藥物組合物及其制備方法和用途技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了用于皮膚愈合和毛囊再生的藥物組合物及其制備方法和用途，其中，該藥物組合物包括：自組裝多肽水凝膠，所述自組裝多肽水凝膠是由RADA16-I和PRG的至少一種形成的；以及皮膚細胞，所述皮膚細胞設(shè)置于所述自組裝多肽水凝膠內(nèi)部。發(fā)明專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明專利技術(shù)的該藥物組合物，能夠有效促進皮膚愈合和毛囊再生。另外，本發(fā)明專利技術(shù)的藥物組合物中的自組裝多肽水凝膠全人工合成，不傳播動物源性疾病，具有良好的組織特異性，有利于組織特異性干細胞分化微環(huán)境的構(gòu)建，且材料來源更加穩(wěn)定，質(zhì)量標準易于控制。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及再生醫(yī)學(xué)、生物材料學(xué)及干細胞生物學(xué)領(lǐng)域，具體地涉及藥物組合物及其制備方法和用途。
技術(shù)介紹
皮膚作為人體最大的組織，是與外界環(huán)境接觸的屏障，當由于外界損傷或疾病等因素造成皮膚缺損時，常常造成創(chuàng)面水分、電解質(zhì)及蛋白質(zhì)的丟失，開放的創(chuàng)面還增加了感染的概率。早期、有效地封閉創(chuàng)面可以減少上述并發(fā)癥的發(fā)生，臨床上常用的是凡士林紗布和斷層/全厚皮片，其中自體斷層皮片移植是公認的標準療法。但是在大面積皮膚缺損患者，仍存在著供區(qū)不足及造成機體新的損傷等缺陷。自組裝多肽水凝膠材料是近十年剛剛興起的研究領(lǐng)域，初步應(yīng)用結(jié)果已顯露出了其在組織工程和組織再生修復(fù)方面的巨大潛力。合成的具有仿生功能的自組裝多肽RADA16-1 (Ac-RADARADARADARADA-C0NH2)是該類多肽的代表，該短肽由16個疏水和親水氨基酸交替排列組成，形成穩(wěn)定的β折疊，在適當PH的水溶液內(nèi)自組裝形成排列有序的納米纖維。其水溶液吸水量高達99.5%以上，納米纖維交叉形成具網(wǎng)狀骨架的類似于細胞外基質(zhì)的立體水凝膠結(jié)構(gòu)，對細胞起支持作用。該材料具有良好的細胞和組織相容性，無毒，植入體內(nèi)后可逐步被吸收，是理想的組織工程材料。目前，將自組裝多肽水凝膠用于皮膚的傷口愈合和毛囊再生尚未有報導(dǎo)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。為此，本專利技術(shù)的一個目的在于提出一種能夠有效用于皮膚愈合和毛囊再生的手段。在本專利技術(shù)的一個方面，本專利技術(shù)提供一種用于皮膚愈合和毛囊再生的藥物組合物。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，該藥物組合物包括:自組裝多肽水凝膠，所述自組裝多肽水凝膠是由RADA16-1和PRG(Ac-(RADA)4GPRGDSGYRGDS-C0NH2)的至少一種形成的；以及皮膚細胞，所述皮膚細胞設(shè)置于所述自組裝多肽水凝膠內(nèi)部。專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)，利用本專利技術(shù)的該藥物組合物，能夠有效促進皮膚愈合和毛囊再生。另外，本專利技術(shù)的藥物組合物中的自組裝多肽水凝膠全人工合成，不傳播動物源性疾病，可根據(jù)不同組織的特點和用途靈活添加不同分子的功能片段，使之更具有組織特異性，有利于組織特異性干細胞分化微環(huán)境的構(gòu)建，且材料來源更加穩(wěn)定，質(zhì)量標準易于控制。根據(jù)本專利技術(shù)實施例的藥物組合物，還可以具有下列附加技術(shù)特征:根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，當所述水凝膠由RADA16-1和PRG共同形成時，在所述自組裝多肽水凝膠中，所述RADA16-1和所述PRG的質(zhì)量比為1:1。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，在所述自組裝多肽水凝膠中，所述皮膚細胞的含量為14-1O8 個 /mL。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述皮膚細胞為選自真皮細胞和表皮細胞的至少一種。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述真皮細胞為新分離的真皮細胞或培養(yǎng)0-30代的真皮干細胞。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述表皮細胞為新分離的表皮細胞或培養(yǎng)0-30代的表皮干細胞。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述藥物組合物進一步包括:有利于細胞存活、生長的細胞活性因子和/或細胞外基質(zhì)分子。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述細胞活性因子為選自bFGF(堿性成纖維細胞生長因子)、EGF (表皮細胞生長因子)的至少一種，所述細胞外基質(zhì)分子為選自透明質(zhì)酸、纖維粘連蛋白的至少一種。由此，能夠有效促進皮膚細胞的存活和生長，進而促進皮膚愈合和毛囊再生的效果較好。在本專利技術(shù)的另一方面，本專利技術(shù)提供了一種制備前面所述的藥物組合物的方法。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，該方法包括:(I)提供RADA16-1溶液和PRG溶液，其中，所述RADA16-1溶液的濃度為0.l-lg/100ml，所述PRG溶液的濃度為0.l-lg/100ml ； (2)將所述RADA16-1溶液和所述PRG溶液等體積混合，以便獲得混合水凝膠溶液；(3)在所述RADA16-1溶液、所述PRG溶液或所述混合水凝膠溶液中接種皮膚細胞，并在適于所述皮膚細胞生長的條件下進行孵育，以便獲得所述藥物組合物。