本發明專利技術屬于細胞培養領域，具體涉及一種適于PK-15細胞生長的低血清無蛋白培養基及其制備方法，所述培養基包括氨基酸、維生素、無機鹽、微量元素及其他組分。本發明專利技術制備的適于PK-15細胞生長的低血清無蛋白培養基及其制備方法，具有無蛋白、無動物源成份、化學成份明確幾大優點，在工業上減少了血清對細胞培養過程的干擾，降低了生產成本，為細胞的產業化生產帶來極大方便。
【技術實現步驟摘要】
[000。 本專利技術屬于細胞培養領域，具體設及一種適于PK-15細胞生長的低血清無蛋白培 養基及其制備方法。
技術介紹
PK-15系豬腎細胞（PigKi化ey)，體外培養呈上皮樣貼壁細胞，該細胞對多種病毒 比較敏感，如豬圓環病毒（PCV)、豬攝病毒（CSFV)、豬細小病毒（PPV)等，可應用于豬圓環病 毒疫苗、豬攝病毒疫苗、豬細小病毒疫苗等的制備。 豬圓環病毒（Porcinecircovirus，PCV)在分類上屬圓環病毒科、圓環病毒屬。 PCV不凝集牛、羊、豬、雞等多種動物和人的紅細胞，其抗血清不能抑制豬細小病毒（PPV) 對紅細胞的凝集性。在臨床上主要表現為斷奶后仔豬多系統衰弱綜合癥（Postweaning MultisystemicWastingSyn化ome，PMW巧和豬皮炎與腎炎綜合征（PDN巧。除PMWS外， PDNS(豬皮炎與腎病綜合征）、PNP(增生性壞死性肺炎）、PRDC(豬呼吸道疾病綜合征）、繁 殖障礙、先天性顫抖、腸炎等相關的豬病，死亡率10%~30%不等，較嚴重的豬場在暴發本 病時死淘率高達40%，給養豬業造成嚴重的經濟損失。眾所周知，疫苗免疫是防控豬圓環病 毒病的主要手段。 豬攝（classicalSWinefever,CS巧是由豬攝病毒（CSFV)引起的一種高度接觸 性熱性傳染病，具有很強的傳染性，不同年齡、性別和品種的豬均能感染，而且高致死率，它 的傳播必然會對社會經濟造成巨大的損失，1984年世界動物衛生組織（01巧將其列入A類 傳染病，目前我國也將其定為一類傳染病。豬攝除可引起敗血癥W外，還會引起一系列其它 臨床表現，如妊娠母豬流產、胎兒崎變、慢性營養性消耗、淋己細胞和血小板減少等。目前， 世界大部分國家都采取了嚴格的衛生防疫措施、剔除豬攝感染豬、凈化豬群來控制和消滅 豬攝。一些發達國家通過防疫和防控手段已經根除了豬攝，但我國尚未徹底消滅，所W接種 豬攝疫苗尤其重要，也是控制豬攝傳播的重要手段之一。[000引 目前對于PK-15細胞的傳統培養方式是貼壁培養，通常在生長及維持培養基中需 要加入10% -20%的動物血清，W提供細胞生長所需的營養成分及細胞保持正常形態的支 持蛋白。該傳統工藝效率低、生產成本高；不同血清批次間差異顯著；放大重現性較差；對 下游純化工藝要求高；容易出現血清出復雜成分導致的疫苗質量隱患，設及生物安全和公 共衛生問題。另外，目前全球血清供應趨緊，運大大影響了疫苗企業的生產效率。因此盡量 少用血清已成為PK-15細胞培養的發展趨勢，同時低血清與無血清細胞培養技術的研究與 應用已被列入十二五國家科技支撐計劃重點項目。現有技術常通過添加牛血清白蛋白、轉鐵蛋白、膜島素、重組表皮生長因子等動物 源成分W及大豆水解蛋白等植物源蛋白成份，從而來降低血清的使用量。但是上述蛋白質 對生物制品（如疫苗）的安全性有很大影響。
技術實現思路
本專利技術主要提供了一種適于PK-15細胞生長的低血清無蛋白培養基及其制備方 法，具有無蛋白、無動物源成份、化學成份明確幾大優點，在科研上可減少血清對實驗過程 和結果的干擾，使用本專利技術所述的培養基，使PK-15細胞的培養過程中是在2%低血清濃度 條件下進行，減少了血清的用量。其技術方案如下：一種適于PK-15細胞生長的低血清無蛋 白培養基，其包括W下組分： 氨基酸部分包括W下組分： 心天冬氨酸^lSmgZL 以精氨酸鹽酸鹽50-100mg/L L-天冬酷胺：1-15成g/L 心半脫氨酸鹽酸鹽10-20mg/L 心巧気酸20-50mg/L 心?