豬偽狂犬病病毒疫苗組合物及其制備方法和應用技術

本發明專利技術提供了一種豬偽狂犬病病毒疫苗組合物，該豬偽狂犬病病毒疫苗組合物含豬偽狂犬病病毒亞單位抗原，或含有重組新城疫病毒-豬偽狂犬病病毒載體。本發明專利技術還提供了該疫苗組合物的制備方法和應用。該疫苗組合物能有效預防豬偽狂犬病病毒相關疾病和由豬偽狂犬病病毒造成的感染的相關疾病。本發明專利技術豬偽狂犬病毒疫苗組合物中免疫原性抗原的組合可誘導產生協同的免疫效果，不僅免疫效果良好，還進一步降低了免疫使用量，降低了免疫成本。

【技術實現步驟摘要】
本申請為專利申請201410519314.2的分案申請，原案申請日為2014年9月30日，專利技術名稱為豬偽狂犬病病毒疫苗組合物及其制備方法和應用。
本專利技術屬于獸用生物制品領域，具體地涉及豬偽狂犬病毒的疫苗組合物及其制備方法，以及將所述免疫抗原用于制備預防和/或治療與豬偽狂犬病毒相關疾病和由豬偽狂犬病毒導致的感染的組合物的應用。
技術介紹
偽狂犬病，又稱Aujeszky氏病，是由皰疹病毒科(Herpesviridae)α亞科中的豬皰疹病毒Ⅰ型(Suidherpesvirus1strain)所引起的豬、牛、羊等多種家畜、家禽和野生動物的一種以發熱、奇癢(除豬外)及腦脊髓炎為主癥的急性傳染病。豬的偽狂犬病在我國廣泛存在，危害嚴重，是制約規模化豬場生產的主要疫病之一。它能引起妊娠母豬流產、死胎或木乃伊胎和仔豬出現神經癥狀、麻痹，死亡率高。PRV具有較強的泛嗜性、神經嗜性及潛伏感染特性，在外周神經系統可以長期潛伏感染，當潛伏病毒被激活變成有感染力的病毒，被潛伏感染的宿主就會發病。豬PRV只有一個血清型，通常認為毒株的交叉保護力很強，但目前仍存在仔豬注射商品化疫苗后發生典型豬偽狂犬病，例如長時間體溫升高，精神沉郁，食欲減退，出現呼吸道和/或神經癥狀。突出表現為任何年齡的豬都會感染，可在豬群水平傳播，潛伏期短(1～2天)，發病率在10％～100％之間，發病豬死亡率在10％～100％之間(仔豬死亡率可高達100％)，感染后可引起豬只高熱(40～42℃，持續3日以上)，呼吸困難，腹瀉，喘，咳嗽，打噴嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，側臥不起，角弓反張，泳狀劃水，最后衰竭而死，并可引起種公豬精液質量下降，懷孕母豬流產(高達35％)，早產，死胎，弱仔(弱仔14日齡前全部死亡)等繁殖障礙癥狀。現有技術的疫苗免疫豬只后不能完全抵抗野毒攻擊，依然會出現高熱，精神沉郁，食欲下降或廢絕等癥狀，感染率超過80％，發病率超過30％，死亡率在10％～20％之間。現有技術還沒有疫苗能夠解決針對豬偽狂犬變異株引起的偽狂犬病。本專利技術首次通過將豬偽狂犬病毒gB蛋白與gD蛋白組合使用，針對豬偽狂犬變異株引起的偽狂犬病有著較好的保護作用，，通過免疫效力比較試驗，意外發現，兩種蛋白組合使用，協同刺激機體免疫反應，有效降低了免疫劑量，大大降低了免疫成本。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服現有技術缺陷，提供一種預防和/或治療豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物，該疫苗組合物包含兩種豬偽狂犬病毒免疫保護性抗原和佐劑。本專利技術提供的預防和/或治療豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物包含的兩種豬偽狂犬病毒免疫抗原為gB蛋白與gD蛋白。本專利技術的第一方面是一種豬偽狂犬病病毒疫苗組合物，所述的疫苗組合物包括免疫量的gB蛋白、gD蛋白和佐劑。作為本專利技術的一種優選實施方式，在本專利技術的疫苗組合物中，所述的gB蛋白蛋白序列為SEQIDNO.3；所述的gD蛋白蛋白序列為SEQIDNO.4。優選地，本專利技術提供的預防和/或治療豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物包含的豬偽狂犬病毒免疫抗原gB蛋白氨基酸序列如SEQIDNO：3所示。優選地，本專利技術提供的預防和/或治療豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物包含的豬偽狂犬病毒免疫抗原gB蛋白核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。