一種組合物和方法，其用于生成試劑以及這些試劑的組合物，這些試劑用于通過用低摩爾濃度的協(xié)同化學(xué)品以及激素生長(zhǎng)促進(jìn)劑顯著調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝來穩(wěn)定和保持已被手術(shù)切除的癌組織的活力以及暫停和/或終止凋亡(細(xì)胞死亡)，同時(shí)保持手術(shù)切除的組織的正常基因表達(dá)譜。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及生成用于已手術(shù)切除的癌組織的穩(wěn)定、保存和活力的試劑以及試劑組 合物的方法。
技術(shù)介紹
幾十年來，用來檢測(cè)來自切除組織的癌細(xì)胞的用于病理分析的手術(shù)組織收集已經(jīng) 成為癌癥診斷的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐。當(dāng)前的組織樣品收集方案要求將切除組織收集并置于福爾馬林 溶液中，并隨后將其運(yùn)送到病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行染色和分析。遺憾的是，福爾馬林固定細(xì)胞（例 如，殺死細(xì)胞）并且在這一過程中引起細(xì)胞完整性的顯著改變，從而在準(zhǔn)確地進(jìn)行基因組 檢測(cè)（RNA、mRNA和蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物分析，和基因表達(dá)研究）分析的能力方面產(chǎn)生問題。 分子技術(shù)，如采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（RT-PCR)進(jìn)行的基因組檢測(cè)，已發(fā)展到 某些癌癥可以匹配于特定的化學(xué)療法的程度，該化學(xué)療法已被證明響應(yīng)于在癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn) 的某些基因表達(dá)譜。因此，能夠獲得從患者切除的癌細(xì)胞的準(zhǔn)確基因表達(dá)譜允許通過設(shè)計(jì) 個(gè)性化的化學(xué)療法以及其他處理來進(jìn)行個(gè)性化健康照護(hù)。這是治療范例的非常重要的轉(zhuǎn) 變，并將代表在不久的將來的醫(yī)護(hù)標(biāo)準(zhǔn)。 已在福爾馬林中保存的癌組織樣品并非用于完成基因表達(dá)分析的活的組織樣品。 福爾馬林并非對(duì)組織樣品實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)分析的良好試劑的一個(gè)原因是，福爾馬林導(dǎo)致蛋白 質(zhì)緩慢交聯(lián)成網(wǎng)狀網(wǎng)絡(luò)，并且由于有價(jià)值的靶蛋白質(zhì)沒有針對(duì)降解得到保護(hù)，因此它們可 能被福爾馬林處理破壞。 此外，隨著福爾馬林滲透組織樣品，發(fā)生細(xì)胞死亡（凋亡）。癌細(xì)胞是獨(dú)特的，因?yàn)?它們具有代謝性預(yù)程序化凋亡，從而在福爾馬林中發(fā)生加速的凋亡。隨著組織樣品中的細(xì) 胞死亡，總細(xì)胞群體的子集裂解并釋放寬范圍的內(nèi)部調(diào)節(jié)酶，這些內(nèi)部調(diào)節(jié)酶進(jìn)一步導(dǎo)致 細(xì)胞死亡加速。這些酶中的許多酶將降解或破壞靶核酸〇嫩4嫩、11^嫩、調(diào)節(jié)蛋白以及在分 子基因組分析中使用的相關(guān)生物標(biāo)志物。