一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法技術

本發明專利技術公開了一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法，包括：（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量15-75倍的鹽酸，在35-95℃浸泡3-15min破壁，過濾，取藥渣；（2）加入雨生紅球藻量15-75倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在15-65℃提取2-4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在3-15℃皂化5-15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，以二氯甲烷-乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。本發明專利技術制備的蝦青素得率高、純度高、成本低。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及蝦青素提取領域，特別涉及一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法。
技術介紹
蝦青素的來源主要有兩種，一種是化學合成，另一種是生物提取，生物提取的原料主要有雨生紅球藻、蝦蟹的下腳料、紅發夫酵母發酵物等。生物提取的方法很多，如超臨界CO2萃取法、化學溶劑提取法等，通過生物提取得到的粗提物，再進行皂化、分離純化。目前分離純化的方法主要為柱層析方法，柱層析的方法中根據固定相的不同，分為正相柱層析法與反相柱層析法，正相柱層析主要以硅膠作為固定相的填料，采用二氯甲烷-正己烷作為流動相，進行柱層析；反相柱層析主要以鍵合硅膠C18作為填料，采用甲醇-水作為流動相，進行柱層析。經過上述方法提取可得到純度約為80-90%的蝦青素。但是，由于現有提取方法的破壁、提取和分離工藝的限制，其制備得到的蝦青素的得率低（＜1%）、純度低（≤90%）、成本高。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題在于，提供一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法，其制備的蝦青素得率高、純度高、成本低。為了解決上述技術問題，本專利技術提供了一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法，包括：（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量15-75倍的鹽酸，在35-95℃浸泡3-15min破壁，過濾，取藥渣；（2）加入雨生紅球藻量15-75倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在15-65℃提取2-4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在3-15℃皂化5-15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。作為上述方案的改進，所述方法包括：（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量45-55倍的鹽酸，在65-75℃浸泡8-12min破壁，過濾，取藥渣；（2）加入雨生紅球藻量45-55倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在35-45℃提取2-4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在8-12℃皂化5-15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。作為上述方案的改進，所述方法包括：（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量50倍的鹽酸，在70℃浸泡10min破壁，過濾，取藥渣；（2）加入雨生紅球藻量50倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在40℃提取3次后，過濾，合并濾液，濾液加入4%KOH醇溶液，在10℃皂化10min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到92:8，分離得到蝦青素成品。作為上述方案的改進，在步驟（2）中，所述二氯甲烷、乙醇的混合液的二氯甲烷與乙醇的比例為1-3:0.5-1。作為上述方案的改進，在步驟（2）中，所述二氯甲烷、乙醇的混合液的二氯甲烷與乙醇的比例為2:1。作為上述方案的改進，在步驟（3）中，梯度濃度由100:0到92:8。作為上述方案的改進，所述鹽酸選用濃度為4mol/L的鹽酸。作為上述方案的改進，所述蝦青素成品的純度≥98.5%。實施本專利技術具有如下有益效果：本專利技術提供了（1）高效的破壁方法與工藝參數：加入雨生紅球藻量50倍的4N鹽酸，在70℃浸泡10min進行破壁；（2）高效的提取方法與工藝參數：加入雨生紅球藻量50倍的二氯甲烷-乙醇的混合液（二氯甲烷：乙醇=2:1），在40℃提取3次；（3）高效的分離方法與工藝參數：以硅膠作為固定相，二氯甲烷-乙醇（100:0→92:8）作為流動相，進行梯度洗脫。通過本方法從雨生紅球藻中制備的蝦青素得率高，得率可以達到1.8%，純度高，純度可達到98.5%，遠遠超過現有文獻報道的方法制備的得率與純度。而且，本專利技術提取分離方法簡單，反應條件要求少，成本低，可大規模推廣使用。具體實施方式為使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本專利技術作進一步地詳細描述。本專利技術提供一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法，包括：（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量15-75倍的鹽酸，在35-95℃浸泡3-15min破壁，過濾，取藥渣。優選的，取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量45-55倍的鹽酸，在65-75℃浸泡8-12min破壁，過濾，取藥渣。所述鹽酸選用濃度為3-5mol/L的鹽酸。更佳的，取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量50倍的鹽酸，在70℃浸泡10min破壁，過濾，取藥渣。所述鹽酸選用濃度為4mol/L的鹽酸。需要說明的是，加入雨生紅球藻量15-75倍的鹽酸的含義是：加入鹽酸，且加入鹽酸的用量是加入雨生紅球藻的15-75倍。還需要說明的是，雨生紅球藻又被叫做湖生紅球藻或湖生血球藻，是一種普遍存在的綠藻，屬于團藻目，紅球藻科。（2）加入雨生紅球藻量15-75倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在15-65℃提取2-4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在3-15℃皂化5-15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干。優選的，加入雨生紅球藻量45-55倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，所述二氯甲烷、乙醇的混合液的二氯甲烷與乙醇的比例為1-3:0.5-1，在35-45℃提取2-4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在8-12℃皂化5-15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干。更佳的，加入雨生紅球藻量50倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，所述二氯甲烷、乙醇的混合液的二氯甲烷與乙醇的比例為2:1，在40℃提取3次后，過濾，合并濾液，濾液加入4%KOH醇溶液，在10℃皂化10min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干。（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。優選的，用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:8，分離得到蝦青素成品。更佳的，在步驟（3）中，梯度濃度由100:0到92:8。通過本方法從雨生紅球藻中制備的蝦青素得率高，得率可以達到1.8%，純度高，純度可達到98.5%。下面以具體實施例進一步闡述本專利技術實施例1（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量15倍、濃度為4mol/L的鹽酸，在35℃浸泡3min破壁，過濾，取藥渣；（2）加入雨生紅球藻量15倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，二氯甲烷：乙醇=1:1，在15℃提取2次后，過濾，合并濾液，濾液加入4%KOH醇溶液，在3℃皂化5min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法，其特征在于，包括：（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量15?75倍的鹽酸，在35?95℃浸泡3?15min破壁，過濾，取藥渣；（2）加入雨生紅球藻量15?75倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在15?65℃提取2?4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在3?15℃皂化5?15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。

【技術特征摘要】
1.一種從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法，其特征在于，包括：
（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量15-75倍的鹽酸，在35-95℃浸泡3-15min破壁，過濾，取藥渣；
（2）加入雨生紅球藻量15-75倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在15-65℃提取2-4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在3-15℃皂化5-15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；
（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。
2.如權利要求1所述的從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的方法，其特征在于，包括：
（1）取雨生紅球藻，加入雨生紅球藻量45-55倍的鹽酸，在65-75℃浸泡8-12min破壁，過濾，取藥渣；
（2）加入雨生紅球藻量45-55倍的二氯甲烷、乙醇的混合液，在35-45℃提取2-4次后，過濾，合并濾液，濾液加入KOH醇溶液，在8-12℃皂化5-15min后，用鹽酸調PH值至中性，濃縮至干；
（3）用二氯甲烷萃取蝦青素，以硅膠作為固定相，二氯甲烷、乙醇作為流動相，進行梯度洗脫，梯度濃度由100:0到90:10，分離得到蝦青素成品。
3.如權利要求1所述的從雨生紅球藻中提取分離蝦青素的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊蘭蘭，
申請(專利權)人：佛山市普達美生物醫藥科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44