TACI-免疫球蛋白融合蛋白制劑制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及TACI-免疫球蛋白融合蛋白制劑。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
TACI-免疫球蛋白融合蛋白制劑本申請是國際申請PCT/EP2008/065395，國際申請日2008年11月12日，中國國家階段申請?zhí)?00880115935.7的專利技術(shù)專利申請的分案申請。專利
本專利技術(shù)屬于治療蛋白質(zhì)制劑領(lǐng)域。更具體說，本專利技術(shù)涉及pH范圍為4.5－5.5的TACI-免疫球蛋白(Ig)融合蛋白制劑。專利技術(shù)背景BLyS配體/受體家族業(yè)已鑒定到對于BlyS(B淋巴細(xì)胞刺激劑)和APRIL(一種誘導(dǎo)增殖的配體)兩種生長因子具有獨特結(jié)合親和力的三種受體：TACI(跨膜激活劑和CAML-相互作用子)、BCMA(B細(xì)胞成熟抗原)和BAFF-R(B細(xì)胞活化因子受體)(Marsters等.,2000；Thompson等.2001)。TACI和BCMA能結(jié)合BLyS與APRIL二者，而BAFF-R看來只能高親和力結(jié)合BLyS(Marsters等.,2000；Thompson等.2001)。因此，BLyS能通過所有這三種受體傳導(dǎo)信號，而APRIL看來只能通過TACI和BCMA傳導(dǎo)信號。此外，在全身免疫性風(fēng)濕病患者的血清樣品中已鑒定到循環(huán)性BLyS與APRIL的異質(zhì)三聚體復(fù)合物(由三個蛋白亞基組成，含有BLyS和APRIL亞基的一個或二個拷貝)，并證明其在體外能誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖(Roschke等,2002)。BLyS和APRIL是B細(xì)胞成熟、增殖和存活的強(qiáng)效刺激劑(Moore等,1999；Schneider等,1999；Do等,2000)。BLyS和APRIL是自身免疫性疾病(特別是涉及B細(xì)胞的自身免疫性疾病)持續(xù)存在所必需的。經(jīng)工程改造能高水平表達(dá)BLyS的轉(zhuǎn)基因小鼠顯示可患免疫細(xì)胞疾病，其癥狀類似于全身性紅斑狼瘡患者所見(Gross等,2000；Mackay等,1999)。類似地，檢測到全身性紅斑狼瘡病人和其它各種自身免疫性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清樣品中BLyS/APRIL水平升高(Roschke，2002；Cheema等,2001；Groom等,2002)，從而使BLyS和/或APRIL與B細(xì)胞介導(dǎo)疾病的關(guān)聯(lián)從動物模型擴(kuò)展到人類。MS病人外周血單核細(xì)胞和T細(xì)胞的BLyS和APRIL表達(dá)上調(diào)(Thangarajh等,2004；Thangarajh等,2005)。在MS病損中發(fā)現(xiàn)位于靠近表達(dá)BAFF-R免疫細(xì)胞的星形細(xì)胞中BLyS表達(dá)強(qiáng)烈上調(diào)(Krumbholz等,2005)。AtaciceptAtacicept(INN)是一種重組融合蛋白，含有受體TACI(跨膜激活劑和鈣調(diào)節(jié)劑及親環(huán)素-配體(CAML)-相互作用子)的胞外配體結(jié)合部分及修飾的人IgGFc部分。Atacicept的功能是拮抗腫瘤壞死因子(TNF)超家族二成員BLyS(B細(xì)胞刺激劑)和APRIL(增殖誘導(dǎo)配體)。已證明BLyS和APRIL是B細(xì)胞成熟、發(fā)揮功能和存活的重要調(diào)節(jié)劑。