本發明專利技術屬于臨床醫學診斷領域，特別涉及一種HCG膠體金免疫側向層析試紙條及其檢測方法，HCG膠體金免疫側向層析試紙條，由硝酸纖維素膜、Fusion5膜和吸水紙；所述硝酸纖維素膜上設有檢測線T線和質控線C線，所述檢測線T線上噴有T線溶液，檢測線C線上噴有C線溶液。通過標準品不同濃度值與對應的T/C平均值制作標準曲線，用三次樣條插值擬合該標準曲線，可得到線性較好，完全上升的曲線，可克服HOOK效應，實現對高濃度HCG的檢測。本發明專利技術的檢測范圍達到了10-200000mIU/ml，而且待測樣本無需稀釋，檢測過程簡單，方便，檢測成本低。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于臨床醫學診斷領域，特別涉及一種HCG膠體金免疫側向層析試紙條及 其檢測方法。
技術介紹
人絨毛膜促性腺激素（HCG)由胎盤的滋養層細胞分泌的一種糖蛋白，它是由 a和0二聚體的糖蛋白組成，囊胚期著床后即可以產生，由合體滋養細胞合成。HCG在 受精后第6日開始分泌，受精后第7日，就能在孕婦血清中和尿中測出，并以指數形式 增加，平均1. 5-2天濃度翻倍，增加速率因人而異。至妊娠7-10周其濃度達到高峰，約 20, 000-100, 000mIU/ml，在妊娠13-15周濃度有所降低，直至妊娠結束。HCG上升較緩慢，或 懷孕到3-6周HCG增加不能翻倍，則可考慮異位妊娠或先兆流產的可能。 因此，在臨床上，HCG定量不僅僅診斷妊娠，還能得知受檢者是否存在妊娠疾病。 正常妊娠者二天間隔定量測定HCG有快速上升是胚胎良好發育的重要指標。定量檢測尿中 HCG也是葡萄胎、絨毛膜癌等疾病的輔助診斷重要指標。因此，HCG的定量測定在臨床診斷 上是極其重要的。 HCG現有的定量檢測技術主要有酶聯免疫吸附試驗（ELISA)、化學發光法和放射 免疫實驗等，這些技術對實驗室和檢測人員的要求較高，費時，費力，成本高，不利于HCG快 速定量檢測技術的開展。 目前，常用的免疫膠體金試紙條可在數分鐘內檢測尿中HCG診斷妊娠，尿 HCG〈25mIU/ml時妊娠陰性，反之呈陽性。但多數僅僅用于定性檢測，而不能測定異位妊娠。 因此，需要更多的快速定量HCG的體外診斷試劑。 專利（CN102890157A)提供的快速定量HCG的試紙條，硝酸纖維素膜上分別包被有 鼠抗HCG-a抗體構成的檢測線T線和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線，通過對待測樣本 進行稀釋后定量檢測范圍為10-15000mIU/ml。該方法的最高僅可檢測到15000mIU/ml，并 且還需要對待測樣本進行稀釋，操作步驟復雜，耗時耗力。 專利（CN101825640A)公開了一種膠體金免疫層析定性定量兩用檢測HCG試紙。該 試紙的NC膜上，定點分布有含HCG單克隆抗體或羊抗鼠IgG抗體的定性線、質控線和定量 線。其定性檢測靈敏度可達25mIU/ml，定量檢測的線性范圍可達到100-15000mIU/ml。該 方法需劃三條線，工藝繁瑣，并且最高也僅檢測到15000mIU/ml，難以滿足臨床妊娠診斷。 專利（CN103954753)公開了一種免疫層析試紙條的定量檢測方法，該方法需要在 硝酸纖維素膜上劃n條檢測線及1條內參線，需第n - 1條檢測線的檢測信號達到閾值， 利用第n條檢測線和部分第n - 1條檢測線的檢測信號分別進行標準曲線的繪制，不同濃 度范圍用不同的標準曲線計算待測溶液的濃度。該方法能克服HOOK效應，使檢測范圍足夠 寬，但是，該方法在NC膜上至少要劃3條線，成本較高，工藝較繁瑣，并且對于不同濃度范圍 接點的取值會較難界定。 專利（公開號CN202383145U)提供了一種HCG膠體金定量檢測試紙條，但是該專 利中，硝酸纖維素膜（NC膜）上設有平行的兩條檢測線和一條質控線，檢測線包被的是抗 HCG單克隆抗體，質控線上包被的是羊抗鼠IgG。但是，在NC膜上劃三條線，不僅增加了生 物原料成本，而且對劃膜儀來說，泵是較貴的零部件，因此，增加了購買一個泵及對該泵維 護的成本。 樣本中待檢抗原的含量很高時，過量抗原和金標抗體結合，與檢測線位置上的抗 體不再形成"夾心復合物"。此時，如按常法測讀，所得結果將低于實際的含量，這種現象被 稱為HOOK效應（HOOK EFFECT，鉤狀效應），因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。