一種疫苗組合物及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述疫苗組合物包括P46蛋白、P65蛋白、NrdF蛋白和獸醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑，且不含P36蛋白；所述疫苗組合物還可包括P97R1和/或P102蛋白。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了含所述疫苗組合物在制備預(yù)防和/或治療豬支原體肺炎的藥物中的應(yīng)用。所述疫苗組合物可通過基因工程手段對疫苗組合物的組分進行大量重組表達，不僅耗時短，還可便于大規(guī)模生產(chǎn)；并且該疫苗組合物中多免疫原性蛋白片段的組合可誘導(dǎo)產(chǎn)生協(xié)同的免疫效果。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于獸用生物制品
，具體涉及豬支原體肺炎疫苗組合物及其應(yīng) 用。
技術(shù)介紹
豬支原體肺炎（Mycoplasmalpneumonia of swine, MPS)又稱豬喘氣病（李彥明， 張映.豬肺炎支原體生物學(xué)研究進展，動物醫(yī)學(xué)進展，2003, 24(3):25-27)或豬地方性流 行性肺炎，是由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)所引起的一種豬接觸性慢 性呼吸道疾病，分布十分廣泛，以慢性、接觸性、高度傳染性、高發(fā)病率以及低死亡率等為特 點，主要表現(xiàn)為咳嗽和呼吸困難，解剖可見肺組織呈肉變或大理石樣病變。 衣阿華大學(xué)Ross研究發(fā)現(xiàn)：Mhp感染后淋巴細胞產(chǎn)生抗體的能力下降，細胞免疫 力下降，肺泡巨噬細胞對病原的吞噬和清除能力亦下降，抑制性T細胞的活動增強，導(dǎo)致 呼吸道免疫力減弱，抗病力下降，從而使其他病原體更容易侵入，可繼發(fā)感染豬繁殖與呼 吸綜合征、豬圓環(huán)等，從而導(dǎo)致多種疫苗接種失敗。Mhp可經(jīng)空氣傳播，易與其他細菌性疾 病如豬肺疫、傳染性胸膜肺炎等并發(fā)(王茂文，豬肺炎支原體病的特點及其防制措施.畜 禽業(yè)，2008 (2): 16-17; Dee S，0take S，Oliveira S，et al. Evidence of long distance airborne transport of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and Mycoplasma hyopneumoniae. Veterinary research, 2009, 40(4) : 39)，對養(yǎng)豬業(yè)造成重大 的經(jīng)濟損失，是當(dāng)前最常發(fā)生、最廣流行、最難凈化的重要疫病之一。 豬支原體肺炎亞單位疫苗不含全菌疫苗的核酸，不僅不存在滅活不徹底造成的 安全隱患，而且由于其不含全菌的所有抗原，有利于疾病的凈化。但目前豬支原體肺炎 亞單位疫苗免疫效果不佳，不能給豬提供完全的保護（Fagan PK，Djordievic SP. Chin J, et al. Oral immunization of mice with attenuated Salmonella typhimurium aroA expressing a recombinant Mycoplasma hyopeumoniae antigen(NrdF). Inffction and immunity, 1997, 65:2502-2507)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供了一種豬支原體肺炎疫苗組合物。 本專利技術(shù)的主要目的在于提供一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述疫苗組合物含有 P46蛋白、P65蛋白、NrdF蛋白和獸醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑，其特征在于，所述疫苗組合物不含 P36蛋白。 本專利技術(shù)所用術(shù)語"豬支原體肺炎"在臨床上的癥狀包括(但不限于）：呼吸癥狀(嚴 重急性臨床肺炎、咳嗽、呼吸困難、呼吸速迫)、發(fā)熱、高度傳染性、高發(fā)病率、低死亡率、壞死 性細胞支氣管炎及繼發(fā)性細菌性呼吸道感染增加。 本專利技術(shù)所用術(shù)語"豬支原體肺炎疫苗組合物"是指能夠用于預(yù)防和/或治療由豬 肺炎支原體感染所知病癥或疾病的疫苗，該疫苗組合物可包括任何能夠有效預(yù)防和/或治 療豬受豬肺炎支原體感染的疫苗，能夠用于豬支原體肺炎疫苗組合物包括(但不限于）完全 或部分豬支原體肺炎細胞制劑、滅活或改良活體疫苗、亞單位疫苗。 