本發明專利技術公開了一種具有抗多藥耐藥作用的阿霉素和白藜蘆醇共遞送納米遞藥系統。該納米遞藥系統為脂質混合PLGA納米粒，其內核為聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)，以對甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-膽固醇連接物(AA-PEG-hyd-CHOL)插入其表面，并將阿霉素(DOX)和白藜蘆醇(RES)共同包封于脂質混合PLGA納米粒中從而得到阿霉素和白藜蘆醇共遞送納米粒。該納米遞藥系統具有主動識別腫瘤細胞和pH敏感特性，可將阿霉素和白藜蘆醇同時定位釋放于腫瘤細胞，并利用兩種藥物間的協同作用，逆轉腫瘤耐藥，增強抗腫瘤活性，為治療具有多藥耐藥的腫瘤提供了新策略。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種具有抗多藥耐藥的腫瘤主動靶向阿霉素和白藜蘆醇共遞送納米遞藥系統的處方組成及應用方案，遞藥系統為共同包封阿霉素(DOX)和白藜蘆醇(RES)的新型脂質混合聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)納米粒。
技術介紹
癌癥是一種普遍的公共健康問題，有數以千萬計的人因這一致命疾病而喪生。化療是癌癥治療的主要手段之一。近年來的體內外實驗發現，腫瘤細胞對細胞毒類化療藥物產生的內在性和獲得性多重耐藥性(multidrug resistance，MDR)是臨床惡性腫瘤化療失敗最常見和最難以克服的問題之一。并且，MDR—經形成一般是永久性的，一旦腫瘤細胞對某一種化療藥物產生耐藥，亦可對其他化學結構、細胞作用靶點和作用機理不同的多種抗腫瘤藥物產生交叉耐藥性，從而呈現出獨特的廣譜耐藥現象。阿霉素(DOX)作為腫瘤化療的一線藥物，具有療效確切、價格低廉等特點，但阿霉素對正常組織的毒副作用和易耐藥的特點限制了其臨床應用。白藜蘆醇(Resveratrol，RES)是一種非黃酮類多酚化合物，廣泛存在于葡萄、虎杖、花生等植物中。隨著對白藜蘆醇的深入研究，發現白藜蘆醇可以通過干擾腫瘤細胞生長、誘導P53、抑制核苷酸還原酶、抑制細胞色素P450等機制產生對腫瘤細胞的抑制作用。并且，近幾年的研究發現，白藜蘆醇還可作為一種化療藥物增敏劑，增加阿霉素等化療藥物在細胞內的積累，從而增強其對腫瘤的抑制作用。同時，白藜蘆醇還可通過抑制P-糖蛋白活性，下調ATP結合盒(ABC)轉運蛋白基因(如抑制MDRl和MRPl的水平)，抗氧化等機制增強化療藥物的抗腫瘤作用。本研究通過把阿霉素和白藜蘆醇同時載入PLGA納米載體中，同時，在納米粒表面嵌入功能化的混合脂質，使納米粒兼具腫瘤主動革E向、抗多藥耐藥等多種功能，改變DOX及RES在體內的分布，達到增強DOX的抗腫瘤作用、降低DOX的毒副作用、逆轉DOX耐藥的目的。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種具有抗多藥耐藥作用的阿霉素和白藜蘆醇共遞送納米遞藥系統。通過遞藥系統的設計，可將阿霉素和白藜蘆醇同時定位釋放于腫瘤細胞內，并利用兩種藥物間的協同作用，逆轉腫瘤耐藥，增強抗腫瘤活性，從而得到高效、低毒、逆轉耐藥的遞藥系統，為治療具有多藥耐藥的腫瘤提供了新思路。本專利技術的技術方案是:一種具有抗多藥耐藥作用的阿霉素和白藜蘆醇共遞送納米遞藥系統，該納米遞藥系統為脂質混合PLGA納米粒，其內核為聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)，以對甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-膽固醇連接物(AA-PEG-hyd-CHOL)插入其表面，并將阿霉素(DOX)和白藜蘆醇(RES)共同包裹于脂質混合PLGA納米粒中從而得到共同載藥納米粒。其中(I)對甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-膽固醇連接物(AA-PEG-hyd-CHOL)的制備方法是:稱取適量氨基己酸，以無水二氯甲烷溶解，再將對甲氧基苯甲酰氯緩慢加入到上述溶液中，常溫下磁力攪拌至反應完全，真空旋轉蒸發反應液。