檢測空腸彎曲菌的方法及其單抗技術

本發明專利技術屬于微生物檢測領域。具體而言，本發明專利技術涉及一種檢測空腸彎曲菌的方法、用于該方法的兩株由同一次單克隆抗體制備過程產生的抗空腸彎曲菌的單克隆抗體，該單克隆抗體可特異性地與空腸彎曲菌結合。它由小鼠雜交瘤細胞系3G2D8H3G9，CGMCC?No.8766或4C9E1G7H3，CGMCC?No.8457所產生。本發明專利技術還提供了抗空腸彎曲菌的單克隆抗體的用途。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于微生物檢測領域。具體而言，本專利技術涉及一種抗空腸彎曲菌單克隆抗體、產生該單克隆抗體的雜交瘤細胞以及抗空腸彎曲菌的單克隆抗體的用途。
技術介紹
空腸彎曲菌(campylobacterjejunienteritis)是1973年Butzler等自腹瀉病人糞便中分離出來，目前已認識其為人類腹瀉的主要致病菌之一。空腸彎曲菌腸炎的發病率在發達國家超過細菌性痢疾，在發展中國家發病率幾乎等同于細菌性痢疾。本菌作為重要的食源性致病菌，隨著食物進入腸道后在含微量氧環境下迅速繁殖，主要侵犯空腸、回腸和結腸，侵襲腸粘膜，造成充血及出血性損傷，近年來觀察到有些菌株能產生類似霍亂腸毒素，引起腸腔內液體分泌增加。目前空腸彎曲菌的檢測主要依賴于國標所規定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩定的快速檢測手段，但國內外目前尚無可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以空腸彎曲菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及空腸彎曲菌快速檢測產品。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種體外檢測副溶血性弧菌的方法。本專利技術的另一個目的是提供用于上述方法的兩株由同一次單克隆抗體制備過程產生的可特異性地結合于副溶血性弧菌不同抗原位點的單克隆抗體。本專利技術的另一個目的是提供產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞。本專利技術的第一方面是提供了一種體外檢測空腸彎曲菌的方法，所述方法用于非疾病診斷目的，包括以下步驟：(a)將待測樣品加樣于包被有捕捉抗體的固相載體，從而使待測樣品中的空腸彎曲菌與固相載體上的捕捉抗體結合，形成帶有“空腸彎曲菌-捕捉抗體”二元復合物的固相載體；所述的捕捉抗體是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆抗體3G2D8H3G9，所述的單克隆抗體3G2D8H3G9由小鼠雜交瘤細胞系3G2D8H3G9，CGMCCNo.8766產生；(b)將檢測抗體加樣于(a)獲得的固相載體，從而形成帶有“檢測抗體-空腸彎曲菌-捕捉抗體”三元復合物的固相載體；所述的檢測抗體是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆抗體4C9E1G7H3，所述的單克隆抗體4C9E1G7H3由小鼠雜交瘤細胞系4C9E1G7H3，CGMCCNo.8457產生，且所述的單克隆抗體4C9E1G7H3攜帶一可檢測標記物；和(c)檢測三元復合物中的可檢測標記物，從而確定待測樣品中空腸彎曲菌的存在與否以及存在的量。在一優選例中，所述的固相載體為酶標反應板。在另一優選例中，所述的可檢測標記物為辣根過氧化物酶。本專利技術的第二方面是提供了一種免疫球蛋白，它是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆抗體，它由小鼠雜交瘤細胞系3G2D8H3G9，CGMCCNo.8766所產生。本專利技術的第三方面是提供了一種產生單克隆抗體的雜交瘤細胞，它是小鼠雜交瘤細胞系3G2D8H3G9，CGMCCNo.8766。本專利技術的第四方面是提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于檢測空腸彎曲菌，所述用途用于非疾病診斷目的。本專利技術的第五方面是提供了一種免疫球蛋白，它是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆抗體，它由小鼠雜交瘤細胞系4C9E1G7H3，CGMCCNo.8457所產生。本專利技術的第六方面是提供了一種產生單克隆抗體的雜交瘤細胞，它是小鼠雜交瘤細胞系4C9E1G7H3，CGMCCNo.8457。本專利技術還提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于檢測空腸彎曲菌，所述用途用于非疾病診斷目的。本專利技術各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本專利技術的特點、目的和優勢將更為明顯。附圖說明圖1本專利技術的單克隆抗體的SDS-PAGE電泳圖Lane1：4C9E1G7H3，Lane3：3G2D8H3G9。具體實施方式本專利技術人的研究表明，以空腸彎曲菌作為免疫原，免疫Balb/c小鼠，分離純化得到抗空腸彎曲菌單克隆抗體4C9E1G7H3和3G2D8H3G9，其抗體效價可達到1:100000，其能夠特異性、高效地與空腸彎曲菌結合，與單增李斯特、豬霍亂沙門、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內氏志賀、鮑氏志賀、大腸O157:H7、小腸耶爾森氏菌等91種細菌(株)均無交叉反應。本專利技術提供了抗空腸彎曲菌單克隆抗體。本專利技術的抗空腸彎曲菌單克隆抗體可以利用小鼠雜交瘤細胞系4C9E1G7H3(CGMCCNo.8457)或3G2D8H3G9(CGMCCNo.8766)分泌產生。本專利技術包括具有抗空腸彎曲菌單克隆抗體4C9E1G7H3和3G2D8H3G9的相應氨基酸序列的單克隆抗體，以及具有這些鏈的其他蛋白質或蛋白質偶聯物及融合表達產物。具體地，本發明包括具有含超變區(互補決定區，CDR)的輕鏈和重鏈的任何蛋白質或蛋白質偶聯物及融合表達產物(即免疫偶聯物及融合表達產物)，只要該超變區與本專利技術的輕鏈和重鏈的超變區相同或至少90％同源性，較佳地至少95％同源性。如本領域技術人員所知，免疫偶聯物及融合表達產物包括:藥物、毒素、細胞因子(cytokine)、放射性核素、酶和其他診斷或治療分子與抗空腸彎曲菌單克隆抗體或其片段結合的而形成的偶聯物。本專利技術還包括與抗空腸彎曲菌單克隆抗體或其片段結合的細胞表面標記物或抗原。對于本專利技術的抗空腸彎曲菌單克隆抗體重鏈和輕鏈序列，可以用常規方法測定?？箍漳c彎曲菌單克隆抗體V鏈的超變區或互補決定區(complementaritydeterminingregion,CDR)特別令人感興趣，因為它們中至少部分涉及結合抗原。因此，本專利技術包括那些具有帶CDR的免疫球蛋白輕鏈和重鏈可變鏈的分子，只要其CDR與抗空腸彎曲菌單克隆抗體CDR具有90％以上(較佳地95％以上)的同源性。本專利技術不僅包括完整的單克隆抗體，還包括具有免疫活性的抗體片段，如Fab或(Fab‘)2片段；抗體重鏈；抗體輕鏈。本專利技術還提供了上述免疫球蛋白或其片段的DNA分子。這些DNA分子的序列可以用常規技術，利用雜交瘤細胞系4C9E1G7H3(CGMCCNo.8457)或3G2D8H3G9(CGMCCNo.8766)獲得。此外，還可將輕鏈和重鏈的編碼序列融合在一起，形成單鏈抗體。一旦獲得了有關的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關序列。這通常是將其克隆入載體，再轉入細胞，然后通過常規方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關序列。此外，還可用人工合成的方法來合成有關序列，尤其是片段長度較短時。通常，通過先合成多個小片段，然后再進行連接可獲得序列很長的片段。目前，已經可以完全通過化學合成來得到編碼本專利技術蛋白(或其片本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種體外檢測空腸彎曲菌的方法，所述方法用于非疾病診斷目的，包括以下步驟：(a)將待測樣品加樣于包被有捕捉抗體的固相載體，從而使待測樣品中的空腸彎曲菌與固相載體上的捕捉抗體結合，形成帶有“空腸彎曲菌?捕捉抗體”二元復合物的固相載體；所述的捕捉抗體是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆抗體3G2D8H3G9，所述的單克隆抗體3G2D8H3G9由小鼠雜交瘤細胞系3G2D8H3G9，CGMCC?No.8766產生；(b)將檢測抗體加樣于(a)獲得的固相載體，從而形成帶有“檢測抗體?空腸彎曲菌?捕捉抗體”三元復合物的固相載體；所述的檢測抗體是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆抗體4C9E1G7H3，所述的單克隆抗體4C9E1G7H3由小鼠雜交瘤細胞系4C9E1G7H3，CGMCC?No.8457產生，且所述的單克隆抗體4C9E1G7H3攜帶一可檢測標記物；和(c)檢測三元復合物中的可檢測標記物，從而確定待測樣品中空腸彎曲菌的存在與否以及存在的量。