、^挺漸胺500-1000mgZL 以甘氨酸5-40mg/L 以組氨酸鹽酸鹽20-50mg/L 心巧巧/安;酸50-150mg/L心巧績峻50-150mg/L L-蛋氨酸20-50mg/L 心賴氨酸鹽酸鹽100-200mg/L 以苯丙氨酸沸-lOQmg/L 以脯氨酸10-50mg化 心絲妓酸10-50mg/L 心蘇氨酸40-K)0mg/L 以色氨酸5-20mg/LL-酪氨酸20-90mg/L L-娜訪酸 3.0-100mg/L ^內試酸 1-15mg/L 心婷脯氨酸^lOmgZL 以脫氨酸鹽酸鹽50-100mg化， 維生素部分包括W下組分： 丙麵酸鋼50-150mg/L生物素0.001-0.01mg/L 煙酷胺1-10從g壓 硫辛酸0.0001-O.Olmg/L 腐胺 0.001-0,1 ;mg/L 鹽酸化唉醇 0.001-0.1.rog/L D-泛酸巧 1 -10mg/L 核巧索O.! -1mg/L 氯化膽堿^lOmgZL 鹽酸硫胺1-10mg/L 葉騰 1-10mg/Li-肌醇 10-20mg/L VBll0.001-1mg/L, 無機鹽部分包括W下組分： A：水氣化巧 50-200mgZL 氣化鐘 200-500mg/L 硝酸鐘0.01-1mg/L 無水硫酸鏡10-100mg/L 無水磯酸氨二鋼0.]-]0mg/L 無水憐酸二氨納100-200mg/L 氯化銷撕蜘-70蜘nig/L 六水氯化儀1 (W㈱mg/L, 微量元素部分包括W下組分： 八gNO, 化00001-0.0001mg/L 八ICl.; ? 6H:0 0.000] -0.001mg/L Ba(C2l-I:;〇2)2 0.001-0.01mg/L CdSO..; ?8H2O 0.001-0.01mg/L CoCb?6打込O 0.001-0.0!mg/L 打(S〇4)3? ] 5H?_0 化0001 -0.001mg/L CuS〇4?SH.O0.0001-0.001mg/L Fe(NO：〇3? 9HjO 0.00!-().0!mg/L FeS〇4?-HoO 0.001-0.01mg/L GeO] 沿JQ飢-食，㈱Img/L H2SeO.; 0.001-0.0img/L KBi 0.00001-0.0001mg/L KI 0.00001-0.0001mg/L MnCI, ?4H2O 0.0001-0.001mg/L NaF 0.00 !-0.01mglL NajSiO:; ?9H2O 0.01-0.1mg/L NaV〇3 0.0001-0.001mg/L (NH4)6M07024 ?4H2O 0.001-0.01mg/L NiS〇4* 6H.0 化0001-0.001mg/L RbCl 0.000!-0.001ms/L ZnS〇4? 7中0 0.00i-0.01mg/L ZrOCh?8H2O0.001-化01mg/L 如樹2 。淚(MBl-O扇Olmg/L TiCL 化00的-化㈱Img/L Na?.SeO,，，5H:0 ".00 ] -0.01mg/L， 還包括W下其他組分： 胸昔 mg/L 次黃嚷吟 0 01-1mg/L 亞油酸 0.01-1mg/LD-葡萄糖 3000-5000mg/L 齡紅 1 -20mg化 HEPES1000-4000mg/L〇 優選的，一種適于PK-15細胞生長的低血清無蛋白培養基的組分如下：氨基酸部 分包括W下組分： 以天冬氨酸Mmg/L 以精氨酸鹽酸鹽85mg/L L-天冬醜胺13.5mg/LL-半脫氨酸鹽酸鹽15.56rag/L心谷氨酸38.5mg/L 心谷氨醜胺舞4mg/L本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種適于PK?15細胞生長的低血清無蛋白培養基，其特征在于：其包括以下組分：氨基酸部分包括以下組分：維生素部分包括以下組分：無機鹽部分包括以下組分：微量元素部分包括以下組分：還包括以下其他組分：胸苷??0.01?1mg/L??????????次黃嘌呤??0.01?1mg/L亞油酸??0.01?1mg/L????????D?葡萄糖??3000?5000mg/L酚紅??1?20mg/L????????????HEPES??1000?4000mg/L。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳文均，徐念沁，陳巧云，
申請(專利權)人：南京三生生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。