用于促進傷口愈合的短生物活性肽制造技術

本發明專利技術公開具有生物活性的具有4至6個氨基酸殘基的肽。這些肽構成本身為抗微生物蛋白天蠶殺菌素(cecropin)?B的片段的肽HB-107?(MPKEKVFLKIEKMGRNIRN)的短片段，且展現細胞刺激和遷移性質。本發明專利技術肽包括位于HB107?(MPKEKVFLKIEKMGRNIRN)的位置11與16之間的4至6個連續氨基酸殘基(即EKMGRN)。該公開的肽包括用于醫學治療諸如來自糖尿病潰瘍等皮膚創傷的可用的劑。所述肽也有效地預防并逆轉源自各種環境傷害的皮膚表面損傷。重要的是，所述肽的治療效應在等于或大于肽HB-107的那些的濃度下呈現，且因此代表用于研發有效療法的較廉價、更通用的方式。也公開產生及使用這些肽的方法。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】用于促進傷口愈合的短生物活性肽本申請案涉及于2013年2月14日提交的美國臨時申請案第61/764,913號的優先權，該申請案的全文以引用方式并入本文中。【專利技術背景】本專利技術涉及具有生物、化妝品及治療活性的肽。具體而言，本專利技術涉及刺激角質形成細胞細胞增殖及遷移的SEQIDNO:1(EKMGRN)的4至6個連續氨基酸殘基的短肽。本專利技術進一步涉及使用所述肽來促進傷口修復和治療侵襲皮膚及其它相關體表(例如口腔)的多種損傷的方法。【專利技術背景】皮膚是身體的最大器官且是環境與內部生物之間的界面。它是由兩個主要層構成：表皮，其為皮膚的最外層；和真皮，其正好在表皮下面。角質形成細胞是構成95%表皮的主要細胞。上基部角質形成細胞分化成由蛋白質和脂質(包含神經酰胺、膽固醇及脂肪酸)圍繞的在化學及物理上有抗性的角質層。自然或強制移除此角化上皮的頂層會刺激下面的細胞轉換來替代受損或損失的細胞。此角化層在身體與環境之間提供保護及水障壁功能。角質形成細胞的主要功能是形成障壁來保護身體免于化學、物理及機械危害、微生物的侵襲、熱、UV輻射及失水(Proksch等人，2008)。角質形成細胞也是與表皮連續的粘膜組織的主要成份(Presland及Dale，2000)。傷口定義為皮膚的上皮完整性的破壞。正常傷口愈合涉及復雜且動態但良好協調的一系列事件，包含發炎、新組織形成及組織重塑。傷口愈合開始于組織受損的時刻且需要上皮形成與真皮修復的精確配合，其中上皮形成過程最終取決于角質形成細胞的遷移、增殖及分化能力(Singer及Clark，1999)。在上皮形成期間，位于傷口外圍的角質形成細胞遷移且增殖以在傷口上方形成單層。角質形成細胞的進一步增殖及分化建立包括正常復層的表皮層。具有正常真皮成纖維細胞的角質形成細胞也使得I型及III型膠原的mRNA上調、成纖維細胞增殖增加及細胞外基質累積并重塑，以通過恢復組織的結構及功能來完成愈合(BergersG和CoussensLM，2000)。因此，角質形成細胞增殖和遷移的能力對于在皮膚表面上實施所述過程至關重要。鑒于已知某些生長因子在傷口愈合期間天然地參與，已有工作致力于研發用于治療傷口的基于生長因子的方法(Mustoe等人，1994；Steed，1995)。然而，大多數采用該策略的嘗試無法達成臨床上顯著的結果，這部分歸因于與使用諸如所涉及的大尺寸的蛋白質等治療性蛋白質相關聯的困難。使用生長因子的療法也受損于制備較大蛋白質相關的復雜性及高成本。宿主防御肽(HDP)(也稱為抗微生物肽)已被暗示為皮膚傷口愈合的調控劑。由于他們的尺寸較小，這些短活性肽已吸引治療劑研發的注意(Zhang和Falla，2006)。HDP在自然界中普遍存在且形成真核生物的固有免疫系統的中心組分。它們作為病原體清除以及宿主細胞行為調節的效應子來促進組織再生和修復而言對于固有宿主防御至關重要。正常傷口修復涉及發炎、上皮形成、組織-肉芽及重塑的精確協調。已顯示宿主防御肽影響所有這些行為。抗菌肽PR-39具有通過抑制嗜中性粒細胞氧化酶活性的抗發炎功能，且誘導傷口修復中重要的多配體蛋白聚糖，硫酸肝素蛋白聚糖(Gallo等人，1994；ShiJ.,Ross,CR.等人，1996)。也顯示，抗菌肽家族宿主防御肽的另一成員LL-37影響器官培養物中人類皮膚傷口的上皮再形成(HeilbornJD等人，2003)。人類嗜中性粒細胞防御素促進I型膠原的表達，同時抑制間質膠原酶的表達(OonoT.等人，2002)。此外，極其不同的人類抗菌肽LL-37與人類β-防御素-3促進包含刺激上皮細胞遷移、促進血管生成及阻抑促發炎反應的活性(Steinstraesser等人，2008,2009)。其吸引嗜中性粒細胞、單核細胞、肥大細胞及T淋巴細胞，且也在許多細胞類型中誘導產生嗜中性粒細胞及單核細胞趨化因子。HDP最近也已被暗示為通過調節發炎、血管生成以及細胞外組織沉積及重塑的皮膚傷口修復的調控劑。已顯示HDP對傷口修復的影響并不取決于抗微生物功能，且提供了用于HDP的潛在的新穎臨床應用。