將反應物以少量的乙酸乙酯完全溶解，并以0.5M的稀鹽酸進行洗滌萃取，棄去水相，加入無水硫酸鈉干燥過夜。過濾棄去固體相，真空旋轉蒸發有機相，以硅膠色譜柱分離純化所得到的對甲氧基苯甲酰胺基己酸(AA) ο將1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽與N-N-羥基琥珀酰亞胺(EDCI/NHS)于二氯甲烷中溶解，加入上述合成的對甲氧基苯甲酰胺基己酸，常溫下磁力攪拌4小時，活化后加入兩末端均為氨基修飾的聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)和少量三乙胺(TEA)，繼續磁力攪拌反應完全，真空旋轉蒸發反應液；以適量甲醇溶解反應物，蒸餾水透析24小時，冷凍干燥，得AA-PEG-NH2;另稱適量對乙酰基苯甲酸溶于二氯甲烷，加入EDCI/NHS，反應液活化4小時后加入AA-PEG-NH2，并以少量TFA催化至反應完全，真空旋轉蒸發反應液，用少量甲醇重新溶解產物，蒸餾水透析24小時，冷凍干燥，得到AA-PEG-對乙酰基苯甲酸。稱取適量膽固醇溶解于二氯甲烷中，并依次加入丁二酸酐、DMAP, TEA，室溫下磁力攪拌，而后以硅膠色譜柱分離純化所得到的膽固醇-琥珀酸單酯(CHOL-suc);然后，將CHOL-suc、EDCI/NHS于二氯甲烷中溶解并反應活化6小時，將適量肼基甲酸叔丁酯(Boc-NH-NH2)和少量TEA投入反應液中，并以硅膠色譜柱分離純化所得到膽固醇-琥珀酸-NHNHBoc ;最后將得到膽固醇-琥珀酸-NHNHBoc溶于二氯甲烷，加入少量三氟乙酸(TFA)，常溫下磁力攪拌至反應完全，以二氯甲烷/水萃取反應液，棄去水相，冷凍干燥得膽固醇-琥珀酰肼(CHOl-NHNH2)。稱取適量AA-PEG-對乙酰基苯甲酸和CHOL-NH-NH2溶于適量二氯甲烷中，并加入少量TFA，常溫下磁力攪拌至反應完全，真空旋轉蒸發反應液，以適量甲醇溶解反應物，蒸餾水透析24小時，冷凍干燥，得到具有pH敏感特性的目標物對甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-膽固醇連接物(AA-PEG-hyd-CHOL)。(2)共同包裹阿霉素(DOX)和白藜蘆醇(RES)的脂質混合PLGA納米粒的制備:稱量一定量的PLGA On1)和一定量的 AA-PEG-1iyd-CHOLOi^m1= 2m2)溶于二氯甲烷中(V1),以少量乙醇溶解白藜蘆醇，并將一定量的鹽酸阿霉素溶于蒸餾水中(V2，V2= 2Vi)，將上述三種溶液混合并進行超聲乳化，將0.3%的聚乙烯醇(PVA，V3, V3= V !+V2)加入超聲后的液體中，并再次進行超聲以固定初步形成的納米載體；轉移液體至敞口燒杯中，室溫下磁力攪拌4小時，而后進行低溫超速離心(12000rpm，15分鐘，4°C )，棄上清液，以蒸餾水沖洗得到的沉淀并重新分散所得固體，即為目標納米粒。本專利技術設計了一種新型納米遞藥系統，此遞藥系統是脂質混合PLGA納米粒，納米粒結構包括PLGA、對甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-膽固醇連接物(AA-PEG-hyd-CHOL)。該納米粒具有腫瘤主動靶向性，將阿霉素和白藜蘆醇同時釋放于茴香酰胺受體高表達的腫瘤細胞中，從而發揮逆轉耐藥及抗腫瘤活性。【附圖說明】圖1A是同時負載DOX和RES的脂質混合PLGA納米粒(NPs)的DLS粒徑圖。圖1B是同時負載DOX和RES的脂質混合PLGA納米粒(NPs)的zeta電位圖。圖2是不同時間點NPs于各個pH(pH 5.0, pH 6.5和pH 7.4)緩沖液介質中釋放阿霉素和白藜蘆醇量的曲線。**ρ〈0.01，*ρ〈0.05，vspH = 7.4等時間點DOX釋放量；##ρ〈0.01，#ρ〈0.05，vs pH = 7.4 等時間點 RES 釋放量。圖3A是游離D0X、游離RES，游離DOX與RES混合溶液(MIX)，及同時負載DOX和RES的脂質混合PLGA納米粒(NPs)對H印G2細胞的細胞毒性。