專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)，利用本專利技術(shù)的該方法能夠快速有效地制備前面所述的藥物組合物，且操作簡單、方便快捷、容易控制、易于實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，在步驟(2)之前，預(yù)先將所述RADA16-1溶液和所述PRG溶液進行0.22 μ m過濾除菌處理。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述接種細胞進一步包括:用10%無菌蔗糖溶液將所述皮膚細胞配成濃度為14-1O8個/mL的細胞懸液，將所述混合水凝膠溶液和所述細胞懸液按照體積比為5:1的比例混合。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述孵育進一步包括:每隔30分鐘，移除孔板中的培養(yǎng)基，補加等體積新鮮培養(yǎng)基到孔板中，重復(fù)3-5次。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述培養(yǎng)基中包含有利于細胞存活、生長的細胞活性因子和/或細胞外基質(zhì)分子，根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述細胞活性因子為選自bFGF、EGF的至少一種，所述細胞外基質(zhì)分子為選自透明質(zhì)酸、纖維粘連蛋白的至少一種。由此，能夠有效促進皮膚細胞的存活和生長，進而促進皮膚愈合和毛囊再生的效果較好。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述RADA16-1溶液的濃度為lg/100mL。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述PRG溶液的濃度為lg/100mL。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述皮膚細胞為選自表皮細胞和真皮細胞的至少一種。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述真皮細胞為新分離的真皮細胞或培養(yǎng)0-30代的真皮干細胞。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，所述表皮細胞為新分離的表皮細胞或培養(yǎng)0-30代的表皮干細胞。在本專利技術(shù)的又一方面，本專利技術(shù)提供了前面所述的藥物組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于皮膚愈合和毛囊再生。在本專利技術(shù)的再一方面，本專利技術(shù)提供了一種用于皮膚愈合和毛囊再生的藥物。根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，該藥物包含前面所述的藥物組合物。專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)，本專利技術(shù)的藥物能夠有效用于皮膚愈合和毛囊再生?！靖綀D說明】圖1顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，本專利技術(shù)的藥物組合物的外觀形態(tài)圖；圖2顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，培養(yǎng)I天時，藥物組合物中真皮干細胞的共聚焦顯微鏡照片；圖3顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，培養(yǎng)3天時，藥物組合物中真皮干細胞的共聚焦顯微鏡照片；圖4顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，藥物組合物中真皮干細胞的Α0/ΡΙ雙染色圖；圖5顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，藥物組合物中真皮干細胞的堿性磷酸酯酶(AP)染色圖；圖6顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，移植藥物組合物3周后，裸鼠皮膚愈合和毛囊再生情況結(jié)果圖；圖7顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，培養(yǎng)I天后，MSC在由不同濃度的混合水凝膠溶液形成的水凝膠中的倒置顯微鏡照片，其中，圖7A為MSC在由多肽濃度為0.1g/1OOmL的混合水凝膠溶液形成的水凝膠中的倒置顯微鏡照片，圖7B為MSC在由多肽濃度為0.5g/100mL的混合水凝膠溶液形成的水凝膠中的倒置顯微鏡照片，圖7C為MSC在由多肽濃度為lg/100mL的混合水凝膠溶液形成的水凝膠中的倒置顯微鏡照片；圖8顯示了根據(jù)本專利技術(shù)的實施例，培養(yǎng)3天后，真皮干細胞在RADA16-1自組裝多肽水凝膠中的生長情況?！揪唧w實施方式】下面詳細描述本專利技術(shù)的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本專利技術(shù)，而不能理解為對本專利技術(shù)的限制。實施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以當前第1頁1 2 3 4 本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種用于皮膚愈合和毛囊再生的藥物組合物，其特征在于，包括：自組裝多肽水凝膠，所述自組裝多肽水凝膠是由RADA16?I和PRG的至少一種形成的；以及皮膚細胞，所述皮膚細胞設(shè)置于所述自組裝多肽水凝膠內(nèi)部。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：吳耀炯，王瀟瀟，郭玲，
申請(專利權(quán))人：清華大學(xué)深圳研究生院，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44