一種油乳劑制備方法技術

本發明專利技術公開了一種油乳劑制備方法，屬于獸用生物制品技術領域。本發明專利技術包括以下步驟：油相的制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯按照一定體積比例加入到經高壓滅菌的藥用白油中混合,經37℃水浴充分搖勻；水相的制備：將吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯按照一定的體積比例溶于抗原溶液；乳化：按油相∶水相＝1.5-2∶1的體積比，先將油相放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時緩慢加入水相加完后再以8000r/min攪拌10-15分鐘，在終止攪拌前加入濃度為1％的硫柳汞溶液，加入后其最終濃度為萬分之一；半成品檢驗；分裝：定量分裝，并粘貼標簽，置2～8℃保存。本發明專利技術制備的油乳劑黏度小，從而取得更好的乳化穩定效果，同時降低免疫注射副反應。

【技術實現步驟摘要】
一種油乳劑制備方法
本專利技術屬于獸用生物制品
，尤其與一種油乳劑制備方法有關。
技術介紹
油乳劑疫苗是目前國內外疫苗市場上產品最多的疫苗，其免疫性能穩定、生物安全性高、使用較小的免疫劑量和較少的免疫次數就能達到延長免疫刺激時間，使機體獲得足夠的保護性抗體。傳統油乳劑疫苗在生產過程中將司班-80加入白油中作為油相，吐溫-80、硬脂酸鋁加入抗原水溶液中作為水相，二者混合乳化獲得的油乳劑疫苗穩定性高，免疫后可獲得持久的較高水平的免疫抗體，例如專利公開號為CN102579339A公開了一種肉雞用油乳劑疫苗，包括油相和水相，油相選自白油、司盤-80、硬脂酸鋁，水相選自濃縮的抗原疫苗、吐溫-80，適用肉雞的油乳劑疫苗的抗原為滅活的病毒，包括雞新城疫病毒和禽流感病毒的一種或組合。但是該油乳劑粘度大，免疫注射引起的應激反應較大，可形成無菌性化膿灶，在接種部位出現腫脹、硬結，或形成肉芽腫，影響免疫效果的同時，對動物肉制品質量也產生了不良的影響。針對該問題，本專利申請人研究開發了一種油乳劑制備方法來解決該問題。
技術實現思路
本專利技術的目的旨在克服現有的油乳劑存在的粘度大而導致免疫注射引起的應激反應較大等問題，提供一種油乳劑制備方法。為此，本專利技術采用以下技術方案：一種油乳劑制備方法，其特征是，包括以下步驟：(1)、油相的制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯按照一定體積比例加入到經高壓滅菌的藥用白油中混合,經37℃水浴充分搖勻；(2)、水相的制備：將吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯按照一定的體積比例溶于抗原溶液；(3)乳化：按油相∶水相＝1.5-2∶1的體積比，先將油相放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時緩慢加入水相加完后再以8000r/min攪拌10-15分鐘，在終止攪拌前加入濃度為1％的硫柳汞溶液，加入后其最終濃度為萬分之一；(4)、半成品檢驗；(5)、分裝：定量分裝，并粘貼標簽，置2～8℃保存。作為對上述技術方案的補充和完善，本專利技術還包括以下技術特征。所述的Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯占疫苗總體積比例分別為0.1％-3.5％、0.1％-3.5％、0.3％-2％、0.3％-2％和0.1％-0.7％。作為優選，所述的Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯占疫苗總體積比例分別為0.8％-3.42％、0.8％-3.42％、0.45％-1.85％、0.45％-1.85％和0.2％-0.5％。抗原為大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌、壞死梭桿菌、巴氏桿菌或新城疫病毒，但不限于以上病原。使用本專利技術可以達到以下有益效果：本專利技術采用甘露醇單油酸酯、司班-80、TW-80和聚氧乙烯40氫化蓖麻油進行復配，采用蔗糖酯替代硬脂酸鋁作為穩定劑，而且制備的油乳劑黏度小，從而取得更好的乳化穩定效果，同時降低免疫注射副反應。本專利技術制備工藝相對于傳統制備工藝相對沒有增加制備工藝流程，操作簡單，因此值得運用和推廣。附圖說明圖1為本專利技術的乳化劑復配比例示意圖。圖2為實施例1的水乳劑制備好后用LS-POP(6)激光粒度分布儀測定粒徑大小示意圖。圖3為為實施例2的水乳劑制備好后用LS-POP(6)激光粒度分布儀測定粒徑大小示意圖。具體實施方式下面結合附圖對本專利技術的具體實施方式進行詳細描述。本專利技術包括包括以下步驟：油相的制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯按照一定的體積比例加入到經高壓滅菌的藥用白油中混合,經37℃水浴充分搖勻；水相的制備：將吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯按照一定的體積比例溶于抗原溶液；乳化：按油相∶水相＝1.5-2∶1的體積比，先將油相放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時緩慢加入水相加完后再以8000r/min攪拌10-15分鐘，在終止攪拌前加入濃度為1％的硫柳汞溶液，加入后其最終濃度為萬分之一；半成品檢驗；分裝：定量分裝，并粘貼標簽，置2～8℃保存。