一種鐵皮石斛的快速繁殖方法技術

本發明專利技術公開了一種鐵皮石斛的快速繁殖方法，它包括種子蒴果的表面滅菌，無菌種子播撒于萌發培養基，種子萌發的幼苗接種于原球莖分化培養基，分化苗轉接入壯苗生根培養基，最后得到鐵皮石斛的組培苗。與現有技術相比，本發明專利技術利用鐵皮石斛未開裂的蒴果，可以有效的避免其內生菌對組織培養帶來的一些干擾，降低污染率；利用種子萌發、繼代培養和壯苗生根三代培養法，大大縮短了育苗周期，降低了生產成本，且所培養的組培苗植株健壯，根系發達，成活率高。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于植物組織培養
，具體涉及。
技術介紹
鐵皮石斛又名黑節草，為蘭科石斛屬多年生的草本植物，生長于海拔高度100~ 3000米的山地，喜溫暖潮濕、半陰半陽的環境，不耐寒冷。主要分布于安徽、浙江、云南、福建 等地。鐵皮石斛以其新鮮或干燥莖入藥，味甘、性微寒，主要藥效成分為石斛多糖、生物堿和 氨基酸等，具生津、降血糖和增強機體免疫力等功效，被歷版《中國藥典》所收錄。鐵皮石斛 種子細小如塵埃，不具胚乳，在自然條件下極難萌發，加上人為的過度采挖，其資源已瀕臨 滅絕。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是提供，以解決現有技術 存在的繁殖技術效率低下的問題。 為解決上述技術問題，本專利技術提供的技術方案如下： -種鐵皮石斛的快速繁殖方法，它包括如下步驟： (1)將鐵皮石斛蒴果消毒滅菌后剖開，取出鐵皮石斛蒴果種子； (2)將步驟（1)中得到的鐵皮石斛種子均勻播撒于種子萌發培養基上，20~25°C 下暗培養6~8天后，正常培養60~75天，鐵皮石斛種子萌發成鐵皮石斛幼苗； (3)將步驟（2)中得到的鐵皮石斛幼苗接種到原球莖分化培養基中培養80~ 100,得到鐵皮石斛分化苗； (4)將步驟（3)中得到的鐵皮石斛分化苗轉接到壯苗生根培養基上培養后90~ 100,得到鐵皮石斛組培苗。 步驟（1)中，所述的鐵皮石斛蒴果為15~20周的成熟未開裂蒴果。 步驟（1)中，消毒滅菌的方法為：將鐵皮石斛蒴果用水沖洗并自然風干后，在超凈 工作臺內于70~75%體積分數的乙醇水溶液中浸泡45s，取出后用無菌水沖洗2~3次；再 將蒴果放入0. 1 %質量分數的氯化汞水溶液中浸泡lOmin，取出后用無菌水沖洗4~6次； 最后用滅菌后的濾紙吸干蒴果表面的水分，用滅菌后的解剖刀從中部取出種子。 步驟⑵中，所述的種子萌發培養基的配方為：MS+0. 2-0. 5mg/L萘乙酸 +0? 5-1. 0mg/L6-芐氨基腺嘌呤+50-100g/L土豆+25g/L蔗糖+6. Og/L瓊脂粉，pH5. 8 ~6. 0。 步驟⑵中，所述的正常培養的條件為溫度20~25°C，光照強度為2000~ 2500Lux，光照時間為10~12h/d。 步驟⑶中，所述的原球莖分化培養基的配方為：N6大量元素+MS微量元素+MS有 機物 +0-1. 〇mg/L 萘乙酸 +50-100g/L 香蕉 +25g/L 鹿糖 +6. Og/L 瓊脂粉，pH5. 8 ~6. 0。步驟（3)中，培養條件為溫度20~25°C，光照強度為2000~2500Lux，光照時間 為 10 ~12h/d〇 步驟⑷中，所述的壯苗生根培養基的配方為：N6大量元素+MS微量元素+MS有 機物+0~1. 〇mg/L萘乙酸+50~100g/L香蕉+0. 5~2. Og/L活性炭+25g/L鹿糖+6. 0g/ L瓊脂粉，pH5.8~6.0。 步驟（4)中，培養條件為溫度為20~25°C，光照強度為2000~2200Lux，光照時 間為10~12h/d。 其中，所述的MS培養基的配方為： 大量元素：硝酸銨1650mg/L、硝酸鉀1900mg/L、二水合氯化鈣440mg/L、七水合硫 酸鎂370mg/L和磷酸二氫鉀170mg/L ; 微量元素：四水合硫酸錳22. 3mg/L、七水合硫酸鋅8. 6mg/L、六水合氯化鈷 0? 025mg/L、五水合硫酸銅0? 025mg/L、碘化鉀0? 83mg/L、硼酸6. 2mg/L、七水合硫酸亞鐵 27. 8mg/L和乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L ; 有機物：煙酸〇? 5mg/L、鹽酸吡咳醇0? 5mg/L、鹽酸硫胺素0? lmg/L、甘氨酸2mg/L 和肌醇l〇〇mg/L。 其中，所述的N6大量元素配方為：硝酸鉀2830mg/L、硫酸銨463mg/L、二水合氯化 ?丐166mg/L、七水合硫酸鎂185mg/L和磷酸二氫鉀400mg/L。 