本發明專利技術提供了一種明月草多糖及其在制備用于免疫調節和抗腫瘤的藥物和功能食品中的應用，本發明專利技術制得的明月草多糖可促進單核巨噬細胞株吞噬中性紅和釋放一氧化氮；可以促進B細胞的增殖和T細胞的增殖；還可明顯提高免疫抑制小鼠脾及胸腺指數、提高在T細胞和B細胞的轉化增殖，提高免疫抑制小鼠白細胞水平；可明顯抑制腫瘤組織的生長；而且還能夠保護機體，抑制體重的下降，并增加體重。而且多糖是明月草的主要功效成分，具有多種保健功效，來源屬于純天然，無副作用，可開發成免疫調節、抗腫瘤、抗血管生成藥品和保健品，因此具有良好的市場應用前途。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫藥
，具體涉及一種明月草多糖及其在制備用于免疫調節和 抗腫瘤的藥物和功能食品中的應用。
技術介紹
近年來，免疫功能低下，包括原發性及繼發性免疫功能缺陷、缺乏或受損，受到國 內外研究者的廣泛關注，因為它們本身及所誘發的各種并發癥，特別是感染，常使病人的病 情加重，難以治療，并可引起嚴重的后果，甚至危及生命。因此，尋找安全的改善機體免疫功 能的藥物將會挽救更多的患者，在衛生保健行業有很好的應用前景。 另外，腫瘤是二十一世紀醫療領域的艱難課題，是全球死亡率最高的疾病，尋找高 效低毒的抗腫瘤藥物成為藥物研發的新趨勢。從20世紀50年代發現的酵母β_葡聚糖 具有抗腫瘤作用給了人們新的希望開始，多糖的抗腫瘤活性成為新的熱點。目前已從各種 真菌、植物中分離出了許多抗腫瘤活性的多糖。研究發現，多糖主要通過兩個主要途徑發揮 抗腫瘤活性：一類是具有細胞毒性的多糖，直接殺死腫瘤細胞，一類是免疫調節劑的活性多 糖，主要通過增強機體免疫力從而達到間接殺死腫瘤細胞。 明月草（Angelica keiskei Koidzumi)又稱金雞毛草，明日葉，亦屬菊科菊三七 屬，為宿根多年草本植物，原產于新加坡。明月草以莖葉供菜用，其莖葉中含有豐富的蛋白 質、氨基酸、黃酮、維生素、微量元素等活性成分，全草可入藥，藥性均為寒性、微有苦味。該 中草藥主要作用是清熱解毒，在治療毒蛇咬傷方面療效顯著。且對人體內凡是由于熱性引 起的各種炎癥、如胃炎、肝炎、支氣管炎等均有療效。在民間被譽為"救命草"或"神草"。 研究證明，多糖是中草藥發揮獨特療效的重要物質基礎，多糖可通過激活免疫細 胞，促進細胞因子生成及表達，對免疫系統發揮多方面的免疫調節作用。明月草多糖作為其 中的重要組成成分，近年來研究發現這兩種化合物均具有抗糖尿病活性及降血壓功效，但 針對明月草多糖或者明月草多糖的免疫調節和抗腫瘤活性，未見相關研究。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供了一種明月草多糖及其在制備用于免疫調節和抗腫瘤的 藥物和功能食品中的應用，本專利技術的技術方案為臨床提供了適合免疫低下患者、腫瘤患者 或亞健康人群服用的藥品或保健品。 為實現上述專利技術目的，本專利技術采用以下技術方案予以實現： -種明月草多糖，它通過以下制備方法制得：將明月草的莖葉干燥粉碎并過篩得 到明月草粉末，再加入占明月草粉末10-30倍質量的水，80-KKTC回流提取2-4h，離心， 取上清液；向去掉上清的沉淀中再加入占所述沉淀5-15倍質量的水，80-100 °C回流提取 2_4h，離心取上清液；合并兩次回流獲得的上清液，向上清液中加入乙醇使乙醇終濃度為 75%，醇沉過夜，離心去上清，沉淀經除蛋白和脫色后，凍干，最后得到所述明月草多糖。 所述明月草多糖分子量為20_2000KDa，總糖含量為20-85.0%，糖醛酸含量為 30-70 %〇 所述明月草多糖含有阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、半乳糖醛 酸、葡糖糖醛酸或氨基葡萄糖中的一種或多種。 本專利技術還提供了所述的明月草多糖在制備用于免疫調節的藥物和功能食品中的 應用。 對上述技術方案的進一步改進：所述明月草多糖具有增強單核巨噬細胞株細胞吞 噬中性紅的能力。 對上述技術方案的進一步改進：所述明月草多糖具有增強單核巨噬細胞株細胞分 泌一氧化氮的能力。 對上述技術方案的進一步改進：所述明月草多糖能提高小鼠的T淋巴細胞增殖指 數和B淋巴細胞增殖指數。 對上述技術方案的進一步改進：所述明月草多糖能提高小鼠的脾臟指數和胸腺指 數。 本專利技術還提供了所述的明月草多糖在制備用于抗腫瘤的藥物和功能食品中的應 用。 對上述技術方案的進一步改進：所述明月草多糖能明顯抑制腫瘤組織的生長和明 顯抑制靜脈內皮細胞的迀移。 