一種萬代蘭原球莖快速增殖培養基制造技術

本發明專利技術公開了一種萬代蘭原球莖快速增殖培養基。本發明專利技術所述的萬代蘭原球莖快速增殖培養基以MS培養基為基礎培養基，并添加有ZT（玉米素）、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、還原型谷胱甘肽、瓊脂粉、蔗糖，能夠加快萬代蘭增殖速度，提高增殖系數和抑制增殖褐化，降低褐化率。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及蘭花組織培養
，特別是涉及一種萬代蘭原球莖快速增殖培養 基。
技術介紹
萬代蘭，別名萬帶蘭，屬蘭科萬代蘭屬。萬代蘭花朵大，花色鮮艷，尤以藍色花朵最 為突出。可用于盆栽或吊盆觀賞，也可以擺放在客廳、書房或懸掛于窗臺、陽臺。由于花期 長，耐貯運，常用作切花觀賞、制作新娘捧花和貴賓禮儀花束，深受國內外人民喜愛。 近年來，蘭花組織培養技術及試管苗工廠化生產取得了迅猛的發展，但萬代蘭的 褐化問題，特別是原球莖增殖褐化問題嚴重制約萬代蘭的組培增殖，使萬代蘭的生產越來 越難以滿足不斷增長的市場需求。現有的萬代蘭增殖培養基通常在MS培養基的基礎上，添 加15%的椰子汁、lmg/L的6-BA、0. 5mg/L的ΝΑΑ、0· 7%的瓊脂粉、20g/L的蔗糖，并沒有能明 顯抑制萬代蘭原球莖增殖時褐化的手段，導致大量萬代蘭原球莖褐化死亡，嚴重影響增殖 效率，造成大量的浪費。
技術實現思路
基于此，有必要針對萬代蘭原球莖增殖時褐化嚴重而影響增殖效率的問題，提供 一種能抑制褐化的萬代蘭快速增殖培養基，以MS培養基為基礎培養基，并添加有ZT (玉米 素)、2, 4-D (2, 4-二氯苯氧乙酸)、還原型谷胱甘肽、瓊脂粉、蔗糖，能夠加快萬代蘭增殖速 度，提高增殖系數和抑制增殖褐化，降低褐化率。 基于此，有必要針對萬代蘭原球莖增殖時褐化嚴重而影響增殖效率的問題，提供 一種能抑制褐化的萬代蘭快速增殖培養基。 一種萬代蘭快速增殖培養基，以MS培養基為基礎培養基，并添加有ZT (玉米素)、 2, 4-D (2, 4-二氯苯氧乙酸)、還原型谷胱甘肽、瓊脂粉、蔗糖。 -種萬代蘭快速增殖培養基，附加 ZT (玉米素)1~5mg/L，2, 4-D (2, 4-二氯苯氧 乙酸）的濃度為〇. 2~0. 6mg/L，還原型谷胱甘肽的濃度為50~150mg/L，瓊脂粉的濃度為 7~8g/L，鹿糖的濃度為20~30g/L。 一種萬代蘭快速增殖培養基，附加 ZT (玉米素）3mg/L，2, 4-D (2, 4-二氯苯氧乙 酸）的濃度為〇. 4mg/L，還原型谷胱甘肽的濃度為100mg/L，瓊脂粉的濃度為7. 5g/L，蔗糖的 濃度為25g/L。 一種萬代蘭快速增殖培養基，其配制完成后最終pH值為6. 0~7. 0。 -種萬代蘭快速增殖培養基，其配制完成后最終pH值為6. 5。 -種萬代蘭快速增殖培養基，其配制方法包括以下步驟： 步驟S001 :配制MS基礎培養基，并添加蔗糖、2, 4-D (2, 4-二氯苯氧乙酸)、瓊脂粉， 120~121 C尚溫滅囷20~21分鐘，備用； 步驟S002 :用無水乙醇溶解ZT (玉米素)，再用純化水稀釋至所需濃度，還原型谷胱甘 肽用純化水溶解并稀釋至所需濃度，過濾滅菌，備用； 步驟S003 :待高溫滅菌后的MS培養基溫度下降至50~60°C時加入已過濾滅菌的ZT(玉 米素）和還原型谷胱甘肽，混勻，冷卻凝固。 本專利技術的萬代蘭快速增殖培養基，通過玉米素、2, 4-二氯苯氧乙酸、還原型谷胱甘 肽聯合作用于萬代蘭原球莖，能有效抑制萬代蘭原球莖增殖褐化，提高增殖系數。其中，玉 米素是一種天然的細胞分裂素，能促進原球莖細胞快速分裂，且對萬代蘭原球莖無任何副 作用；2, 4-二氯苯氧乙酸是一種人工合成的植物生長調節劑能促進原球莖細胞快速增長， 且因人工合成而價格便宜；還原型谷胱甘肽是一種由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成的三 肽，其含有一個活潑的巰基-SH，具有強還原性，可以阻止酚類物質氧化成褐色的醌類物質 并將醌類物質還原成酚類物質，另外谷胱甘肽能與酚類物質結合，從而減少游離的酚類物 質，抑制褐化；瓊脂作為固體培養平臺，為原球莖提供養分、水分與透氣的效用，并添加蔗 糖，為萬代蘭原球莖增殖生長提供碳源。 