一種胸腺肽α1脫鹽的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種胸腺肽α1利用反相高效液相色譜脫鹽的方法，主要解決使用離子交換樹脂進(jìn)行脫鹽存在的耗時(shí)長，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量小，工作效率低，重現(xiàn)性比較差，不適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的技術(shù)問題。本發(fā)明專利技術(shù)技術(shù)方案包括如下步驟：1）將胸腺肽α1純化后的溶液調(diào)節(jié)pH為6-8，以0.45μm濾膜過濾后待用，以固定相為十八烷基鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，進(jìn)行梯度洗脫純化，收集目的峰值的肽溶液；將最終的肽溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品肽。本發(fā)明專利技術(shù)用于批量化產(chǎn)業(yè)化胸腺肽α1脫鹽。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及胸腺肽α1脫鹽的方法，尤其是涉及一種批量化產(chǎn)業(yè)化胸腺肽α1脫鹽的方法。
技術(shù)介紹
胸腺肽是胸腺分泌的具有生物活性的多肽的混和物，是一種免疫增強(qiáng)劑。在機(jī)體的免疫系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)中起到重要的調(diào)節(jié)作用。它能夠改善機(jī)體的免疫狀態(tài)，協(xié)調(diào)內(nèi)分泌，提高機(jī)體對(duì)細(xì)菌病毒感染的抵抗力。胸腺肽已經(jīng)用于多種疾病的輔助治療，療效顯著，在飼料中添加亦能起到促生長作用。胸腺肽含有的多種多肽均具有一定的藥效，其中一些已經(jīng)用于疾病的治療。胸腺肽α1是一種治療慢性乙型肝炎和增強(qiáng)免疫系統(tǒng)反應(yīng)性的多肽類藥物。多項(xiàng)體外試驗(yàn)顯示，該肽通過刺激外周血液淋巴細(xì)胞絲裂原來促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的成熟，增加抗原或絲裂原激活后T細(xì)胞分泌的干擾素α、干擾素γ以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同時(shí)增加T細(xì)胞表面淋巴因子受體水平。該肽還可通過對(duì)CD4細(xì)胞的激活，增強(qiáng)異體和自體的人類混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。該肽可能增加前NK細(xì)胞的聚集，而干擾素可使其細(xì)胞毒性增強(qiáng)。體內(nèi)試驗(yàn)顯示，該肽可以提高經(jīng)刀豆蛋白A激活后小鼠淋巴細(xì)胞白介素2受體的表達(dá)水平，同時(shí)提高白介素2的分泌水平。多肽在合成、裂解及純化的過程中，會(huì)使用大量的TFA(三氟乙酸)、醋酸、等，從而引入了大量對(duì)人體有害的酸根離子，特別是TFA酸根，在純化后干燥前必須去除這些有害的酸根離子。目前使用SephadexG25(葡聚糖凝膠G25)柱或者使用離子交換樹脂(專利號(hào)200910304817.7)進(jìn)行脫鹽的方法，不但耗時(shí)長，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量小，工作效率低，重現(xiàn)性比較差，不適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一條適于大規(guī)模工業(yè)化胸腺肽α1脫鹽的方法，主要解決使用離子交換樹脂進(jìn)行脫鹽存在的耗時(shí)長，前處理比較麻煩，而且一次樣品處理量小，工作效率低，重現(xiàn)性比較差，不適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的技術(shù)問題。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下：一種純化胸腺肽α1的方法，包括如下步驟：1）將胸腺肽α1溶液以0.45μm濾膜過濾，調(diào)節(jié)pH為6-8；2）固定相為十八烷基硅膠鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，采用HPLC法脫鹽，收集目的峰值的肽溶液；3）將最終收集的肽溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品肽。優(yōu)選的方案是：所述B相的甲醇溶液為色譜純。所述色譜甲醇溶液的濃度為20-60%，檢測(cè)波長為220nm。優(yōu)選的方案是：所述的A相為純水。本專利技術(shù)的有益技術(shù)效果：本專利技術(shù)提供了一種胸腺肽α1脫鹽的工藝，采用HPLC法去除胸腺肽α1中的有害酸根離子。利用色譜原理對(duì)酸根離子不能吸附而能吸附肽類物質(zhì)的特點(diǎn)進(jìn)行離子交換，從而達(dá)到有效去除酸根離子的目的。使用HPLC法脫鹽，生產(chǎn)成本低，工藝簡(jiǎn)單，環(huán)境污染低，便于工業(yè)化實(shí)施。