一種大麗花組培繁殖的種質保存方法技術

本發明專利技術公開了一種大麗花組培繁殖的種質保存方法，包括以下技術環節：1）外植體的選材與低溫預處理；2）接種；3）不定芽誘導并轉接；4）慢生長保存種質；5）復壯；6）生根移栽。本發明專利技術提供的大麗花組培繁殖的種質保存方法對大麗花種質保存周期長達4年，同時還解決了種質保存占地面積大、費用高等問題，而且操作簡便，技術穩定可靠，可重復性強，非常適合大規模大麗花種質的保存，是一種優良的大麗花種質資源保存方法。

【技術實現步驟摘要】
一種大麗花組培繁殖的種質保存方法
本專利技術涉及一種大麗花組培繁殖的種質保存方法，屬于農業科學

技術介紹
大麗花（DahliapinnataCav）為菊科大麗花屬多年生球根花卉，全屬約27種，又名大理菊、天竺牡丹、西番蓮、洋芍藥、大麗菊、地瓜花、紅苕花等，原產墨西哥、哥倫比亞及危地馬拉等國，后傳到歐洲、日本和我國。大麗花莖桿粗壯，葉片肥大，花形與牡丹相似，花大而色彩艷麗，具有花姿優美、花型多樣、花期長、品種繁多等特點，被譽為花卉中的寵兒。大麗花系天然種間雜交，人工選育的歷史不長，世界各國普遍栽培，目前在東北、西北、華北等地栽培較廣泛，其中在廣東秋、冬兩季栽培比較多。經過人工雜交選擇，成為異源八倍體，新品種層出不窮，花色嬌艷，花期長，適應性強，易于栽培，故一躍成為世界名花。目前大麗花是墨西哥的國花，西雅圖的市花，我國吉林省的省花，張家口、赤峰、包頭（小麗花）等城市的市花，大麗花象征大方、富麗，大吉大利，是世界著名的觀賞花卉。大麗花常用分株繁殖，但每株每年僅可分出5-6個新株，無法滿足產業化生產的要求，并且一直用分株繁殖，容易使病毒逐代積累，從而造成大麗花品種退化嚴重。除了分株繁殖，造成大麗花品種退化的原因還包括：栽培環境如光照、水分、溫度、營養不適宜大麗花生長發育，土壤板結和鹽漬化；連作土地的病原菌大量積累并復合浸染等，導致品種失去原有的典型性；在大麗花組織培養過程中，培養溫度、增殖芽的繼代代數以及激素濃度等因素都可能造成大麗花種苗發生無性變異。大麗花品種退化通常表現為花朵變小、過渡色多、花型紊亂、雙稈現象、株高參差不齊、生活力下降、抗性和產量降低等。目前，大麗花種質資源的保存大多采用田間栽培保存，但田間栽培保存存在以下局限性：光、溫、水及病蟲害控制較難，造成種質資源喪失；占地面積多，耗費人力、物力、財力巨大；長期無性繁殖過程中易出現人為混雜和種性退化等。組培繁殖的種質保存方法是花卉商品化推廣的重要輔助，既可在長距離運輸優良種苗，也可長時間保存優質種苗，防止種質退化。目前，還沒有成熟的大麗花種質保存體系應用于大麗花的產業發展，因此針對現有大麗花保存人力、物力、空間耗費大、保種時間短的不足，因此建立一種適宜的、保存時間久、低成本的大麗花種質資源保存方法對大麗花的產業發展具有重要意義。
技術實現思路
為克服目前大麗花常規保存所存在的保存空間大、投入資源高、保存時間短等缺點，本專利技術建立了一種大麗花組培繁殖的種質保存方法，通過優化培養程序、培養條件和培養組分，大大提高了大麗花的保存質量和保存期間，大麗花種質保存周期可長達4年，而且操作簡便，技術穩定可靠，可重復性強，非常適合大規模大麗花種質的保存。本專利技術的目的是通過以下技術方案解決的：一種大麗花組培繁殖的種質保存方法，其特征在于，它包括以下技術環節：1）外植體的選材與低溫預處理；2）接種；3）不定芽誘導并轉接；4）慢生長保存種質；5）復壯；6）生根移栽。該方法的詳細步驟如下：1）外植體的選材與低溫預處理：選擇生長至現蕾期的、健壯無病、種質與親本一致的大麗花整株，先用自來水沖洗掉根部泥土及其它表面雜物，然后用毛刷蘸取洗潔精洗一遍后接著用超純水沖洗干凈，將植株根部浸入裝有8mg/L的KT溶液中，2℃低溫預處理4-8天；2）接種：將大麗花用超純水清洗后轉移到超凈工作臺里，用70%酒精表面消毒15s，再用無菌水沖洗兩次，然后置于加入了數滴吐溫20的0.1%升汞中處理10min，再用無菌水沖洗4-5次，濾紙吸干，用解剖刀切割莖段后用鑷子接種至裝有培養基①的三角瓶中；3）不定芽誘導并轉接：培養室溫度控制為26±1℃，以熒光燈為光源，光照強度控制為1600-2000Lx，光周期控制為光14h/暗10h，25-30天誘導出不定芽，然后將不定芽接種至培養基②中，將接種好的三角瓶放入培養箱中培養，培養箱溫度控制為23-25℃，光照強度控制為1600-2000Lx、光周期控制為光14h/暗10h，培養5-8天；4）慢生長保存種質：將三角瓶轉移到低溫、弱光條件下緩慢生長，每培養10個月，繼代接種一次，再低溫培養；5）復壯：當需要大麗花恢復生長時，將三角瓶轉移到溫度控制為23-25℃、光照強度為1500-2000Lux，光周期為12h光/12h的培養箱中培養10-15天，獲得健壯的大麗花幼苗；6）生根移栽：將大麗花幼苗轉移到培養基③中，控制溫度為23-25℃、濕度≥85%、光照強度為2000-3000lx、光周期為12h光/12h培養條件下生長10-15天誘導生根，然后煉苗移栽。所述步驟1）中切割下接種的莖段長度為0.6-0.8cm。所述步驟2）中的培養基①的配方為：MS+2.5mg/L6-BA+0.08NAA+3%蔗糖+6.5g/L植物凝膠，pH為5.8。所述步驟3）中的培養基②的配方為：MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LGA+2.5mg/L氯化膽堿+4%蔗糖+6.0g/L瓊脂，pH為5.8。所述步驟4）中的低溫、弱光條件為：培養溫度控制為5-8℃，光照強度控制為400-600lx，光周期控制為光12h/暗12h。所述步驟6）中的培養基③的配方為：1/2MS+0.15mg/LNAA+1.5%蔗糖+6.5g/L瓊脂，pH為5.8。所述步驟4）中的繼代次數不超過5次。本專利技術的有益效果：（1）本專利技術采用大麗花莖段作為種質保存材料來源，取材容易，來源廣闊，生長季節不受限制，為育種工作中的種質引進和保存提供了捷徑；（2）本專利技術通過控制組織培養條件，有效地延緩了大麗花種苗的生長，使得種質資源保存周期大大拉長，種質資源保存周期最長可達4年；（3）與常規保種方法相比，本專利技術的原料成本降低、勞動力和培養保存空間減少，而且操作簡便，從而大大降低了保種成本；（4）與常規保種方法相比，本專利技術苗移栽成活率大大提高，可達95%以上。附圖說明附圖1為常規組培條件下大麗花品種亮劍生長1個月的示意圖；附圖2為采用本專利技術的大麗花組培繁殖的種質保存方法，大麗花品種亮劍繼代4次又生長8個月的示意圖；附圖3為采用本專利技術的大麗花組培繁殖的種質保存方法，大麗花品種亮劍繼代4次又生長8個月復壯并生根移栽時的狀態示意圖。具體實施方式下面結合附圖與實施例對本專利技術作進一步的說明，實施例中無特殊說明的為常規方法。實施例2010年6月，選擇大麗花品種亮劍按照本專利技術的技術路線進行組培繁殖的種質保存，詳細步驟如下：1）外植體的選材與低溫預處理：選擇生長至現蕾期的、健壯無病、種質與親本一致的大麗花品種亮劍的整株植株，先用自來水沖洗掉根部泥土及其它表面雜物，然后用毛刷蘸取洗潔精洗一遍后接著用超純水沖洗干凈，將植株根部浸入裝有8mg/L的KT溶液中，2℃低溫預處理6天；2）接種：將大麗花用超純水清洗后轉移到超凈工作臺里，用70%酒精表面消毒15s，再用無菌水沖洗兩次，然后置于加入了數滴吐溫20的0.1%升汞中處理10min，再用無菌水沖洗5次，濾紙吸干，用解剖刀切割莖段后用鑷子接種至裝有培養基①（配方為：MS+2.5mg/L6-BA+0.08NAA+3%蔗糖+6.5g/L植物凝膠，pH為5.8）的三角瓶中；3）不定芽誘導并轉接：培養室溫度控制為26±1℃，以熒光燈為光源，光照強度控制為1800Lx，光周期本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種大麗花組培繁殖的種質保存方法，其特征在于，它包括以下技術環節：1）外植體的選材與低溫預處理；2）接種；3）不定芽誘導并轉接；4）慢生長保存種質；5）復壯；6）生根移栽。