圖3B是游離D0X、游離RES，游離DOX與RES混合溶液(MIX)，及同時負載DOX和RES的脂質混合PLGA納米粒(NPs)對A549細胞的細胞毒性。圖3C是游離D0X、游離RES，游離DOX與RES混合溶液(MIX)，及同時負載DOX和RES的脂質混合PLGA納米粒(NPs)對MDA-MB-231細胞的細胞毒性。圖3D是游離D0X本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種具有抗多藥耐藥作用的阿霉素和白藜蘆醇共遞送納米遞藥系統，其特征是遞藥系統是脂質混合PLGA納米粒，其內核為聚乳酸?羥基乙酸共聚物(PLGA)，以對甲氧基苯甲酰胺?聚乙二醇?膽固醇連接物(AA?PEG?hyd?CHOL)插入其表面，具體制備方法如下：(1)對甲氧基苯甲酰胺?聚乙二醇?膽固醇連接物(AA?PEG?hyd?CHOL)的制備方法是：稱取適量氨基己酸，以無水二氯甲烷溶解，再將對甲氧基苯甲酰氯緩慢加入到上述溶液中，常溫下磁力攪拌至反應完全，真空旋轉蒸發反應液。將反應物以少量的乙酸乙酯完全溶解，并以0.5M的稀鹽酸進行洗滌萃取，棄去水相，加入無水硫酸鈉干燥過夜。過濾棄去固體相，真空旋轉蒸發有機相，以硅膠色譜柱分離純化所得到的對甲氧基苯甲酰胺基己酸(AA)。將1?乙基?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽與N?N?羥基琥珀酰亞胺(EDCI/NHS)于二氯甲烷中溶解，加入上述合成的對甲氧基苯甲酰胺基己酸，常溫下磁力攪拌4小時，活化后加入兩末端均為氨基修飾的聚乙二醇(NH2?PEG?NH2)和少量三乙胺(TEA)，繼續磁力攪拌反應完全，真空旋轉蒸發反應液；以適量甲醇溶解反應物，蒸餾水透析24小時，冷凍干燥，得AA?PEG?NH2；另稱適量對乙酰基苯甲酸溶于二氯甲烷，加入EDCI/NHS，反應液活化4小時后加入AA?PEG?NH2，并以少量TFA催化至反應完全，真空旋轉蒸發反應液，用少量甲醇重新溶解產物，蒸餾水透析24小時，冷凍干燥，得到AA?PEG?對乙酰基苯甲酸；稱取適量膽固醇溶解于二氯甲烷中，并依次加入丁二酸酐、DMAP、TEA，室溫下磁力攪拌，而后以硅膠色譜柱分離純化所得到的膽固醇?琥珀酸單酯(CHOL?suc)；然后，將CHOL?suc、EDCI/NHS于二氯甲烷中溶解并反應活化6小時，將適量肼基甲酸叔丁酯(Boc?NH?NH2)和少量TEA投入反應液中，并以硅膠色譜柱分離純化所得到膽固醇?琥珀酸?NHNHBoc；最后將得到膽固醇?琥珀酸?NHNHBoc溶于二氯甲烷，加入少量三氟乙酸(TFA)，常溫下磁力攪拌至反應完全，以二氯甲烷/水萃取反應液，棄去水相，冷凍干燥得膽固醇?琥珀酰肼(CHOL?NHNH2)；稱取適量AA?PEG?對乙酰基苯甲酸和CHOL?NH?NH2溶于適量二氯甲烷中，并加入少量TFA，常溫下磁力攪拌至反應完全，真空旋轉蒸發反應液，以適量甲醇溶解反應物，蒸餾水透析24小時，冷凍干燥，得到具有pH敏感特性的目標物對甲氧基苯甲酰胺?聚乙二醇?膽固醇連接物(AA?PEG?hyd?CHOL)；(2)共同包封阿霉素(DOX)和白藜蘆醇(RES)的脂質混合PLGA納米粒的制備：稱量一定量的PLGA和AA?PEG?hyd?CHOL溶于二氯甲烷中，以少量乙醇溶解白藜蘆醇，并將一定量的鹽酸阿霉素溶于蒸餾水中，將上述三種溶液混合并進行超聲乳化，將0.3％的聚乙烯醇(PVA)加入超聲后的液體中，并再次進行超聲以固定初步形成的納米載體；轉移液體至敞口燒杯中，室溫下磁力攪拌4小時，而后進行低溫超速離心，棄上清液，以蒸餾水沖洗得到的沉淀并重新分散所得固體，即為目標納米粒。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：周四元，趙原，宋彥峰，成穎，劉苗，崔晗，劉道州，宦夢蕾，張邦樂，
申請(專利權)人：中國人民解放軍第四軍醫大學，
類型：發明
國別省市：陜西;61
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