Atacicept是一種包含人IgG1-Fc與BLyS受體TACI胞外結(jié)構(gòu)域一部分融合而成的313個氨基酸的可溶性糖蛋白，其預(yù)計分子量為35.4kDa。該產(chǎn)品的構(gòu)象為二聚體，預(yù)計分子量為73.4kDa?？捎弥亟M技術(shù)在中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞中產(chǎn)生Atacicept。Atacicept中的人IgG1-Fc經(jīng)修飾削弱了其Fc與補(bǔ)體C1q組分結(jié)合和與抗體受體相互作用的能力(Tao等,1993；Canfield等,1991)。經(jīng)檢測證實Atacicept的這些Fc效應(yīng)器功能減弱。治療蛋白制劑TACI-Ig融合蛋白如atacicept是生物制劑，即治療人類疾病的治療蛋白，因此可對人類給藥。開發(fā)這種制劑目的是提供治療蛋白的有效遞送。治療用蛋白常常遇到的問題是，例如蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性差(常需要冷藏或冷凍保存)，生物利用度差和病人對腸胃道外途徑劑型不友好。在生物技術(shù)產(chǎn)品的加工中，通常需要獲得高純度的治療蛋白水溶液。當(dāng)配制這些蛋白溶液(如供非腸胃道遞送)時，使蛋白質(zhì)穩(wěn)定至關(guān)重要。因此，必須選擇能穩(wěn)定蛋白質(zhì)的賦形劑。高純度蛋白質(zhì)溶液的穩(wěn)定性也可能受緩沖液的影響。緩沖液通過其離子強(qiáng)度和pH共同影響蛋白質(zhì)在溶液中的穩(wěn)定性。已用于此目的的緩沖液例子有磷酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽和琥珀酸鹽緩沖液。即使在開始儲存時治療蛋白是溶液，所遇到的問題是維持蛋白質(zhì)溶液穩(wěn)定防止其在儲存時凝聚形成顆?；虺恋恚头乐蛊浣到?如水解、氧化、脫酰胺、被截短或變性)。溫度也可影響溶解性，通常隨著溫度升高溶解性也升高。然而高于某溫度域值時蛋白質(zhì)會部分去折疊導(dǎo)致溶解性降低或凝聚/沉淀。為防止凝聚和降解，為獲得長期穩(wěn)定的藥物，需要開發(fā)含有一種或多種賦形劑的穩(wěn)定的治療性蛋白質(zhì)制劑。本專利技術(shù)針對這種需要，提供了可用于治療人類疾病的治療蛋白，即穩(wěn)定的、藥學(xué)上可接受的TACI-免疫球蛋白融合蛋白制劑。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)依據(jù)的基礎(chǔ)是開發(fā)了穩(wěn)定的TACI-免疫球蛋白融合蛋白制劑。第一方面，本專利技術(shù)的制劑包括：a)TACI-免疫球蛋白(TACI-Ig)融合蛋白，其包含：i.TACI的胞外結(jié)構(gòu)域或其能結(jié)合BLyS和/或APRIL的片段或變體；和ii.免疫球蛋白的恒定區(qū)；和b)使制劑的pH范圍維持在4.5-5.5之間的緩沖液。第二方面，本專利技術(shù)涉及包含這種制劑的藥物組合物。第三方面，本專利技術(shù)涉及用于治療或預(yù)防自身免疫性疾病或淋巴增殖性疾病的本專利技術(shù)的制劑或藥物組合物。第四方面，本專利技術(shù)涉及制備本專利技術(shù)制劑的方法，該方法包括制備TACI-Ig融合蛋白的液體溶液，并調(diào)節(jié)該液體溶液的pH至4.5-5.5范圍的步驟。本專利技術(shù)的第五方面涉及制備本專利技術(shù)制劑的方法，該方法包括在滅菌容器中充裝預(yù)定量所述制劑的步驟。專利技術(shù)詳述本專利技術(shù)依據(jù)的基礎(chǔ)是開發(fā)了穩(wěn)定的TACI-免疫球蛋白融合蛋白制劑，此制劑中的TACI-Ig融合蛋白可長期穩(wěn)定(例如3個月以上、6個月以上、12個月以上、15個月以上或18個月以上)。