我們先前已報導，在鼠類模型中衍生自天蠶殺菌素B的非抗微生物宿主防御肽HB107(MPKEKVFLKIEKMGRNIRN)保留了幫助傷口修復的能力，且利用HB107所觀察到的益處與用生長因子rhPDGF治療傷口無法區分(Lee等人，2004)。HB107治療的傷口的組織學分析表明，在HB107治療的傷口中表皮增生增多，此指示HB107可影響角質形成細胞增殖或遷移(LeePH.等人，2004)。最近已描述HDP的一組新型合成變體(稱為固有防御調控劑(IDR))，其提供針對多重抗藥性細菌的全身性感染的廣譜保護(EastonDM.等人，2009)。例如，IDR-1及IDR1002通過增強宿主的固有免疫防御同時阻抑潛在有害的過度發炎反應來賦予針對微生物挑戰的保護(Easton等人，2009；NijnikA.等人，2010)。【專利技術概述】本專利技術涉及可用于促進哺乳動物的傷口愈合的短生物活性肽。由分離的肽優選靶向的傷口是影響皮膚和相關粘膜表面的那些。盡管不受限于任何具體機制，但本專利技術肽能夠通過刺激細胞增殖及遷移來影響傷口愈合。本專利技術肽以體外及體內方式是可用的，且能夠在角質形成細胞中誘導上述的活性。本專利技術的一個實施方案涉及含有位于HB107(MPKEKVFLKIEKMGRNIRN)的位置11和16之間(即EKMGRN(SEQIDNO:1))的4至6個連續氨基酸殘基的分離肽。分離肽可含有氨基酸的L-或D-鏡像異構物形式或其組合。根據本專利技術的另一實施方案，分離肽可偶聯至載體蛋白，或用脂肪酸經C端酰胺化或N端乙酰化修飾(即脂化)。在將肽施加至其皮膚和傷口時，這些添加增強肽的生物活性。根據本專利技術的某些優選實施方案，分離肽都含有甲硫氨酸。分離肽的特定實施方案包括SEQIDNO:1、2、3、4及5，其中的所有都顯示針對細胞增殖及遷移的刺激活性且影響傷口修復。SEQIDNO.HB編號序列1HB2265EKMGRN2HB2262KMGRN3HB2263EKMGR4HB2234EKMG5HB2235MGRN本專利技術的另一實施方案涉及制造用于治療組合物或化妝品組合物的藥劑，所述組合物含有醫藥上或化妝品上可接受的載體及一或多種上述的肽。上述的組合物可用于愈合哺乳動物的皮膚傷口的藥劑或化妝品應用。所述組合物中肽的濃度優選介于約0.1μg/mL至約500μg/mL，或約0.1μg/mL至約20mg/mL范圍內。組合物的優選形式為氣溶膠、乳液、液體、溶液、洗劑、乳霜、糊劑、軟膏、粉劑、凝膠及泡沫。此外，本專利技術的肽及含有它們的組合物可提供對納入一般皮膚護理及化妝品調配物(例如，各種皮膚化妝品、皮膚乳霜、洗劑、防曬劑及治療性洗劑或乳霜(例如用于雷射程序后護理的抗痤瘡調配物))中而言有用的特征。本專利技術也涉及將上述的組合物用于愈合哺乳動物傷口的方法。通常，治療方法需要向傷口、尤其皮膚(表皮)及相關粘膜組織的那些給予有效量的含肽組合物，保持有效時間量。所述傷口包含手術傷口、擦破、起泡、燒傷、撕裂傷、潰瘍、擦傷、皮疹、瘢痕、妊娠紋以及因老化及環境暴露的內因性及外因性效應所致的皮膚損傷（包含起皺、皮膚下垂及光損傷）。【專利技術詳述】美國本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種分離肽，其中所述肽的序列是由SEQ?ID?NO:?1?(EKMGRN)的4至6個連續氨基酸殘基組成。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2013.02.14 US 61/7649131.一種分離肽，其中所述肽的序列是由SEQIDNO:4(EKMG)或SEQIDNO:5(MGRN)或SEQIDNO:2(KMGRN)組成，其中所述肽呈游離酸形式，在羧基端酰胺化或在氨基端脂化。2.如權利要求1所述的肽，其為SEQIDNO:4(EKMG)或SEQIDNO:5(MGRN)或SEQIDNO:2(KMGRN)。3.如權利要求1所述的肽，其包括L-及D-氨基酸鏡像異構物中的任一者或兩者。4.一種組合物，其包括至少一種如權利要求1至3任一項所述的肽和醫藥上可接受的載劑。5.如權利要求4所述的組合物，其中所述肽是以介于0.1μg/mL至500μg/mL范圍內的濃度存在。6.如權利要求4所述的組合物，其中所述肽是以介于0.1μg/mL至20mg/mL范圍內的濃度存在。7.如權利要求4所述的組合物，其中所述組合物呈以下形式：氣溶膠、液體、凝膠、微囊封劑、乳霜、糊劑、軟膏、粉劑或泡沫，或納入適于施加至皮膚或粘膜組織表面或在該皮膚組織下的裝置中。8.如權利要求4所述的組合物，其中所述組合物呈以下形式：乳液、洗劑或溶液。9.一種組合物，其用于當以治療有效量施加有效量的時間時愈合哺乳動物的傷口，其中所述組合物包括醫藥上可接受的載劑和至少一種如權利要求1至3中任一項所述的肽。10.如權利要求9所述的組合物，其中所述傷口影響所述哺乳動物的皮膚或相關粘膜組織。11.如權利要求10所述的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：L張，R卡邁克爾，
申請(專利權)人：赫里克斯生物醫療公司，
類型：發明
國別省市：美國;US