在本文中提供了精通于體內生產糖綴合物的原核細胞，以及用于產生這些細胞的方法和使用這些細胞生產糖綴合物的方法。還包括提及的糖綴合物的組合物以及它們的不同用途。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】【專利說明】通過酶綴合在大腸桿菌中生產重組疫苗 1-前言 在本文中提供了在體內熟練生產糖綴合物的原核細胞，以及用于產生這些細胞的方法 和使用這些細胞生產糖綴合物的方法。還包括了提及的糖綴合物的組合物以及它們的不同 用途。 2-背景 糖基化是將碳水化合物分子或糖(單糖、二糖、寡糖或多糖）連接至蛋白質或多肽的不 同氨基酸殘基的側鏈以產生糖蛋白的過程。 糖蛋白涉及數個過程諸如，細胞相互作用和細胞信號傳導；它們參與分泌蛋白和 膜蛋白的蛋白質折疊、寡聚化、穩定性、質量控制、分選和轉運。蛋白質糖基化在蛋白質的抗 原性、穩定性和半衰期上具有深遠的有利影響。 存在不同種類的糖蛋白，其取決于碳水化合物分子和蛋白質載體中氨基酸殘基之 間的鍵的類型。 N-連接蛋白質糖基化一一將碳水化合物分子添加至靶蛋白的多肽鏈的天冬酰胺 殘基一一是發生在真核生物內質網中的最常見的翻譯后修飾類型。該過程通過酶促的寡糖 基轉移酶復合體（0ST)完成，其在內質網中負責將來自脂質載體(磷酸多萜醇）的預裝配寡 糖轉移至新生蛋白質保守序列Asn-X-Ser/Thr(其中X是除了脯氨酸之外的任何氨基酸)內 的天冬酰胺殘基。隨后糖鏈在高爾基體中經歷其他修飾。N-連接糖基化過程出現在真核生 物中并廣泛出現在古細菌中，但是在細菌中非常罕見(見下文)。 0-連接糖基化是在真核生物、古細菌和細菌中出現的糖基化形式。其包括將糖分 子連接至蛋白靶的氨基酸殘基中的氧原子。已經顯示由于其具有其自身的糖基化機器（glycosylationmachinery)，細菌食 源性病原體空腸彎曲桿菌（CaWjOjioAacter 也可以使其蛋白質N-糖基化（Wacker 等人，Scimce. 2002; 298(5599) : 1790-3)。負責該反應的機器由稱為pgl(指蛋白質糖 基化）的簇編碼。 可以將空腸彎曲桿菌的糖基化機器轉移至大腸桿菌（AcWi)中，以允許通過大 腸桿菌細胞表達的重組蛋白質的糖基化。先前的研究已經證明如何產生可以執行N-糖 基化的大腸桿菌菌株（參見，例如，Wacker等人，Scieflce. 2002; 298 (5599): 1790-3; Nita-Lazar等人，2005; 15 (4): 361-7;Feldman等人， 2005; 102(8):3016-21;Kowarik等人，沒股？ 激你；25(9):1957-66; Wacker等人，Z5rocA2006; 103(18) :7088-93;國際專利申請公開 號恥2003/074687、恥2006/119987、恥 2009/104074和恥/2011/06261和恥2011/138361)。 可以將細菌分為兩類，革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，這取決于它們是否具有 通常由莢膜多糖包圍的單層或雙層鞘細胞膜。這樣的細菌的實例包括鏈球菌屬亞 種（ssp.)、假單胞菌屬亞種敵wasssp.)、奈瑟氏菌屬亞種 (AfeiMeriassp.)、沙門氏菌屬亞種（ssp.)、埃希氏菌屬亞種（fccAericAia ssp.)、葡萄球菌屬亞種ssp.)、彎曲桿菌屬亞種（Ca厚)jioAacterssp.) 等。在醫學和商業上最相關的感染原之一是肺炎鏈球菌（/wei/mwiae)，為 革蘭氏陽性病原體。 肺炎鏈球菌是全世界輕度感染和重度感染兩者的主要原因。與肺炎球菌感染有關 的主要臨床綜合征是肺炎、腦膜炎、血流感染和急性中耳炎，按照發病率和死亡率肺炎是這 些當中最重要的。由肺炎鏈球菌導致的感染尤其是在非常年輕的人和老年人中的重大疾病 負擔的原因（IsaacmanDJ,M.E.，ReinertRR. 2010.Burdenofinvasivepneumococcal diseaseandserotypedistributionamongStreptococcuspneumoniaeisolates inyoungchildreninEurope:impactofthe7-valentpneumococcalconjugate vaccineandconsiderationsforfutureconjugatevaccines.IntJInfectDis. 14:197-209)。 肺炎球菌被分為數個血清型（~93)(基于它們的化學上和血清學上不同的莢 膜多糖)。某些血清型比其他更豐富，與臨床上顯性感染相關，導致嚴重的侵入性感染 并且獲得對一類或多類抗菌劑的耐藥性（Rueda，A.M.M.，MSc;Serpa，Jos6A. MD;Matloobi,MahsaMD;Mushtaq,MahwishMD;Musher,DanielM.MD. 2010.The spectrumofinvasivepneumococcaldiseaseatanadulttertiarycarehospital intheearly21stcentury. (Baltimore) 89:331-336)。已經基于多糖莢膜 的結構區別鑒定了肺炎鏈球菌的不同血清型。根據先前的分析，約10或11種血清型占 據了世界上全部地區超過70%的侵入性小兒感染（HausdorffWP，BryantJ，Paradiso PR,SiberGR:Whichpneumococcalserogroupscausethemostinvasivedisease: implicationsforconjugatevaccineformulationanduse,partI.Clinical infectiousdiseases:anofficialpublicationoftheInfectiousDiseasesSociety 2000，30(1):100-121)。引起疾病的血清型的分布隨年齡、疾病綜合征、疾病 嚴重度、地理區域和隨時間而不同。對青霉素、紅霉素、復方增效磺胺（co-trimoxazole)或 多種藥物有耐藥性的肺炎球菌在很多地區是常見的（Evolvingtrendsin pneumoniaeresistance:implicationsfortherapyofcommunity-acquiredbacterial pneumonia.JonesRN，JacobsMR,SaderHS.IntJAntimicrohAgents.2010 S印；36(3) : 197-204)。 肺炎球菌莢膜是主要的細菌毒力因子之一并且已成功作為抗原在多種疫苗中 使用。針對莢膜多糖的抗體已經顯示出針對肺炎球菌感染是保護性的（MusherDMPH，WatsonDA,BaughnRE:AntibodytocapsularpolysaccharideofStreptococcus pneumoniaeatthetimeofhospitaladmissionforPneumococcalpneumonia.J InfectDis2000, 182(1):158-167>IsaacmanDJME,ReinertRR:Burdenofinvasive pneumococcaldiseaseandserotypedistributionamongStreptococcu本文檔來自技高網...
【技術保護點】
用于生產多糖的經工程改造的革蘭氏陰性菌，其中所述革蘭氏陰性菌包含革蘭氏陽性菌的莢膜多糖基因簇的調節基因。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：M瓦克，M科瓦里克，M韋特，A法里德莫亞耶，
申請(專利權)人：格林考瓦因有限公司，
類型：發明
國別省市：瑞士;CH
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