一種汞?IgM螯合物及其制備方法和應用技術

本發明專利技術公開了一種汞?IgM螯合物及其制備方法和應用，該汞?IgM螯合物是汞離子與IgM通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成。本發明專利技術建立了汞?IgM螯合物的定性定量檢測方法，以便定量檢測汞?IgM螯合物在評價一個地區汞污染程度的應用。通過定量檢測一個地區人群血清中汞?IgM螯合物可以間接反映這個地區人群受汞污染的情況，從而間接反映這個地區汞污染程度。本發明專利技術建立的汞?IgM螯合物定量檢測方法其準確度大大提高，并且使檢測的重復性得到大大提高。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及檢測領域，更具體地說，涉及一種汞-IgM螯合物及其制備方法和應 用。
技術介紹
血清中IgM是由5個單體通過一個J鏈和二硫鍵連接成五聚體，分子量最大，為 970kD，沉降系數為19S，稱為巨球蛋白（maHgoglobulin)。在分子結構上IgM無鉸鏈區，C μ 2 可能替代了鉸鏈區的功能。在生物進化過程中IgM是最早出現的免疫球蛋白。在個體發育 過程中，無論是B細胞膜表面Ig(SmIg)，還是合成分泌到血清中的Ig，IgM都是最早出現的 Ig，在胚胎發育晚期的胎兒即有能力產生IgM。在抗原刺激誘導體液免疫應答過程中，一般 IgM也最先產生。IgM占血清總Ig的5%~10%。由于IgM在免疫應答早期產生，并在補體 參與下的溶血作用比IgG強500倍以上，而且活化補體后通過C3b、C4b等片段發揮調理作 用，因此IgM在機體的早期免疫防護中占有重要地位。天然的血型抗體（凝集素）為IgM， 血型不符的輸血，易發生嚴重的溶血反應。IgM不能過胎盤，臍血中如出現針對某種病原微 生物的IgM，表示胚胎期有相應病原微生物如梅毒螺旋體、風疹或巨細胞毒等感染，稱為胚 胎感染或垂直感染。正常人血清中也含有產量單體IgM。 萊（Mercury，Hg)是一種無處不在的重金屬，廣泛應用于工業、農業、醫藥業，是 一種非常重要的環境污染物。2011年，美國毒物和疾病登記署（United States Agency for Toxic Substances and Disease Registry，ATSDR)已將其列入物質優先列表內 (Substance Priority List)，而世界衛生組織（World Health 0rganization，WH0)也早已 將其列為10大最易引起健康問題的化學品之一。在美國，Cr與Hg、Cd、Pb被認為是四大環 境污染物，嚴重影響著人們的身體健康。常見的汞職業暴露人群包括從事金屬冶煉、開采金 礦、燒煤、電產業和木材生產的人群，而對于普通人群主要通過食入汞污染的海鮮、飲入汞 污染水源、吸入燃料燃燒或蒸發的汞蒸氣。此外，含汞化妝品的接觸、填充汞合金牙科填充 物、接觸疫苗防腐劑中的乙基汞、含汞殺蟲劑的接觸都是常見的汞暴露方式，汞與人們的生 活密切相關。2009年，國家健康與營養測試調查中發現（National Health and Nutrition Examination Study, NHANES)，2%的美國育齡期婦女體內的汞都超標。汞被認為是對人體 及其有害的，會影響人體的多個組織、器官及系統，包括心血管系統、呼吸系統、神經系統、 內分泌系統、消化系統、泌尿系統、免疫系統等，對人體危害極大。 目前可以運用多種方法檢測出血汞含量，包括ELISA、原子吸收光譜（Atomic Absorption Spectroscopy，AAS)定量檢測法、電感親合等離子體質譜儀（inductively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS)定量檢測法等，但仍存在一定缺陷。 關于汞中毒，特別是慢性汞中毒的評價，僅能通過檢測血汞含量，間接反應人體內 的循環汞含量，無法進一步評估汞對于機體功能的損傷程度，而隨著科學技術的飛速發展， 汞與人體的關系也日益緊密，因而尋找一種可以從機體功能角度評價汞中毒，特別是慢性 汞中毒對于機體的損害程度的評價方式日益重要。
技術實現思路
