γ?球蛋白的檢測方法技術

本發明專利技術公開了一種γ?球蛋白的檢測方法，所述檢測方法包括：將如式(I)所示結構的聚合物PPEASO3溶于水中制得溶劑；將不同濃度的γ?球蛋白標準溶液置于上述制得的溶劑中，并加水和緩沖溶液定容制成不同濃度的待測溶液，測定各待測溶液的最大熒光強度；以溶劑的熒光發射峰的熒光強度和待測溶液的熒光發射峰的熒光強度的比值為縱坐標，γ?球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立熒光吸收光譜曲線的方程；檢測待測濃度的γ?球蛋白溶液的最大熒光強度，然后根據熒光吸收光譜曲線的方程計算待測濃度的γ?球蛋白溶液中γ?球蛋白的濃度；

【技術實現步驟摘要】

本專利技術設及生物體內蛋白質的檢測方法，具體地，設及一種丫-球蛋白的檢測方 法。
技術介紹
血清球蛋白由人體單核-吞隧細胞系統合成，它經過蛋白電泳可分為a1-、a2-、 0 1-、6 2-和丫-球蛋白。而丫-球蛋白也稱為丙類球蛋白，是具有抗體活性并能與相應 抗原特異地結合的一類球蛋白，也是肝功能檢查中一項重要指標，丫-球蛋白的偏高幾乎見 于所有肝膽疾病。當患者是病毒性肝炎時，丫-球蛋白會中度增高；當患者是重型肝炎時， 丫-球蛋白可明顯升高；當患者是肝硬化時，丫-球蛋白普遍增高，尤其在晚期或進行性失 代償肝硬化，T-球蛋白可極度增高。目前常見的由免疫球蛋白異常引發的疾病有原發性 免疫缺陷病和變異性免疫缺陷癥。因此根據體內T-球蛋白的含量變化可W快速的得出肝 功能有沒障礙，盡可能的減少肝膽疾病所帶來的風險。 目前針對丫-球蛋白的測定方法已經被提出來，運其中包括考馬斯亮藍法和漠酪 藍法。在運些方法中，由于敏感度、重復度等不夠高，因此在實際應用時具有一定的局限性 和不穩定性。一般的巧光分光光度法在實際測試中由于各類蛋白質結構特性的相似性等會 不可避免的出現很多干擾，而且短波發射也會導致很多不必要的信號干擾。 因此，提供一種靈敏度高、穩定性好且具有較好的可重復性，并且操作簡單，能快 速測得丫-球蛋白的濃度的丫-球蛋白的檢測方法是本專利技術亟需解決的問題。
技術實現思路
陽〇化]針對上述現有技術，本專利技術的目的在于克服現有技術中丫-球蛋白在測定過程 中，往往會由于各類蛋白質結構特性的相似性從而不可避免的出現很多干擾，同時短波發 射也會導致很多不必要的信號干擾等問題，從而提供一種靈敏度高、穩定性好且具有較好 的可重復性，并且操作簡單，能快速測得丫-球蛋白的濃度的丫-球蛋白的檢測方法。 為了實現上述目的，本專利技術提供了一種丫 -球蛋白的檢測方法，其中，所述檢測方 法包括： (1)將如式（I)所示結構的聚合物ppeas〇3溶于水中制得溶劑； (2)將不同濃度的丫-球蛋白標準溶液置于步驟（1)制得的溶劑中，并加水和緩沖 溶液定容制成不同濃度的待測溶液，測定各待測溶液的最大巧光強度； (3)W溶劑的巧光發射峰的巧光強度和待測溶液的巧光發射峰的巧光強度的比值 為縱坐標，丫-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立巧光吸收光譜曲線的方程； (4)檢測待測濃度的丫-球蛋白溶液的最大巧光強度，然后根據巧光吸收光譜曲 線的方程計算待測濃度的丫-球蛋白溶液中丫-球蛋白的濃度； (JN 105115945 A WL 2：/b貝陽01引其中，n為正整數。 通過上述技術方案，本專利技術將聚合物ppeas〇3溶于水中制得溶劑，而后通過該溶劑 及緩沖溶液與不同濃度的T-球蛋白標準溶液混合，再定容制得待測溶液，并測定上述待 測溶液的最大巧光強度，并W溶劑的巧光發射峰的巧光強度和待測溶液的巧光發射峰的巧 光強度的比值為縱坐標，丫-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立巧光吸收光譜曲線方程，最后 測定需要檢測的T-球蛋白溶液的最大巧光強度，并根據上述巧光吸收光譜曲線方程計算 得到丫 -球蛋白的濃度，從而通過運種方式，將巧光吸收光譜曲線方程建立出來后，則僅需 要測定一次最大巧光強度，即可得到需要檢測的丫-球蛋白溶液的濃度，實現了靈敏度高、 穩定性好且具有較好的可重復性，并且操作簡單，能快速測定T-球蛋白溶液的濃度的效 果。 本專利技術的其他特征和優點將在隨后的【具體實施方式】部分予W詳細說明。【附圖說明】 附圖是用來提供對本專利技術的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具 體實施方式一起用于解釋本專利技術，但并不構成對本專利技術的限制。在附圖中：圖1是實施例中所提供的各濃度的丫-球蛋白溶液的巧光強度圖譜； 圖2是實施例中所提供的一種巧光吸收光譜曲線的方程；[001引圖3是實施例在不同溫度下制得的巧光吸收光譜曲線的方程； 圖4是實施例中PPEAS03溶液在不同濃度下的丫-球蛋白存在時的巧光衰減情況。