HOOK效 應嚴重時，反應甚至可不顯色，而出現假陰性的臨床結果。 綜上所述，在臨床妊娠診斷中，需要一種成本低，操作簡單、快速，特異性好，并可 檢測妊娠期不同時間HCG濃度值的試紙條。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種HCG膠體金免疫側向層析試紙條，該試紙條用HCG抗原 作為質控線，既可以對試紙條起到質控的作用，又可以起到校正的作用，能夠克服HOOK效 應，生產成本低，操作簡單。 本專利技術還提供了一種HCG膠體金免疫側向層析試紙條的檢測方法，先繪制標準曲 線，然后根據標準曲線直接可得出待測樣品中的HCG的濃度值，檢測方法非常簡單，實用， 檢測范圍達到了 10-200000mIU/ml。 為了實現以上技術效果，本專利技術是通過如下步驟實現： -種HCG膠體金免疫側向層析試紙條，其特征在于：該試紙條采用搭接的方式，在 塑料底板上粘貼有硝酸纖維素膜，該硝酸纖維素膜的兩端分別粘貼Fusion5膜和吸水紙； 所述硝酸纖維素膜上設有檢測線T線和質控線C線，所述檢測線T線上噴有T線 溶液，檢測線C線上噴有C線溶液；所述T線和C線上的噴膜量為0. 5-1 y 1/cm。 優選的，所述T線溶液中含有濃度為l-2mg/mL的HCG單克隆單體，所述C線溶液 中含有濃度為l_2mg/mL的HCG抗原。 上述HCG膠體金免疫側向層析試紙條的檢測方法，其步驟包括： (1)、標準曲線的繪制：將不同濃度的HCG標準品分別與等量體積的金標液混合成 混合液，取混合液70-100ul滴加到HCG膠體金免疫側向層析試紙條的Fusion5膜上，層析 8-12分鐘，通過與試紙條配套的免疫層析定量分析儀讀取T線和C線的反射率值，計算T/ C值，然后以標準品的各濃度值為橫坐標，各濃度T/C的平均值為縱坐標，用三次樣條插值 擬合制備標準曲線； (2)、待測樣品的檢測：將待測樣品和與等量體積的金標液混合成混合液，取混合 液70-100 y 1滴加到HCG膠體金免疫側向層析試紙條的Fusion5膜上，層析8-12分鐘，通 過T/C值即可檢測出待測樣品中的HCG濃度值。 所述步驟（1)中，HCG標準品的濃度值分別為10、25、100、500、1000、2500、5000、 10000、25000、50000、100000 和 200000mIU/mL。 所述金標液的制備方法為， (A)、膠體金標記：將待標記的HCG單克隆抗體與空白膠體金溶液離心去除上清 液；沉淀物中加入含有濃度為0. 2% -0. 5%的BSA水溶液封閉，離心去除上清液，沉淀物離 心清洗，然后磷酸緩沖液濃縮至原體積的1/10-1/5,4°C保存備用，即為金貯。 優選的，HCG單克隆抗體與空白膠體金溶液的加入配比為0. 005-0. 02mg HCG單抗 /毫升膠體金溶液。 優選的，所述空白膠體金的平均粒徑15-60nm。 優選的，所述磷酸緩沖液的pH值為7. 2-7. 6,濃度為0. 01-0. 02mol/L，該磷酸緩沖 液中還含有0.5-2%的BSA和1-10%的蔗糖。 (B)調配：用pH值為7.2_7.6的磷酸緩沖液與步驟（A)中的金貯稀釋倍數為 5:1-20:1，即為金標液。 本專利技術的有益效果是： 1、本專利技術制備的HCG膠體金免疫側向層析試紙條可克服HOOK效應，該試紙條以 HCG抗原作為質控線，此處發生的反應是質控線上的HCG抗原和與檢測線反應后剩余的金 標抗體，隨樣本中HCG濃度的增加，質控線可反應的金標抗體減少，因此質控線讀數隨之降 低。通過不同的HCG標準品濃度值為橫坐標，對應的T/C值為縱坐標，用三次樣本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種HCG膠體金免疫側向層析試紙條，其特征在于：該試紙條采用搭接的方式，塑料底板上粘貼有硝酸纖維素膜(3)，該硝酸纖維素膜(3)的兩端分別粘貼Fusion5膜(2)和吸水紙(4)；所述硝酸纖維素膜(3)上設有檢測線T線(5)和質控線C線(1)，所述檢測線T線(5)上噴有T線溶液，檢測線C線(1)上噴有C線溶液；所述T線(5)和C線(1)上的噴膜量為0.5?1μl/cm。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：于靈芝，楊晶，李福剛，
申請(專利權)人：上海奧普生物醫藥有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。