【技術特征摘要】
1.一種體外檢測空腸彎曲菌的方法，所述方法用于非疾病診斷目的，包括以下步驟：
(a)將待測樣品加樣于包被有捕捉抗體的固相載體，從而使待測樣品中的空腸彎曲菌與
固相載體上的捕捉抗體結合，形成帶有“空腸彎曲菌-捕捉抗體”二元復合物的固相載體；所
述的捕捉抗體是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆抗體3G2D8H3G9，所述的單克隆抗體
3G2D8H3G9由小鼠雜交瘤細胞系3G2D8H3G9，CGMCCNo.8766產生；
(b)將檢測抗體加樣于(a)獲得的固相載體，從而形成帶有“檢測抗體-空腸彎曲菌-
捕捉抗體”三元復合物的固相載體；所述的檢測抗體是特異性地結合于空腸彎曲菌的單克隆
抗體4C9E1G7H3，所述的單克隆抗體4C9E1G7H3由小鼠雜交瘤細胞系4C9E1G7H3，CGMCC
No.8457產生，且所述的單克隆抗體4C9E1G7H3攜帶一可檢測標記物；和
(c)檢測三元復合物中的可檢測標記物，從而確定待測樣品中空腸彎曲菌的存在與否以
及存在的量。
2.如權利要求1所述的方法，其...

【專利技術屬性】
技術研發人員：萬紹業，方水琴，郭慧琴，楊標，胡永輝，劉箐，
申請(專利權)人：上?；墼派锟萍加邢薰?/a>，
類型：發明
國別省市：上海;31