在固定過程中，福爾馬林殺死了組織樣品中的細(xì) 胞，而基因表達(dá)可成為不穩(wěn)定的，并且關(guān)鍵基因的基因組表達(dá)可變得欠表達(dá)或過表達(dá)，從而 產(chǎn)生某些癌基因的表達(dá)的不準(zhǔn)確值。這是在基于來自選定基因的特定mRNA的水平作出化 學(xué)療法決定時(shí)的主要問題。因此，當(dāng)前不可能對(duì)在福爾馬林中固定的癌細(xì)胞獲得準(zhǔn)確的基 因組檢測(cè)。 還應(yīng)當(dāng)注意的是，用福爾馬林固定組織樣品中的蛋白質(zhì)和細(xì)胞需要約48小時(shí)才 發(fā)生。這使得福爾馬林過程不能非常準(zhǔn)確地確定在從患者收集組織時(shí)有什么樣的基因表 達(dá)。 通常，從組織固定獲得的遺傳數(shù)據(jù)的科學(xué)有用性與組織的質(zhì)量和該組織對(duì)于基因 組檢測(cè)的有用性直接相關(guān)。目前，福爾馬林固定在獲得準(zhǔn)確的基因表達(dá)信息方面并不是非 常有用的。因此，需要這樣的試劑：其用于固定組織樣品，以使得所收集的樣品包含用于遺 傳檢測(cè)的準(zhǔn)確基因表達(dá)標(biāo)志物。 還需要不像福爾馬林那樣危險(xiǎn)的組織樣品固定試劑。遺憾的是，福爾馬林給使用 者帶來顯著的癌癥風(fēng)險(xiǎn)，以及關(guān)于含福爾馬林產(chǎn)品的使用和處置的重要州及聯(lián)邦規(guī)定。 本專利技術(shù)公開了用于制備允許收集從患者中手術(shù)去除的癌組織的試劑和試劑組合 物的方法，其中組織樣品中的癌細(xì)胞的遺傳細(xì)胞信息保持在活的狀態(tài)，使得組織樣品適合 于基因表達(dá)分析。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)公開了制備用于組織樣品如活檢樣品的細(xì)胞活力試劑的新方法，該細(xì)胞活 力試劑允許樣品中細(xì)胞的基因表達(dá)分析。 在制備用于組織樣品的試劑的方法的大多數(shù)實(shí)施方案中，該方法包括：提供至少 一種離液劑（Chaotrope)，提供至少一種穩(wěn)液劑（kosmotrope)，提供螯合劑，提供緩沖液， 提供凋亡底物，提供代謝調(diào)節(jié)劑，以及將所述離液劑、穩(wěn)液劑、螯合劑、緩沖液、凋亡底物以 及代謝調(diào)節(jié)劑以能夠進(jìn)行組織樣品的基因表達(dá)分析的方式混合。 在制備用于組織樣品的試劑的方法的許多實(shí)施方案中，所述凋亡底物是癌細(xì)胞凋 亡底物并且所述組織樣品是手術(shù)切除的癌組織。 在本專利技術(shù)方法的大多數(shù)實(shí)施方案中，在用于組織樣品的試劑中，所述離液劑的最 終濃度為約0. 1摩爾（Molar)至約2摩爾，所述穩(wěn)液劑的最終濃度為約0. 1摩爾至約2 摩爾，所述螯合劑的最終濃度為約〇. 1摩爾至約2摩爾，且所述凋亡底物的最終濃度為約 0. 001摩爾至約0. 5摩爾。 在本專利技術(shù)方法的某些實(shí)施方案中，所述離液劑選自SCN(硫氰酸鈉）、H2PO4、HCO3、 1、Cl、NO3、NH4、Cs、K+、（NH4)C+胍、胍的所有鹽、Br或Rb。 在制備所述試劑的方法的一些實(shí)施方案中，所述至少一種穩(wěn)液劑選自甘油、三甲 胺N-氧化物、依克多因（Ectoine)、aa_海藻糖、3-二甲基锍丙酸鹽、葡萄糖、葡聚糖或D-乳 糖。 在其他實(shí)施方案中，所述螯合劑選自EDTA、EGTA或BABTA。 在本專利技術(shù)方法的另一實(shí)施方案中，所述緩沖液選自BIS-TRIS、BIS-TRIS丙烷、 HEPES、HEPES鈉鹽、MES、MES鈉鹽、MOPS、MOPS鈉鹽、鈉鹽或磷酸鈉緩沖液（單堿式、三堿式 PO4) 〇 在所述方法的又一實(shí)施方案中，所述凋亡底物選自DMS0、瘦素、甘氨酸甜菜堿 (Glycinebeatine)、檸檬酸鉀、三甲胺、脯氨酸、NDSB195、ML-精氨酸、木糖醇、亞硒酸鈉、 NDSB201、CuCL2SCTAB。 