針對汞污染嚴重的問題，本專利技術的目的在于提供一種汞-IgM螯合物及其制備方 法，并建立萊-IgM螯合物的定性、定量檢測方法，以便定量檢測萊-IgM螯合物在評價一個 地區汞污染程度的應用。通過定量檢測一個地區人群血清中汞-IgM螯合物可以間接反映 這個地區人群受汞污染的情況，從而間接反映這個地區汞污染程度。 本專利技術解決其技術問題所采用的技術方案是：提供一種汞-IgM螯合物，汞離子與 IgM通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成。 本專利技術還提供一種上述的汞-IgM螯合物的制備方法，包括以下步驟： A)汞與IgM的螯合反應：在人源的IgM中加入汞離子進行螯合反應，得到反應溶 液； B)純化汞-IgM螯合物的提取：采用免疫親和層析法，去除反應溶液中未反應的 IgM以及多余的汞離子，即得汞-IgM螯合物。 其中，體外合成法中所述步驟B)具體如下： (1)溶解樣品：向經過步驟A)得到的反應溶液中加入生理鹽水，使汞-IgM螯合物 復溶； (2)平衡層析柱：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在層析柱中裝入能與IgM特 異性結合的填料，裝柱后，繼續使用稀釋緩沖液平衡層析柱； (3)上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟（1)中樣品，然后上柱，IgM與 填料特異性結合； (4)洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0. 05-0. lmol/L的磷 酸鹽溶液進行洗脫； (5)收集：收集經過步驟（4)洗脫后的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復性； (6)透析：將步驟（5)中的收集的洗脫液，裝透析袋，用CldH2O透析除鹽，換水三次 后，4°C透析過夜，收集樣本； (7)平衡層析柱：采用新的層析柱，用稀釋緩沖液沖洗管路，在該層析柱中裝入能 與汞特異性結合的填料，裝柱后再用稀釋緩沖液平衡層析柱； (8)上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟(6)中樣本，然后上柱； (9)洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0. 5-1. Omol/L的磷 酸鹽溶液進行洗脫； (10)收集：收集經過步驟（9)洗脫后的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復性； (11)透析：將步驟（10)中的收集的洗脫液，裝透析袋，用CldH2O透析除鹽，換水三 次后，4°C透析過夜，收集樣本，即得汞-IgM螯合物。 其中，上述汞-IgM螯合物的制備方法，還包括步驟C):對汞-IgM螯合物的鑒定； 其中，步驟C)中具體如下： (1)制備膠床：以瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠中的一種作為介質制備膠床； (2)加樣：取步驟B)中提取純化得到的汞-IgM螯合物，加入稀釋緩沖液，并混勻， 然后加樣于樣品槽中； (3)電泳：連接電泳板，進行電泳； (4)檢測：在膠床上找出含汞的蛋白條帶，將該蛋白條帶取出，將蛋白條帶復溶， 然后再采用ICP-MS法、AAS法或ELISA法檢測是否含有汞以及檢測汞的含量。 本專利技術還提供一種如上述的汞-IgM螯合物在制備檢測人體內汞-IgM螯合物的試 劑或試劑盒中的應用。 本專利技術還提供一種至少包括如上述的汞-IgM螯合物作為對照品的試劑盒。 優選地，該試劑盒中還包括包被液，該包被液含有可捕獲IgM的蛋白或捕獲金屬 汞的物質。 本專利技術還提供一種定量檢測汞-IgM螯合物的方法，以已知含量的上述的汞-IgM 螯合物作為對照品，采用以下方法之一對樣品進行檢測：酶聯免疫法、酶聯免疫與原子吸收 光譜結合法、酶聯免疫與電感耦合等離子體質譜結合法、提純汞-IgM螯合物與酶聯免疫結 合法、提純汞-IgM螯合物與原子吸收光譜結合法、提純汞-IgM螯合物與電感耦合等離子體 質譜結合法、電泳與酶聯免疫或原子吸收光譜或電感耦合等離子體質譜結合法。 實施本專利技術的汞-IgM螯合物及其制備方法和應用，具有以下有益效果： 1.本本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種汞?IgM螯合物，其特征在于，汞離子與IgM通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張積仁，陽帆，董欣敏，吳婧，蔡睿，孫遙，趙乙木，
申請(專利權)人：上海拜豪生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31