【具體實施方式】 W下對本專利技術的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體 實施方式僅用于說明和解釋本專利技術，并不用于限制本專利技術。 本專利技術提供了一種丫-球蛋白的檢測方法，其中，所述檢測方法包括：[00巧 （1)將如式（I)所示結構的聚合物ppeas03溶于水中制得溶劑； (2)將不同濃度的丫-球蛋白標準溶液置于步驟（1)制得的溶劑中，并加水和緩沖 溶液定容制成不同濃度的待測溶液，測定各待測溶液的最大巧光強度； (3)W溶劑的巧光發射峰的巧光強度和待測溶液的巧光發射峰的巧光強度的比值 為縱坐標，丫-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立巧光吸收光譜曲線的方程； (4)檢測待測濃度的丫-球蛋白溶液的最大巧光強度，然后根據巧光吸收光譜曲 線的方程計算待測濃度的丫-球蛋白溶液中丫-球蛋白的濃度； 其中，n為正整數。 上述設計通過將聚合物PPEAS03溶于水中制得溶劑，而后通過該溶劑及緩沖溶液 與不同濃度的T-球蛋白標準溶液混合，再定容制得待測溶液，并測定上述待測溶液的最 大巧光強度，并W溶劑的巧光發射峰的巧光強度和待測溶液的巧光發射峰的巧光強度的比 值為縱坐標，T-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立巧光吸收光譜曲線方程，最后測定需要檢 測的T-球蛋白溶液的最大巧光強度，并根據上述巧光吸收光譜曲線方程計算得到T-球 蛋白的濃度，從而通過運種方式，將巧光吸收光譜曲線方程建立出來后，則僅需要測定一次 最大巧光強度，即可得到需要檢測的丫-球蛋白溶液的濃度，實現了靈敏度高、穩定性好且 具有較好的可重復性，并且操作簡單，能快速測定丫-球蛋白溶液的濃度的效果。 所述聚合物PPEAS03和所述緩沖溶液之間的比例可W不作進一步限定，但是， 為了使得到的檢測數據更為準確，進而提高檢測的精確性，同時盡可能節省成本，在本發 明的一種優選的實施方式中，相對于Img的所述聚合物PPEAS化，所述緩沖溶液的用量為 0. 01-0. 2jimol〇 所述緩沖溶液可W為本領域常規使用的緩沖溶液類型，例如，在本專利技術的一種優 選的實施方式中，為了使緩沖溶液的緩沖效果更好，所述緩沖溶液可W限定為憐酸氨二 鋼-憐酸二氨鐘或S(徑甲基）氨基甲燒一鹽酸緩沖溶液。當然，運里選擇何種緩沖溶液 主要是根據實驗中具體的抑值進行選擇的，本領域技術人員可W據此進行直接選擇，在此 不一一寶述。 當然，為了整個體系中抑值更為適宜，從而最大程度地使得測得的結果準確，在 本專利技術的一種更為優選的實施方式中，所述憐酸氨二鋼-憐酸二氨鐘和=(徑甲基）氨基 甲燒一鹽酸緩沖溶液的抑值可W進一步限定為5-9。 陽03引所述聚合物PPEAS03可W為常規使用的類型，例如，可W為純凈物，當然，為了盡可 能在操作中便于保存和使用，在本專利技術的一種優選的實施方式中，步驟（1)中所述聚合物 PPEAS03可W由聚合物PPEAS0 3溶液提供，溶液中的溶劑可W為本領域常規使用的溶劑類 型，例如，在本專利技術的一種更為優選的實施方式中，所述聚合物PPEAS化溶液的溶劑可W為 水。 陽03引聚合物PPEAS03溶液中聚合物PPEAS0 3的濃度可W不作進一步限定，當然，為了使 得其在使用時便于保存且能滿足本專利技術的使用，在本專利技術的一種優選的實施方式中，所述 聚合物PPEAS03溶液中本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種γ?球蛋白的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括：(1)將如式(I)所示結構的聚合物PPEASO3溶于水中制得溶劑；(2)將不同濃度的γ?球蛋白標準溶液置于步驟(1)制得的溶劑中，并加水和緩沖溶液定容制成不同濃度的待測溶液，測定各待測溶液的最大熒光強度；(3)以溶劑的熒光發射峰的熒光強度和待測溶液的熒光發射峰的熒光強度的比值為縱坐標，γ?球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立熒光吸收光譜曲線的方程；(4)檢測待測濃度的γ?球蛋白溶液的最大熒光強度，然后根據熒光吸收光譜曲線的方程計算待測濃度的γ?球蛋白溶液中γ?球蛋白的濃度；其中，n為正整數。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張萍，卓舒娟，朱昌青，
申請(專利權)人：安徽師范大學，
類型：發明
國別省市：安徽;34