在一些實(shí)施方案中，所述代謝調(diào)節(jié)劑選自極性非質(zhì)子溶劑、DMS0、丙酮、N，N-二 甲基甲酰胺或乙腈。 在大多數(shù)實(shí)施方案中，制備所述試劑的方法進(jìn)一步包括將所述試劑的各種組分按 照以下的相繼順序添加至凈化水的整分試樣中：添加至少一種離液劑，接著添加所述螯合 劑，接著添加所述代謝調(diào)節(jié)劑，接著添加第一穩(wěn)液劑，接著添加所述緩沖液，接著添加不同 于第一穩(wěn)液劑的第二穩(wěn)液劑，最后接著添加所述凋亡底物。 在本專利技術(shù)的許多實(shí)施方案中，所述離液劑是SCN(硫氰酸鈉），所述第一穩(wěn)液劑是 甘油而所述第二穩(wěn)液劑是aa-海藻糖，所述螯合劑是EDTA，所述緩沖液是磷酸鈉緩沖液（單 堿式、三堿式PO4)，所述細(xì)胞凋亡底物是瘦素，且所述代謝調(diào)節(jié)劑是DMS0。 在另一實(shí)施方案中，制備用于分析組織樣品的試劑的方法包括：提供凈化水的 整分試樣；將所述試劑的組分按照以下順序添加至所述凈化水中：添加硫氰酸鈉、H)TA、 DMS0、甘油、磷酸鉀緩沖液以及aa-海藻糖，接著添加人瘦素；以及在各種組分的各次添加 之間以允許組織樣品或活檢組織的準(zhǔn)確基因表達(dá)分析的方式混合所述組分。 在一些實(shí)施方案中，制備用于分析組織樣品的試劑的方法包括：提供凈化水的整 分試樣；將所述試劑的組分按照以下順序添加至所述凈化水中：添加至少一種離液劑，接 著添加螯合劑，接著添加代謝調(diào)節(jié)劑，然后添加第一穩(wěn)液劑，然后添加緩沖液，接著添加不 同的第二穩(wěn)液劑，接著添加凋亡底物；以及在各次組分添加之間以允許組織樣品的準(zhǔn)確基 因表達(dá)分析的方式混合所述組分。 在大多數(shù)實(shí)施方案中，用于制備組織樣品的、允許基因表達(dá)分析的試劑包含：至少 一種離液劑、至少一種穩(wěn)液劑、螯合劑、緩沖液、凋亡底物以及代謝調(diào)節(jié)劑。 為分析癌組織樣品，所述凋亡底物是癌細(xì)胞凋亡底物。 對(duì)于所述試劑的大多數(shù)實(shí)施方案，所述離液劑的最終濃度為約0. 1摩爾至約2摩 爾，所述至少兩種穩(wěn)液劑中每種穩(wěn)液劑的最終濃度為約〇. 1摩爾至約2摩爾，所述螯合劑的 最終濃度為約〇. 1摩爾至約2摩爾，且所述凋亡底物的最終濃度為約0. 001摩爾至約0. 5 摩爾。 在所述試劑的具體實(shí)施方案中，所述離液劑是SCN(本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種制備用于組織樣品的試劑的方法，該方法包括：提供至少一種離液劑；提供至少一種穩(wěn)液劑；提供螯合劑；提供緩沖液；提供凋亡底物；提供代謝調(diào)節(jié)劑；以及將所述離液劑、穩(wěn)液劑、螯合劑、緩沖液、凋亡底物和代謝調(diào)節(jié)劑以特定的順序混合，以便能夠進(jìn)行置于所述試劑中的組織樣品的基因表達(dá)分析。
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：托尼·K·貝克，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：特拉基應(yīng)用基因組學(xué)有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US
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