進一步地，如圖1所示，Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯占疫苗總體積比例分別為0.1％-3.5％、0.1％-3.5％、0.3％-2％、0.3％-2％和0.1％-0.7％。作為優選，如圖1所示，所述的Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯占疫苗總體積比例分別為0.8％-3.42％、0.8％-3.42％、0.45％-1.85％、0.45％-1.85％和0.2％-0.5％。抗原為大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌、壞死梭桿菌、巴氏桿菌或新城疫病毒，但不限于以上病原。成品檢驗物理性狀：外觀：乳白色乳劑。劑型：油包水型；取一只清潔的吸管，吸取少量疫苗滴入冷水中，除第1滴外，其余均不擴散。穩定性：吸取疫苗10ml加入尖底離心管中，以4000r/min分鐘離心15分鐘，管底析出的水相應≤0.5ml。在4℃、室溫、37℃環境觀察其破乳情況，其中2～8℃保存12個月后無破乳,穩定性良好。黏度：用1ml吸管(下口內徑為1.2mm,上口內徑為2.7mm)，吸取25℃左右疫苗1ml，令其垂直自然流出，0.4ml所需要時間不超過8秒；粒徑測試:將油乳劑制備好后用LS-POP(6)激光粒度分布儀測定粒徑大小，粒徑小于500um，符合油乳劑粒徑要求。蔗糖酯是蔗糖脂肪酸酯的簡稱，是由蔗糖與C8～C22等食用脂肪酸合成的一類的非離子表面活性劑，蔗糖酯的乳化作用是由具有高親水性的蔗糖分子和具有親油性的脂肪酸基團所致。作為蔗糖酯親水基的蔗糖部分，兼備出色的親水性及高疏油性，可以在油水界面形成強固穩定的乳化效果，另外，蔗糖酯還有抑制耐熱性芽孢菌的作用，這對產品的貯存也是很有利的。聚氧乙烯蓖麻油衍生物是由不同量環氧乙烷和蓖麻油或氫化蓖麻油反應得到的一系列物質。兩種主要衍生物為聚氧乙烯35蓖麻油(EL-35)和聚氧乙烯40氫化蓖麻油(RH-40),主要應用于水不溶性藥物或其他脂溶性藥物的增溶劑和乳化劑，可防止溶血，并能很快通過尿液排泄,中國藥典未收載,收錄于歐洲藥典和美國藥典。TW-80作為增溶劑、乳化劑和穩定劑已收入多國藥典。在相近的生產成本的條件下，本專利技術采用甘露醇單油酸酯、司班-80、TW-80和聚氧乙烯40氫化蓖麻油進行復配，采用蔗糖酯替代硬脂酸鋁作為穩定劑，取得更好的乳化穩定效果，同時降低免疫注射副反應。實施例1:抗原制備：用雞新城疫病毒弱毒LaSota株接種9-10日齡易感雞胚培養，收獲感染雞胚液，要求病毒胚液HA效價≧1:160,每羽份疫苗中含滅活的雞新城疫病毒LaSota株≥108.5EID50，經甲醛溶液滅活后4℃保存備用。油相制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯加入高壓滅菌的藥用白油混合,使其終濃度分別為2.9％和2.5％，37℃水浴片刻,充分搖勻。水相制備：將一定比例的吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯溶于抗原溶液，使其占水相比例分別為2.4％、2％和1.25％。乳化:取油相1.5份放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時徐徐加入水相1份，加完后再以8000r/min攪拌10-15分鐘，在終止攪拌前加入1％硫柳汞溶液，使其最終濃度為萬分之一。半成品檢驗:按現行《中國獸藥典》附錄進行，應無菌生長。物理性狀：外觀乳白色乳劑。劑型油包水型。取一只本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種油乳劑制備方法，其特征在于：包括以下步驟：(1)、油相的制備：將Span?80、甘露醇單油酸酯按照體積按一定體積比例加入到經高壓滅菌的藥用白油中混合,經37℃水浴充分搖勻；(2)、水相的制備：將吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯按照一定的體積比例溶于抗原溶液；(3)乳化：按油相∶水相＝1.5?2∶1的體積比，先將油相放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時緩慢加入水相，加完后再以8000r/min攪拌10?15分鐘，在終止攪拌前加入濃度為1％的硫柳汞溶液，加入后其最終濃度為萬分之一；(4)、半成品檢驗；(5)、分裝：定量分裝，并粘貼標簽，置2～8℃保存。

【技術特征摘要】
1.一種油乳劑制備方法，其特征在于：包括以下步驟：(1)、油相的制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯按照體積按一定體積比例加入到經高壓滅菌的藥用白油中混合，經37℃水浴充分搖勻；(2)、水相的制備：將吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯按照一定的體積比例溶于抗原溶液；(3)乳化：按油相∶水相＝1.5-2∶1的體積比，先將油相放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時緩慢加入水相，加完后再以8000r/min攪拌10-15分鐘，在終止攪拌前加入濃度為1％的硫柳汞溶液，加入后其最終濃度為萬分之一；(4)、半成品檢驗；(5)、分裝：定量分裝，并粘貼標簽，置2～8℃保存；其中，...

【專利技術屬性】
技術研發人員：林毅，謝晶，廖黨金，李興玉，于吉鋒，曹冶，李江凌，趙素君，
申請(專利權)人：四川省畜牧科學研究院，
類型：發明
國別省市：四川;51