具體實(shí)施方式實(shí)施例11.樣品處理：稱取5g胸腺肽α1溶解后，溶液調(diào)節(jié)pH值為7，用孔徑為0.45um濾膜過濾后收集濾液。2.脫鹽條件：色譜柱：以十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為：5cm×25cm.流動(dòng)相：A相：,水溶液；B相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。檢測(cè)波長：220nm。濃度梯度：B%：20-60%，30-50min。過程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的峰，將收集好的肽溶液放置收集瓶中。3．將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有肽溶液，進(jìn)行減壓濃縮至1g/50ml，濃縮溫度不超過37℃,然后冷凍干燥得胸腺肽α1樣品，收率88.2%，含鹽0.44%。實(shí)施例21.樣品處理：稱取40g胸腺肽α1溶解后，溶液調(diào)節(jié)pH值為8，用孔徑為0.45um濾膜過濾后收集濾液。2.脫鹽條件：色譜柱：以十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為：10cm×25cm.流動(dòng)相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：180-200ml/min。檢測(cè)波長：220nm。濃度梯度：B%：20-60%，30-50min。過程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的峰，將收集好的肽溶液放置收集瓶中。3．將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有肽溶液，進(jìn)行減壓濃縮至1g/50ml，濃縮溫度不超過37℃,然后冷凍干燥得胸腺肽α1樣品，收率90.4%，含鹽0.36%。實(shí)施例31.樣品處理：定量胸腺肽α1純化后溶液含量為5.5g，溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5，用孔徑為0.45um濾膜過濾后收集濾液。2.脫鹽條件：色譜柱：以十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為：5cm×25cm.流動(dòng)相：A相：水溶液；B相：甲醇溶液。流速：60-80ml/min。檢測(cè)波長：220nm。濃度梯度：B%：20-60%，30-50min。過程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，。線性梯度洗脫，收集目的峰，將收集好的肽溶液放置收集瓶中。3．將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有肽溶液，進(jìn)行減壓濃縮至1g/50ml，濃縮溫度不超過37℃,然后冷凍干燥得胸腺肽α1樣品，收率89.3%，含鹽0.26%。實(shí)施例41.樣品處理：定量胸腺肽α1純化后溶液含量為42g，溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5，用孔徑為0.45um濾膜過濾后收集濾液。2.脫鹽條件：色譜柱：以十八烷基硅膠鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為：10cm×25cm.流動(dòng)相：A相：純水；B相：色譜純甲醇溶液。流速：180-200ml/min。檢測(cè)波長：220nm。濃度梯度：B%：20-60%，30-50min。過程：將色譜柱用質(zhì)量百分濃度5%的B相平衡好后上樣，線性梯度洗脫，收集目的峰，將收集好的肽溶液放置收集瓶中。3．將轉(zhuǎn)鹽后所得的所有肽溶液，進(jìn)行減壓濃縮至1g/50ml，濃縮溫度不超過37℃,然后冷凍干燥得胸腺肽α1樣品，收率91.2%，含鹽0.23%。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是包括如下步驟：1）將胸腺肽α1溶液以0.45μm濾膜過濾，調(diào)節(jié)pH為6?8；2）固定相為十八烷基硅膠鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，采用HPLC法脫鹽，收集目的峰值的肽溶液；3）將最終收集的肽溶液減壓旋蒸濃縮冷凍干燥，得粉末狀成品肽。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種胸腺肽α1脫鹽的方法，其特征是包括如下步驟：
1）將胸腺肽α1溶液以0.45μm濾膜過濾，調(diào)節(jié)pH為6-8；
2）固定相為十八烷基硅膠鍵合硅膠的反相硅膠柱，水溶液為A相，甲醇溶液為B相，采用HPLC法脫鹽，收集目的峰值的肽溶液；
3）將最終收集的肽溶液減壓旋...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐紅巖，秦敬國，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：吉爾生化上海有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：上海;31