本專利技術的技術方案具有如下優點：本專利技術提供了具體明月草多糖的制備方法，制 得的明月草多糖可促進RAW264. 7單核巨噬細胞株吞噬中性紅和釋放一氧化氮；可以促進 LPS誘導的B細胞的增殖，并促進ConA誘導的T細胞的增殖；還可明顯提高免疫抑制小鼠 脾及胸腺指數、提高在T細胞和B細胞的轉化增殖，提高免疫抑制小鼠白細胞水平；可明顯 抑制腫瘤組織的生長；而且還能夠保護機體，抑制體重的下降，并增加體重；可明顯抑制靜 脈內皮細胞的迀移；明月草多糖具有較強的抗血管生成作用。 本專利技術所述明月草多糖對特異性免疫和非特異性免疫、體液免疫和細胞免疫均具 有促進作用，同時具有抑制腫瘤生長和血管迀移作用，而且多糖是明月草的主要功效成分， 具有多種保健功效，來源屬于純天然，無副作用，可開發成免疫調節、抗腫瘤、抗血管生成藥 品和保健品，因此具有良好的市場應用前途。【附圖說明】 圖1是本專利技術中明月草多糖對腫瘤生長的抑制率實驗結果。【具體實施方式】 下面結合附圖和具體實施例對本專利技術的技術方案做進一步詳細的說明。 實施例1、明月草多糖的提取制備及分析 明月草多糖的制備方法如下：取50g明月草莖葉粉末，加入20倍質量的去離子水， 80-100°C回流提取2h，離心，取上清，并且沉淀加入5倍質量的去離子水，80-100°C回流提 取2h，離心，合并濾液，將濾液加入一定量的95 %乙醇使乙醇終濃度為75 %，醇沉過夜，離 心去上清，沉淀經除蛋白和脫色后，凍干，最后得到的生物活性多糖即為本專利技術所述的明月 草多糖。 所述明月草多糖經HPLC分子量測定，重均分子量為20_2000KDa，總糖含量為 20-85. 0%，糖醛酸含量為30-70%，組成其結構的多糖有阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳 糖、木糖、葡萄糖、半乳糖醛酸或氨基葡萄糖中的一種或幾種。 實施例2、明月草多糖對RAW264. 7細胞吞噬中性紅的促進作用 小鼠單核巨噬細胞RAW264. 7細胞，用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養基培養。 取對數生長期細胞以1.0 X 105cells/mL的濃度接種于96孔板中，在5% C02,37°C，飽和濕 度的恒溫培養箱中培養至細胞貼壁后（約6-8h)，加入含不同濃度明月草多糖（1、5、10、25、 50、100 μ g/ml)共6個濃度，陽性藥為香菇多糖，終濃度2 μ g/ml，每個濃度設置4個平行 孔，培養12h后取出，吸走原有培養基，常溫PBS洗一遍，每孔加入IOOyL 0.075%的中性 紅染液，繼續常規孵育30min，吸走中性紅，PBS洗兩遍，常溫裂解液裂解（裂解液：無水乙 醇：冰乙酸=I: I) 20min，至完全溶解后，用酶標儀540nm處比色，測其各自的OD值，計算 RAW264. 7細胞吞噬中性紅的能力。 吞噬指數=給藥孔OD值/空白孔OD值 表1明月草多糖對RAW264. 7細胞吞噬中性紅的影響 實驗結論：由表1可以看出，明月草多糖在1 μ g/ml~100 μ g/ml范圍內都具有 一定的增強RAW264. 7細胞吞噬中性紅的能力，且呈現一定的劑量依耐性，在給藥劑量為 50μg/ml時效果最佳，與空白組相比具有顯著性差異。說明明月草多糖可以顯著提高單核 巨噬細胞株的吞噬能力，從而提高機體的非特異性免疫。 實施例3、明月草多糖對促進RAW264. 7細胞分泌一氧化氮的作用 小鼠單核巨噬細胞RAW264. 7細胞，用含10%胎牛血清的DMEM高糖本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種明月草多糖，其特征在于它通過以下制備方法制得：將明月草的莖葉干燥粉碎并過篩得到明月草粉末，再加入占明月草粉末10?30倍質量的水，80?100℃回流提取2?4h，離心，取上清液；向去掉上清的沉淀中再加入占所述沉淀5?15倍質量的水，80?100℃回流提取2?4h，離心取上清液；合并兩次回流獲得的上清液，向上清液中加入乙醇使乙醇終濃度為75%，醇沉過夜，離心去上清，沉淀經除蛋白和脫色后，凍干，最后得到所述明月草多糖。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：管華詩，郝杰杰，周曉琳，敦云樓，于廣利，夏萱，
申請(專利權)人：青島海洋生物醫藥研究院股份有限公司，
類型：發明
國別省市：山東;37
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