一種用于肝纖維化和肝硬化檢測的試劑盒制造技術

本發明專利技術公開了一種用于檢測由乙肝病毒感染引起的肝纖維化或肝硬化的試劑盒，其通過檢測個體樣本中CHI3L1的水平來確定個體是否有肝纖維化或肝硬化狀況，該試劑盒包含：(1)能夠結合CHI3L1的抗體；(2)當CHI3L1結合于(1)中限定的抗體時，能夠結合于CHI3L1的標記抗體；以及(3)由含有已知量CHI3L1的溶液組成的標準樣，其中CHI3L1來源于由乙肝病毒感染引起的肝纖維化或肝硬化患者的血清。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物醫學
具體地說，本專利技術涉及一種用于肝纖維化和/或肝硬化檢測的試劑盒，尤其涉及一種用于檢測樣本中CHI3L1水平的試劑盒。
技術介紹
肝硬化(Cirrhosis)是指肝纖維化中晚期。它的形態學定義為彌漫性肝臟纖維化伴有異常結節形成。僅有彌漫性肝纖維化而無結節形成(如先天性肝纖維化)，或僅有結節形成而無纖維化(如結節性再生性增生)均不能稱為肝硬化。從臨床的角度來看，肝硬化是指上述肝臟組織病理學改變所導致的肝功能衰竭(血清白蛋白降低、膽鹼酯酶活力降低、膽紅素升高、凝血酶原時間延長等)和門脈高壓癥(食管胃底靜脈曲張及其破裂出血、腹水、自發性細菌性腹膜炎及肝腎綜合征、肝性腦病等)等表現。從病理學上來看，慢性炎癥壞死首先導致肝臟纖維結締組織增生和沉積(纖維化)，繼而導致肝小葉結構的破環和假小葉形成，最終發展為肝硬化。肝硬化的臨床診斷方法包括相關的影像學診斷、病理學診斷或/和治療和隨訪等。選擇的血清樣本來源于臨床確診的肝硬化病人等。肝硬化的診斷方法主要有以下3類：1)組織病理學檢查：肝活檢組織病理學檢查至今仍被認為是診斷肝纖維化和肝硬化的“金標準(Goldstandard)”。1994年國際慢性肝炎新的分級、分期標準建議將肝臟纖維化作為病情分期的依據，與分級(主要是炎癥、壞死的程度)分別評分。目前國際上常用的肝組織評分方法包括Knodell、Scheuer、Ishak、Metavir、Chevallier等系統。我國1995和2000年病毒性肝炎防治方案也采用了相應的分級、分期標準，王泰齡教授也發表了改進的肝纖維化的半定量積分系統。利用常規HE染色和各種細胞外基質的組織化學、免疫組織化學甚至分子原位雜交技術可從肝組織標本獲得許多有關纖維化方面的信息；計算機圖像分析等各種技術更能提供定量的資料以便于觀察抗纖維化治療的效果。目前在B超引導下采用自動肝穿槍進行肝活檢的可靠性及安全性很高，病人的痛苦也很小。但肝活檢也有局限性，例如：病變不均一有可能造成取樣誤差，難以在同一病人反復多次進行，因而不便于觀察肝纖維化的動態變化或治療效果，因此一般很少在臨床診斷實際采用。2)肝纖維化的血清學診斷：鑒于肝臟穿刺組織病理檢查的局限性，人們經過動物實驗和臨床－病理對照研究發現了不少對判斷肝纖維增生有一定價值的血清指標。國內應用較多的有血清III型前膠原氨基端肽(PIIINP)、IV膠原(CIV)、層連蛋白P1(Lam)、透明質酸(HA)。總的來說，在動物實驗中，這些指標和肝臟中相應的細胞外基質成分有良好的相關性；在臨床研究中，這些指標和肝組織病理學纖維化程度也有較好的相關性，由慢性肝炎、肝纖維化到肝硬化逐步升高，并能除外肝外疾病及肝臟炎癥活動的影響，對診斷肝纖維化有一定幫助。但是各組之間有較多的重疊，僅憑一次結果難以做出肯定的診斷，而且目前國內此類試劑盒急需標準化并提高其穩定性。聯合應用多項指標綜合判斷，并進行動態測定可能更有助于判斷肝臟纖維增生變化趨勢和治療效果。3)影像學診斷：各種常用的影像學手段如B型超聲、CT、磁共振成像(MRI)等可以發現肝包膜增厚，肝表面輪廓不規則，肝實質的回聲不均勻增強或CT值增高或呈結節狀，各葉比例改變，脾臟厚度增加及門靜脈和脾靜脈直徑增寬等肝硬化和門脈高壓的征象。彩色多普勒超聲檢查或放射性核素掃描可以測定肝臟動脈和門脈的血流量及功能性門體分流情況。但是以上這些檢測都有低靈敏度和特異性的缺陷，造成診斷中出現很高的假陽性和假陰性。因此，人們迫切需要科技工作者開發出檢測更方便、靈敏度和特異性更高、而且準確率高的肝硬化診斷手段。導致肝硬化最常見的病因是乙肝(HBV)或丙肝病毒(HCV)感染，世界人口總數的約1/3(20億)曾感染過或者正在感染乙肝病毒(參見http://www.hepb.org/hepb/statistics.htm)，其中有4億人為終身慢性感染者。而我國的HBV感染率已經高達10％。因此，由HBV和HCV感染導致的肝硬化在我國的發病逐年增加。據不完全統計，我國慢性乙型肝炎病人約為2000萬人，其中近25～30萬慢性乙肝病人可發展為肝硬化，其中5～20萬可能發展為肝癌。而我國每年死于肝硬化的人數高達20萬。因此，如果能夠發現易感人群并進行早期診斷和干預，則會大大降低肝硬化乃至肝癌的發病率，降低患者死亡率，減少醫療費用并提高患者的生活質量；同時，肝硬化易感人群的發現對于了解其發病機理并尋找干預手段也有重要的科學意義和臨床應用價值，這將對人類最終攻克這一頑疾有重要意義。眾所周知，乙肝病毒感染后有著“肝炎-肝硬化-肝癌”三部曲表現，其中肝硬化是基于病毒侵犯肝臟后導致肝細胞長期慢性炎癥、肝細胞死亡，并由肝臟纖維組織增生發展而來。專利技術人在肝硬化基因差異表達以及相關的生物標志物研究中，意外地發現在中國人群中由乙肝引起的肝纖維化和肝硬化會發生CHI3L1蛋白的高表達，這提示CHI3L1具有用作肝纖維化和肝硬化的生物標志物的可能性。CHI3L1是人類軟骨糖蛋白39(HcGP-39)(或稱為類幾丁質酶蛋白，chitinase3-like1)的簡寫，又簡寫為YKL-40。人們經研究發現，血清中CHI3L1的水平與許多疾病狀況比如在骨關節炎、原發性大腸癌、乳腺癌、復發的卵巢癌有關，因而可用于一些疾病的診斷、預后評估、治療效果監測及病情發展監測。例如，可用于卵巢癌的診斷和預后(參見：程明剛，等。血清CHI3L1在卵巢癌患者診斷和預后中的應用。《廣東醫學》2008年29卷2期第255-256頁)。耶魯大學醫學院研究人員在2007年11月15日出版的《新英格蘭醫學期刊》(TheNewEnglandJournalofMedicine)上發表文章稱，臨床試驗結果表明該分子可能在決定嚴重哮喘病生理反應時發揮重要作用，與常人相比，哮喘病患者的CHI3L1循環血清會更多，同時也與哮喘的嚴重程度有關。(參見生物通網址：http://www.ebiotrade.com/newsf/2007-11/20071116165039.htm)。美國圣迭戈加州大學Johansen等稱，CHI3L1是獨立于癌胚抗原(CEA)和乳酸脫氫酶的生物標志物，普通人群血清CHI3L1水平高者，其胃腸道腫瘤患病風險增加2.7倍，且診斷為胃腸道腫瘤后預后欠佳(參見中國醫學論壇報網絡版。網址：http://www.cmt.com.cn/article/080221/a080221b0301.htm)。血清CHI3L1水平在酒精性肝硬本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于檢測由乙肝病毒感染引起的肝纖維化或肝硬化的試劑盒，其通過檢測個體樣本中CHI3L1的水平來確定個體是否有肝纖維化或肝硬化狀況，該試劑盒包含：(1)能夠結合CHI3L1的抗體；(2)當CHI3L1結合于(1)中限定的抗體時，能夠結合于CHI3L1的標記抗體；以及(3)由含有已知量CHI3L1的溶液組成的標準樣，其中CHI3L1來源于由乙肝病毒感染引起的肝硬化患者的血清。