按照本專利技術(shù)，所述制劑包括：a)TACI-免疫球蛋白(TACI-Ig)融合蛋白，其包含：i.TACI的胞外結(jié)構(gòu)域或其能結(jié)合BLyS和/或APRIL的片段或變體；和ii.免疫球蛋白的恒定區(qū)；b)使制劑的pH范圍維持在4.5-5.5之間的緩沖液。在本專利技術(shù)制劑的一個實施方式中，所述制劑的pH范圍為4.7-5.3，更優(yōu)選4.9-5.1。所述制劑的pH因此可以是4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。在一優(yōu)選實施方式中，所述制劑的pH是5.5。本專利技術(shù)制劑所用的緩沖液可以是，例如，磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽或組氨酸緩沖液。所述緩沖液的濃度范圍可以是1-59mM，優(yōu)選5-25mM。例如，本專利技術(shù)制劑中包含的緩沖液濃度為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50mM。在本專利技術(shù)制劑的一個優(yōu)選實施方式中，所述緩沖液是乙酸鹽緩沖液。優(yōu)選是乙酸鈉(NaAc)緩沖液。在本專利技術(shù)的一個實施方式中，所述緩沖液是5-25mM，優(yōu)選8-12mM，更優(yōu)選約10mM的NaAc緩沖液。在一個實施方式中，本專利技術(shù)制劑包含賦形劑。合適的賦形劑是，例如甘露醇、山梨醇、甘油或海藻糖。所述制劑中甘露醇或山梨醇的濃度范圍可以是(例如)30-80，或40-60，或約50或51mg/ml。所述制劑中甘油本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種制劑，包含：a)TACI?免疫球蛋白(TACI?Ig)融合蛋白，其包含：i.TACI的胞外結(jié)構(gòu)域或其能結(jié)合BLyS和/或APRIL的片段或變體；和ii.免疫球蛋白的恒定區(qū)；b)使制劑的pH范圍維持在4.9?5.1之間的乙酸鹽緩沖液；和c)濃度為60?100mg/ml的海藻糖。

【技術(shù)特征摘要】
2007.11.12 EP 07120489.5;2007.11.12 EP 07120490.3;1.一種制劑，包含：a)TACI-免疫球蛋白(TACI-Ig)融合蛋白，其包含：i.TACI的胞外結(jié)構(gòu)域或其能結(jié)合BlyS和/或APRIL的片段或變體；和ii.免疫球蛋白的恒定區(qū)；b)使制劑的pH范圍維持在4.9-5.1之間的乙酸鹽緩沖液；和c)濃度為60-100mg/ml的海藻糖；其中，所述TACI-Ig融合蛋白包含SEQIDNO:1的氨基酸殘基34-66和/或氨基酸殘基71-104，并且，所述TACI-Ig融合蛋白的濃度是20mg/mL至180mg/mL。2.如權(quán)利要求1所述的制劑，所述乙酸鹽緩沖液是乙酸鈉。3.如權(quán)利要求2所述的制劑，乙酸鈉的濃度是5-25mM。4.如權(quán)利要求3所述的制劑，所示制劑的pH范圍為pH5.0。5.如權(quán)利要求4所述的制劑，乙酸鈉的濃度是10mM。6.如權(quán)利要求5所述的制劑，所述制劑包含80mg/ml海藻糖。7.如以上權(quán)利要求中任何一項所述的制劑，該制劑還包含防腐劑。8.如權(quán)利要求7所述的制劑，其中所述防腐劑是苯甲醇聯(lián)合苯扎氯銨。9.如權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述TACI-Ig融合蛋白的TACI片段由SEQIDNO:1的氨基酸殘基30-110構(gòu)成...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：A·德爾里奧，G·里納爾迪，J·里查德，
申請(專利權(quán))人：阿雷斯貿(mào)易股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：瑞士;CH