重懸細胞，調整細胞密度為1X105個/ml，接種于普通6孔板，倒置顯微鏡下觀察細 胞貼壁后，改為L-DMEM/RPMI1640(1:1)培養基（低糖型改良杜氏伊格爾培養基與RPMI 16401:1混合而成的培養基）；同時將已分離獲得的膜島細胞，W50個/孔接種于共培養板 的中，進行UC-MSC和膜島細胞兩種細胞的共培養。然而，此種共培養方法不僅需要一定的 膜島細胞源，過程較繁瑣，花費較大，而且所獲得的更多為散在膜島樣細胞，數量較少，膜島 細胞團幾乎沒有，而且散在的膜島樣細胞相對較小，膜島素分泌量少難W達到臨床移植要 求。目前，也有研究者正在研究一種將UC-MSC直接誘導成膜島細胞的方法，因此，迫切需要 一種用于將UC-MSC直接誘導成膜島細胞的誘導液。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是，針對現有技術中誘導液誘導UC-MSC與膜島細胞 共培養方式所獲得的膜島細胞較小，數量較少，且花費較大等缺陷，提供一種可將UC-MSC 轉化為膜島細胞的誘導液。 本專利技術解決其技術問題所采用的技術方案是；一種用于將UC-MSC轉化為膜島細 胞的誘導液，所述誘導液包括巧克酷胺和堿性成纖維細胞生長因子。 在本專利技術提供的UC-MSC轉化為膜島細胞的方法中，所述誘導液中巧克酷胺的濃 度為5-15mmol/L和堿性成纖維細胞生長因子的濃度為5-15yg/L。[000引在本專利技術提供的UC-MSC轉化為膜島細胞的方法中，所述誘導液中巧克酷胺的濃 度為lOmmol/l，堿性成纖維細胞生長因子的濃度為10yg/L。 在本專利技術提供的UC-MSC轉化為膜島細胞的方法中，所述誘導液中巧克酷胺的濃 度為5mmol/l，堿性成纖維細胞生長因子的濃度為5yg/L。 在本專利技術提供的UC-MSC轉化為膜島細胞的方法中，所述誘導液中巧克酷胺的濃 度為15mmol/l，堿性成纖維細胞生長因子的濃度為15yg/L。 本專利技術進一步保護上述誘導液在UC-MSC轉化為膜島細胞中的應用。[001引實施本專利技術提供的用于將UC-MSC轉化為膜島細胞的誘導液，可W達到W下有益 效果；該誘導液能夠促進UC-MSC增大和增殖轉化，促進UC-MSC轉化成膜島細胞團W及增大 膜島細胞，對于改善現有UC-MSC與膜島細胞共培養獲得膜島細胞的方法具有重要的意義； 由本專利技術提供的誘導液在UC-MSC轉化為膜島細胞過程中的應用可知，本專利技術提供的誘導 液不僅省去現有誘導方法中前期獲取膜島細胞的過程，而且使得UC-MSC轉化成的膜島細 胞數量較多，且膜島細胞質量較好，能夠分泌較多的膜島素。【附圖說明】 下面將結合附圖及實施例對本專利技術作進一步說明，附圖中： 圖1為采用本專利技術提供的誘導液誘導UC-MSC轉化成的膜島細胞通過雙硫腺染色 得到的顯微鏡下的細胞分布圖； 圖2為采用本專利技術提供的誘導液誘導UC-MSC轉化成的膜島細胞通過雙硫腺染色 得到的顯微鏡下的細胞分布放大圖。【具體實施方式】 為解決現有技術中誘導液誘導UC-MSC與膜島細胞共同培養方式所獲得的膜島細 胞較小，且數量較少等缺陷，本專利技術的創新點在于提供一種可促進UC-MSC轉化成膜島細胞 的誘導液，該誘導液可促進細胞增殖、增大，從而實現了提高UC-MSC轉化率及提高轉化后 膜島細胞質量的目的。 具體地，本專利技術提供的用于將UC-MSC轉化為膜島細胞的誘導液包括：巧克酷胺 和堿性成纖維細胞生長因子，優選地，巧克酷胺的濃度為5-15mmol/L和堿性成纖維細胞生 長因子的濃度為5-15yg/L。巧克酷胺的主要作用是參與呼吸鏈，參與細胞增殖轉化的呼 吸過程及電子傳遞過程，促進細胞的增殖轉化；堿性成纖維細胞生長因子可促進細胞加速 增殖，細胞體積增大，因此，本專利技術提供的誘導液能夠促進UC-MSC的增殖轉化，同時，促進 UC-MSC細胞和膜島細胞體積的增大。[001引采用本專利技術提供的誘導液將UC-MSC轉化為膜島細胞的方法步驟為： 取第S代UC-MSC，置于培養箱中，并按W下步驟對第S代UC-MSC進行誘導： 1)在細胞培養基中加入第一種誘導液，培養至細胞完成增殖過程，獲得預轉化干 細胞體； 2)在含有質量分數為1%-5%的膜島素-轉鐵蛋白-砸的DMEM/F12培養基中，加 入第二種誘導液，培養上述預轉化干細胞體至細胞轉化結束，獲得膜島細胞液； 其中，第一種誘導液為5-15mmol/L巧克酷胺、15-30yg/L表皮生長因子、60yg/ L-150yg/Le-神經生長因子和1-lOnmol/L激活素A、5-15yg/Le-琉基己醇； 第二種誘導液包括5-15mmol/L巧克酷胺和5-15 y g/L堿性成纖維細胞生長因 子； 含有膜島素-轉鐵蛋白-砸的DMEM/F12培養基可促使預轉化干細胞體定向轉化 成膜島細胞。 與現有技術相比，采用本專利技術提供的誘導液，能夠對UC-MSC分步進行轉化，使得 UC-MSC可直接轉化成膜島細胞，而無需將UC-MSC與膜島細胞共培養獲得轉化后膜島細胞， 并且采用本專利技術提供的誘導液可促進UC-MSC細胞的增殖和增大，促進膜島細胞團的形成， 提高本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于將UC?MSC轉化為胰島細胞的誘導液，其特征在于：所述誘導液包括尼克酰胺和堿性成纖維細胞生長因子。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：曾憲卓，魯菲，
申請(專利權)人：深圳愛生再生醫學科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44
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