【技術特征摘要】
1.一種大麗花組培繁殖的種質保存方法，其特征在于，它包括以下技術環節：1）外植體的選材與低溫預處理；2）接種；3）不定芽誘導并轉接；4）慢生長保存種質；5）復壯；6）生根移栽；該方法的詳細步驟如下：1）外植體的選材與低溫預處理：選擇生長至現蕾期的、健壯無病、種質與親本一致的大麗花整株，先用自來水沖洗掉根部泥土及其它表面雜物，然后用毛刷蘸取洗潔精洗一遍后接著用超純水沖洗干凈，將植株根部浸入裝有8mg/L的KT溶液中，2℃低溫預處理4-8天；2）接種：將大麗花用超純水清洗后轉移到超凈工作臺里，用70%酒精表面消毒15s，再用無菌水沖洗兩次，然后置于加入了數滴吐溫20的0.1%升汞中處理10min，再用無菌水沖洗4-5次，濾紙吸干，用解剖刀切割莖段后用鑷子接種至裝有培養基①的三角瓶中；3）不定芽誘導并轉接：培養室溫度控制為26±1℃，以熒光燈為光源，光照強度控制為1600-2000Lx，光周期控制為光14h/暗10h，25-30天誘導出不定芽，然后將不定芽接種至培養基②中，將接種好的三角瓶放入培養箱中培養，培養箱溫度控制為23-25℃，光照強度控制為1600-2000Lx、光周期控制為光14h/暗10h，培養5-8天；4）慢生長保存種質：將三角瓶轉移到低溫、弱光條件下緩慢生長，每培養10個月，繼代接種一次，再低溫培...

【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：宋立勝，
類型：發明
國別省市：山東;37