與現有技術相比，本專利技術具有如下優勢： 利用鐵皮石斛未開裂的蒴果，可以有效的避免其內生菌對組織培養帶來的一些干 擾，降低污染率；利用種子萌發、繼代培養和壯苗生根三代培養法，大大縮短了育苗周期，降 低了生產成本，且所培養的組培苗苗植株健壯，根系發達，成活率高。【具體實施方式】 根據下述實施例，可以更好地理解本專利技術。然而，本領域的技術人員容易理解，實 施例所描述的內容僅用于說明本專利技術，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本 專利技術。 下述實施例中提到的MS培養基配方為： 大量元素：硝酸銨1650mg/L、硝酸鉀1900mg/L、二水合氯化鈣440mg/L、七水合硫 酸鎂370mg/L、磷酸二氫鉀170mg/L ; 微量元素：四水合硫酸錳22. 3mg/L、七水合硫酸鋅8. 6mg/L、六水合氯化鈷 0? 025mg/L、五水合硫酸銅0? 025mg/L、碘化鉀0? 83mg/L、硼酸6. 2mg/L、七水合硫酸亞鐵 27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉 37. 3mg/L ; 有機物：煙酸〇? 5mg/L、鹽酸吡咳醇0? 5mg/L、鹽酸硫胺素0? lmg/L、甘氨酸2mg/L、 肌醇 l〇〇mg/L。 下述實施例中提到的N6大量元素配方為：硝酸鉀2830mg/L、硫酸銨463mg/L、二水 合氯化媽166mg/L、七水合硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀400mg/L。 實施例1 -種鐵皮石斛的快速繁殖方法，具體步驟如下： 1、將野外采集的20周未開裂成熟蒴果在自來水下沖洗干凈，自然風干后，在超凈 工作臺內用75%體積分數的乙醇水溶液浸泡45s，取出后用滅菌后的蒸餾水沖洗3次；再將 蒴果在0. 1%質量分數的氯化汞水溶液中浸泡滅菌10min，取出后用滅菌蒸餾水沖洗6次， 并不時攪動；最后用用滅菌后的濾紙吸干蒴果表面的水分，用滅菌后的解剖刀從蒴果中部 取出種子。 2、將取出的鐵皮石斛種子均勻播撒于種子萌發培養基上，培養基配方為： MS+0. 5mg/LNAA+l. 0mg/L6-BA+50g/L 土豆 +25g/L 蔗糖 +6. Og/L 瓊脂粉，pH5. 8。在 22°C下， 暗培養7天，7天后改變培養條件，在溫度22°C，光照強度為2000LUX，光照時間為12h/d的 條件下培養60天。經過該階段培養后，鐵皮石斛種子萌發成幼苗。 3、將鐵皮石斛幼苗接種到原球莖分化培養基中，25 °C，光照強度2500LUX，光照 時間為12h/d下培養90天；在該培養基的配方為：N6大量元素+MS微量元素+MS有機物 +0. 5mg/LNAA+50g/L香蕉+25g/L蔗糖+6. Og/L瓊脂粉，pH5. 8。經過該階段培養后，鐵皮石 斛幼苗生長為分化苗。 4、將鐵皮石斛分化苗轉接到壯苗生根培養基上，25°C，光照強度2200Lux，光照時 間12h/d的條件下培養95天。該培養基配方為：N6大量元素+MS微量元素+MS有機物 +1. 0mg/LNAA+75g/L 香蕉 +2. Og/L 活性炭 +25g/L 鹿糖 +6. Og/L 瓊脂粉，pH5. 8。經過該階 段培養后，鐵皮石斛分化苗生長為組培苗。 5、經過上述培養階段共計245天，即可得根系健壯、株高蘭8cm，平均直徑蘭0? 3cm 以上的優質組培苗，經過上本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種鐵皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，它包括如下步驟：(1)將鐵皮石斛蒴果消毒滅菌后剖開，取出鐵皮石斛蒴果種子；(2)將步驟(1)中得到的鐵皮石斛種子均勻播撒于種子萌發培養基上，20～25℃下暗培養6～8天后，正常培養60～75天，鐵皮石斛種子萌發成鐵皮石斛幼苗；(3)將步驟(2)中得到的鐵皮石斛幼苗接種到原球莖分化培養基中培養80～100天，得到鐵皮石斛分化苗；(4)將步驟(3)中得到的鐵皮石斛分化苗轉接到壯苗生根培養基上培養后90～100，得到鐵皮石斛組培苗。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：席剛俊，徐超，史俊，汪善鋒，楊鶴同，鄭凱，賈君，趙桂華，
申請(專利權)人：江蘇農林職業技術學院，
類型：發明
國別省市：江蘇;32