一種用高效液相色譜法分離檢測(cè)阿普斯特及其對(duì)映異構(gòu)體的方法，該方法色譜條件采用表面涂敷直鏈淀粉-三(3，5-二甲苯基氨基甲酸酯)硅膠為填料的手性柱，流動(dòng)相為己烷-乙醇-乙腈-二乙胺(45∶45∶10∶0.1)，流速為0.8ml/min，波長(zhǎng)為230nm，柱溫為35℃。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種用高效液相色譜法分離測(cè)定阿普斯特及 其對(duì)映異構(gòu)體的方法。
技術(shù)介紹
阿普斯特是一種磷酸二酯酶抑制劑，為首個(gè)被FDA在2014年3月21日批準(zhǔn)上市、 用于治療銀肩病引起的關(guān)節(jié)炎的小分子藥物，原研公司為Celgene。化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下： 含有手性碳原子的對(duì)映異構(gòu)體分離一直是手性藥物合成和制劑過(guò)程中質(zhì)量控制 的難點(diǎn)。阿普斯特為手性藥物，為保證藥物的安全性，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中需要檢測(cè)藥物中對(duì)映異 構(gòu)體雜質(zhì)的含量。對(duì)映異構(gòu)體在常規(guī)的高效液相色譜法中無(wú)法得到分離，必須使用合適的 手性柱才能達(dá)到分離。 中國(guó)專(zhuān)利201410765717. 5公開(kāi)了一種阿普斯特有關(guān)物質(zhì)的方法，該方法使用 AD-H色譜柱，流動(dòng)相為正己烷/異丙醇/二乙胺/三氟乙酸=80/20/0. 2/0. 5,流速1.0 mL/ min，柱溫40°C，檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，但該方法的分離度低。 中國(guó)專(zhuān)利201510253092. 9公開(kāi)了一種阿普斯特及其對(duì)映異構(gòu)體的分離檢測(cè)方 法，該方法使用ChiralPak AD-H色譜柱，該類(lèi)色譜柱的填料為表面涂敷直鏈淀粉-三（3， 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠，流動(dòng)相為正己烷-無(wú)水乙醇-二乙胺=50 : 50 : 0.1， 流速1.0 ml/min，柱溫25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)240nm。但該方法靈敏度低，分離度小，主峰拖尾嚴(yán)重。 中國(guó)專(zhuān)利201510188349. 7公開(kāi)了另一種阿普斯特及其對(duì)映異構(gòu)體的分離檢測(cè)方 法，該方法使用ChiralPak AD-H色譜柱或ChiralPak AS-H色譜柱，ChiralPakAD-H色譜 柱的填料為表面涂敷直鏈淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠，AS-H色譜柱的填 料為表面涂敷直鏈淀粉-三（S)-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠，流動(dòng)相為正己烷-異丙 醇-甲醇（100 : 900 : 100)，流速l.Oml/min，柱溫35°C，檢測(cè)波長(zhǎng)230η。但該方法使用 ChiralPakAD-H色譜柱時(shí)分離效果不佳，使用AS-H色譜柱時(shí)分離效果較好，但該類(lèi)色譜柱 價(jià)格昂貴。 實(shí)現(xiàn)阿普斯特與其對(duì)映異構(gòu)體的有效分離在阿普斯特的合成和制劑的質(zhì)量控制 中具有重要的意義，為了有效控制阿普斯特的質(zhì)量，需要專(zhuān)利技術(shù)一種能將阿普斯特與其對(duì)應(yīng) 異構(gòu)體有效分離的高效液相測(cè)定方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的在于提供一種用高效液相色譜法分離測(cè)定阿普斯特及其對(duì)映異構(gòu) 體的方法，該方法能將阿普斯特與其對(duì)映異構(gòu)體有效分離，實(shí)現(xiàn)了阿普斯特的質(zhì)量控制。 本專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： -種分離阿普斯特及其對(duì)映異構(gòu)體的高效液相檢測(cè)方法，該方法采用直鏈淀粉類(lèi) 手性柱，其中所述直鏈淀粉類(lèi)手性柱為ChiralPak AD、ChiralPak AD-H、S-Chiral，優(yōu)選 ChiralPak AD-H ;以烷烴-極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，其中所述烷烴-極性有機(jī)溶劑溶液中包 含乙二胺、二乙胺、三乙胺中的一種有機(jī)堿，優(yōu)選乙二胺，所述極性有機(jī)溶劑由第一有機(jī)溶 劑和第二有機(jī)溶劑組成，所述烷烴選自正己烷、己烷，優(yōu)選己烷，所述第一有機(jī)溶劑選自甲 醇、乙醇、異丙醇，優(yōu)選乙醇，所述第二有機(jī)溶劑選自乙腈。流動(dòng)相中，所述烷烴-第一有機(jī) 溶劑-第二有機(jī)溶劑的體積比為：40~50 : 40~50 : 5~15,優(yōu)選45 : 45 : 10,所述 有機(jī)堿的濃度（V/V)為0. 05 %~0. 15 %，優(yōu)選0. 1 %。 所述色譜條件還可以進(jìn)一步優(yōu)選流動(dòng)相流速為0. 6~1.0 ml/min，優(yōu)選0. 8ml/ min ;檢測(cè)波長(zhǎng)200nm~260nm，優(yōu)選230nm ;柱溫：30°C~40°C，優(yōu)選35°C ; 上述實(shí)施方案中，本專(zhuān)利技術(shù)的方法，進(jìn)一步包含以下內(nèi)容： 取阿普斯特適量，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋制成每1ml約含1.0 mg的溶液， 作為供試品溶液；精密量取適量，用溶劑稀釋并制成每1ml中約含10 μ g的溶液。