【技術特征摘要】
1.一種用于檢測由乙肝病毒感染引起的肝纖維化或肝硬化的試劑盒，其通過檢測個體
樣本中CHI3L1的水平來確定個體是否有肝纖維化或肝硬化狀況，該試劑盒包含：
(1)能夠結合CHI3L1的抗體；
(2)當CHI3L1結合于(1)中限定的抗體時，能夠結合于CHI3L1的標記抗體；以
及
(3)由含有已知量CHI3L1的溶液組成的標準樣，其中CHI3L1來源于由乙肝病毒感
染引起的肝硬化患者的血清。
2.一種用于檢測由乙肝病毒感染引起的肝纖維化或肝硬化的試劑盒，其通過檢測個體
樣本中CHI3L1和HBV蛋白的水平來確定個體是否有肝纖維化或肝硬化狀況，其包含：
(1’)能夠結合CHI3L1的抗體；
(2’)當CHI3L1結合于(1’)中限定的抗體時，能夠結合于CHI3L1的標記抗體；
(3’)能夠結合HBV蛋白的抗體；
(4’)當HBV蛋白結合于(3’)中限定的抗體時，能夠結合于HBV蛋白的標記抗體；
以及
(5’)由含有已知量CHI3L1的溶液組成的標準樣，其中CHI3L1來源于由乙肝病毒
感染引起的肝纖維化或肝硬化患者的血清；以及由含有已知量HBV蛋白的溶液組成的標
準樣，其中HBV蛋白來源于由乙肝病毒感染引起的肝纖維化或肝硬化患者的血清。
3.如權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述樣本是全血、血漿、血清、尿
液、腦脊液、唾液、精液、或眼淚。
4.如權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，還包含引發劑溶液，如果...

【專利技術屬性】
技術研發人員：林標揚，
申請(專利權)人：杭州普望生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：浙江;33