本專利技術的萬代蘭快速增殖培養基中，玉米素的濃度優選為1~5mg/L，若其用量過 少，則不能充分促進原球莖細胞分裂，導致增殖效果差，若其用量過多，則會導致細胞增長 過快，容易造成變異；2, 4-二氯苯氧乙酸的濃度優選為0. 2~0. 6mg/L，若其用量過少，會導 致促進細胞生長效率差，細胞生長速度慢，影響增殖效果，若其用量過多，反而會抑細胞生 長，產生負效應；還原型谷胱甘肽的濃度優選為50~150mg/L，若其用量過少，則抑制褐化 效果差，造成大量原球莖褐化死亡，影響增殖系數，若其用量過多，不會有更明顯的抑制褐 化效果，造成浪費，增加成本。 本專利技術的萬代蘭快速增殖培養基中，通過玉米素和2, 4-二氯苯氧乙酸的互作效 應，分別從細胞分裂和細胞生長入手，提高原球莖的增殖率。另外再添加谷胱甘肽抑制褐 化，減少原球莖因褐化死亡而做成的損失，提高增殖效率和減少損失雙管齊下，極大地提高 了萬代蘭的增殖數量。 本專利技術的萬代蘭快速增殖培養基，將pH值控制在6. 5,呈弱酸性環境，有利于原球 莖的增殖，從而提增殖率。 實施例一：本專利技術所述的萬代蘭快速增殖培養基的制備 根據表1所示的MS培養基配方以及表2所示的萬代蘭快速增殖培養基配方，制備本發 明所述的萬代蘭快速增殖培養基。 按配制llOOmL培養基的量，分別稱取MS培養基中的各成分以及2, 4-二氯苯氧乙 酸、瓊脂粉、蔗糖，置于三角瓶中，加入適量純化水，攪拌溶解，定容至l〇〇〇mL，并調節pH值 至6. 5。將三角瓶封口，置于高壓滅菌鍋中，于121 °C滅菌20min，然后置于超凈工作臺中自 然冷卻，得到滅菌培養基母液，備用。 按配制llOOmL培養基的量，分別稱取玉米素和還原型谷胱甘肽，加入適量純化水 溶解，混勻，在超凈工作臺中過濾滅菌，備用。 在超凈工作臺中，待滅菌培養基母液冷卻至60°C后，加入滅菌后的玉米素和還原 型谷胱甘肽溶液，定容至1100ml，混勻，制得llOOmL兜蘭種子萌發培養基。 取所制得的萬代蘭快速增殖培養基，分裝至組織培養瓶中，晾涼，待其凝固后將組 織培養瓶封口，備用。 表1 MS培養基的成分及其用量。 表2萬代蘭快速增殖培養基的成分及其用量。 實施例二：本專利技術所述的萬代蘭快速增殖培養基的測試 根據表1所示的MS培養基配方以及表3所示的萬代蘭快速增殖培養基配方，參照實施 例一所述的培養基制備方法，分別制備各試驗組、對照組的萬代蘭快速增殖培養基。 表3萬代蘭快速增殖培養基。 備注：對照組1為現有技術對照組，配方為常規萬代蘭增殖培養基配方。 選取無褐化、無玻璃化無、無污染且生長健康的萬代蘭初代原球莖，切成厚度約為 2~3cm的小塊，接種于表3所示各試驗組、對照組的培養基中，每瓶接種20塊，然后于光暗 周期為12h光照/12h黑暗、光照強度為ISOOlux、溫度為26±2°C的條件下進行培養。培養 50天后統計原球莖褐化率、增長系數和增殖系數，結果如表4所示。 表4萬代蘭快速增殖培養基測試結果。 備注：1·綜合評分 y = (c*0. 6_a*0. 3/100+b*0. 1)*10 ; 2.增長系數=總增殖量/接種量增殖系數=有效增殖量/接種量。 由表4的試驗結果可知，采用本專利技術所述的萬代蘭快速增殖培養基，能夠顯著提 高萬代蘭原球莖增殖系數，并降低其褐化率，縮短萬代蘭的增值時間。由對照組4和試驗 組5對比可以看出原球莖褐化死亡嚴重影響萬代蘭原球莖的增本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種萬代蘭快速增殖培養基，其特征在于：以MS培養基為基礎培養基，并添加有ZT（玉米素）、2,4?D（2,4?二氯苯氧乙酸）、還原型谷胱甘肽、瓊脂粉、蔗糖。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃慶梅，
申請(專利權)人：廣東粵三胖農業科技有限責任公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44