照高效 液相法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄V D)測(cè)定。用（ChiralPak AD-H)為填充劑，以己 烷-乙醇-乙腈-二乙胺（45 : 45 : 10 : 0. 1)為流動(dòng)相，柱溫35°C，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，流 速為每分鐘〇. 8ml。取阿普斯特消旋體適量，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋并制成每1ml 中約含1.0 mg的溶液，取10 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖，阿普斯特R異構(gòu)體與阿普斯 特依次流出，阿普斯特與異構(gòu)體見(jiàn)的分離度應(yīng)符合要求。精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液 各10 μ 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中阿普斯特R異構(gòu)體峰不 得大于對(duì)照溶液主峰面積（1. 0% )。 本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果為：本專(zhuān)利技術(shù)的方法可以將阿普斯特及其對(duì)映異構(gòu)體有效分離， 該方法靈敏度高，柱效高，峰行對(duì)稱(chēng)，從而可以準(zhǔn)確控制阿普斯特的質(zhì)量，簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確 地分離檢測(cè)出阿普斯特的對(duì)映異構(gòu)體。【附圖說(shuō)明】 圖1空白溶液圖譜 圖2阿普斯特消旋體圖譜 圖3阿普斯特供試品溶液圖譜【具體實(shí)施方式】 下面的實(shí)施例將對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)作更具體的解釋?zhuān)緦?zhuān)利技術(shù)并不僅僅局限于這些實(shí)施 例，同樣這些實(shí)施例也不以任何方式限制本專(zhuān)利技術(shù)。 儀器與條件 高效液相色譜儀：Agi lent 1260 色譜柱：ChiralPak AD-H (250*4. 6mm，5 μ m) 流動(dòng)相：己烷-乙醇-乙腈-二乙胺（45 : 45 : 10 : 0· I) 流速：0· 8ml/min 波長(zhǎng)：230nm 柱溫：35°C 進(jìn)樣量：10 μ L 實(shí)驗(yàn)步驟： 取阿普斯特5mg，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋制成每1ml約含1.0 mg的溶液，作 為供試品溶液；取阿普斯特消旋體5mg，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋并制成每1ml中約 含1.0 mg的溶液，取10 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖，精密量取供試品溶液10 μ 1，分別 注入液相色譜儀，記錄色譜圖?！局鳈?quán)項(xiàng)】1. ，其特征在于該 方法色譜條件采用表面涂敷直鏈淀粉-三（3,5_二甲苯基氨基甲酸酯）硅膠為填料的手性 柱，以己燒 -乙醇-乙臆-二乙胺為流動(dòng)相。2. 如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法中所述的表面涂敷直鏈淀粉-三 (3,5_二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠為填料的手性柱為ChiralPak AD、ChiralPak AD-H、 S-Chiral03. 如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法中所述流動(dòng)相己烷-乙醇-乙 腈-二乙胺溶液的體積比為：45 : 45 : 10 : 0.1。4. 如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法色譜條件中柱溫為：30°C~40°C。5. 如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法色譜條件中流動(dòng)相的流速為： 0? 6 ~L 0ml/min〇6. 如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法色譜條件中檢測(cè)波長(zhǎng)為：200nm~ 260nm〇7. 如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法色譜條件中柱溫為：35°C。8. 如權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法色譜條件中流動(dòng)相的流速為： 0. 8ml/min〇9. 如權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于該方法色譜條件中檢測(cè)波長(zhǎng)為：230nm?！緦?zhuān)利摘要】一種用本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種采用高效液相色譜法分離檢測(cè)阿普斯特及其對(duì)映異構(gòu)體的方法，其特征在于該方法色譜條件采用表面涂敷直鏈淀粉?三(3，5?二甲苯基氨基甲酸酯)硅膠為填料的手性柱，以己烷?乙醇?乙腈?二乙胺為流動(dòng)相。
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張?jiān)诟?/a>，吳浩山，許馨文，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：億邦國(guó)創(chuàng)藥物研究院北京有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：北京;11
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