本專利技術(shù)所述的豬支原體肺炎疫苗組合物優(yōu)選為亞單位疫苗，所述"亞單位疫苗"包 含一個或多個豬肺炎支原體衍生的多肽或蛋白質(zhì)，或所述多肽或蛋白質(zhì)的免疫原性片段， 或編碼所述一個或多個豬肺炎支原體衍生多肽或蛋白質(zhì)，或所述多肽或蛋白質(zhì)免疫原性片 段的一個或多個豬肺炎支原體基因或核酸，且所述基因或核酸能在豬體內(nèi)進行表達。豬肺 炎支原體多肽、蛋白質(zhì)、所述多肽和蛋白質(zhì)的免疫原性片段、或豬肺炎支原體基因或核酸可 用于本領(lǐng)域公知技術(shù)合成或重組制備。 本專利技術(shù)所用術(shù)語"預(yù)防和/或治療"在涉及豬肺炎支原體感染時是指抑制豬肺炎 支原體細菌的復(fù)制、抑制豬肺炎支原體的傳播或防止豬肺炎支原體在其宿主體內(nèi)定居，以 及減輕豬肺炎支原體感染所之疾病或病癥的癥狀。若細菌荷載量減少、肺部感染減輕和/ 或攝食量和/或生長增加，那么就可以認為所述治療達到了治療效果。 本專利技術(shù)所用術(shù)語"豬"是指任何屬于豬科（Suidae)成員的動物，如豬。 本專利技術(shù)所用術(shù)語"P46蛋白"屬于Mhp的細胞膜表面抗原蛋白，引起早期免疫反 應(yīng)；該蛋白分子量達46kD，為含1257bp (編碼419AA)的ORFs (Open reading frames,即 開放閱讀框）；該蛋白種內(nèi)高度保守，且其基因序列中有3個編碼色氨酸（Trp)的密碼子 TGA (Futo S，Seto Y，Mitsuse S，et al. Molecular cloning of a46_kilodalton surface antigen (p46)gene from mycoplasma hyopneumoniae:direct evidence of egg codon usage for arginine，J Bacteriol， 1995, 177(7):1915-1917)。 優(yōu)選地，所述P46蛋白為SEQ ID No.2或SEQ ID No.4編碼的一種或兩種蛋白混 合物。 所述P46蛋白的核苷酸序列可為SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 3。 本專利技術(shù)所用術(shù)語"P65蛋白"是一種解脂酶（lipoiytic enzyme),是Mhp主要的 具有免疫原性的細胞膜表面脂蛋白之一，屬于熱休克Hsp70家族；該蛋白分子量達65kD， 為含1803bp (編碼600AA)的ORFs，且基因序列中含1個編碼色氨酸（Trp)的密碼子TGA (Kim SW，Kim MF. Major membrane surface proteins of Mycoplasma hyopneumoniae selectively modified by covalently bound lipid.Journal of bacteriology, 1987 ，169:5546_5555;Kim MF, Heidari MB, Stull SJ，et al. Identification and mapping of an immunogenic region of Mycoplasma hyopneumoniae p65surface lipoprotein expressed in Escherichia coli from a cloned genomic fragment. Infection and immunity，1990, 58:2637-2643)。 優(yōu)選地，所述P65蛋白為SEQ ID No. 6或SEQ ID No. 8編碼的一種或兩種蛋白混 合物。 所述P65蛋白的核苷酸序列可為SEQ ID No. 5、SEQ ID No. 7。 本專利技術(shù)所用術(shù)語"NrdF蛋白"是核苷酸還原酶，含96AA (以TAA終止）（Fagan PK,Djordjevic本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述疫苗組合物含有P46蛋白、P65蛋白、NrdF蛋白和獸醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑，其特征在于，所述疫苗組合物不含P36蛋白。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張許科，孫進忠，王瑩，田克恭，
申請(專利權(quán))人：普萊柯生物工程股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：河南;41