優選地，本專利技術提供的預防和/或治療豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物包含的豬偽狂犬病毒免疫抗原gD蛋白氨基酸序列如SEQIDNO：4所示。優選地，本專利技術提供的預防和/或治療豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物包含的豬偽狂犬病毒免疫抗原gD蛋白核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。術語“gB蛋白”又稱“gB糖蛋白”，術語“gD蛋白”又稱“gD糖蛋白”，是豬偽狂犬病病毒進行感染必需的結構蛋白，是成熟的病毒粒子囊膜表面的主要糖蛋白之一，也稱為“gp50蛋白”。本專利技術提供的預防和/或治療豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物包含的豬偽狂犬病毒免疫抗原gB蛋白、gD蛋白還可以是與其功能衍生物基本相同的氨基酸序列的多肽。術語“佐劑”指加入到本專利技術的組合物中以增加組合物的免疫原性的物質。已知的佐劑包括，但不限于：油佐劑，水溶性佐劑，鋁鹽佐劑，細胞因子佐劑。本專利技術所用術語“油佐劑”又稱“油性佐劑”或“油乳佐劑”，是由包括植物油、動物油、礦物油中的一種或幾種組成，用于延緩免疫原在機體內的存留時間，使之持續緩慢釋放，增強巨噬細胞的吞噬與殺菌能力。本專利技術所用術語“水溶性佐劑”又稱“水基佐劑”或“水佐劑”，是一種聚合物水溶性分散體，用于提高水溶性疫苗的功效和安全性，可以由高分子量聚丙烯酸類合成聚合物組成。本專利技術所用術語“鋁鹽佐劑”，又稱“鋁膠佐劑”或“鋁佐劑”，包括氫氧化鋁佐劑和磷酸鋁佐劑，其主要功能為緩釋，但同時具有對免疫細胞的激活作用。將抗原和氫氧化鋁或磷酸鋁混合注射，能夠使抗原保存在注射部位，具有抗原緩釋和非特異免疫刺激作用。本專利技術所用術語“細胞因子佐劑”，包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、INF-γ、GM-CSF、TNF-α、TNF-β、TCA-3等，又稱“細胞因子”或“細胞素”，是活體宿主細胞分泌的通過擴散、細胞間接觸或血液循環到達宿主其他細胞，在體液中以極低濃度發揮作用的一類非免疫球蛋白、局部天然蛋白或糖蛋白，也是一類由機體活化的免疫細胞和某些非免疫細胞產生、分泌，能調節細胞生長、分化，與造血、炎癥反應、免疫應答反應和創傷愈合等密切相關的高活性多功能小分子蛋白的統稱，可以刺激或抑制免疫功能，在免疫應答中促進細胞發育分化、調節細胞生理功能和細胞間信息傳遞，在免疫系統中起著非常重要的調控作用。本專利技術實施例中使用了油佐劑中的一種206佐劑。適用于本專利技術的組合物的佐劑的量優選地是有效量。所述“有效量”是指佐劑在同本專利技術抗原聯合施用時在宿主中發揮它們的免疫學作用而言必須或足夠的而不導致過度副作用所必需量。待施用的佐劑的精確的量將根據因素如所用的成分和治療的疾病的類型，待治療的動物的類型和年齡，施用的方式，以及組合物中的其它成分而變化。在一個實施方式中，本專利技術提供一種治療和/或預防豬偽狂犬病毒感染的疫苗組合物，由豬偽狂犬病毒免疫抗原gB蛋白、gD蛋白和206佐劑組成。作為本專利技術的一種優選實施方式，在本專利技術的疫苗組合物中，所本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種豬偽狂犬病病毒疫苗組合物，其特征在于，所述的疫苗組合物包括免疫量的gB蛋白、gD蛋白和佐劑。

【技術特征摘要】
1.一種豬偽狂犬病病毒疫苗組合物，其特征在于，所述的疫苗組
合物包括免疫量的gB蛋白、gD蛋白和佐劑。
2.根據權利要求1所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的gB蛋
白蛋白序列為SEQIDNO.3；所述的gD蛋白蛋白序列為SEQIDNO.4。
3.根據權利要求1所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的gB蛋
白含量為25-100μg/ml；gD蛋白含量為25-100μg/ml。
4.一種豬偽狂犬病病毒疫苗組合物，其特征在于，所述的疫苗組
合物包括重組新城疫病毒-豬偽狂犬病病毒載體以及佐劑。
5.根據權利要求4所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的重組
新城疫病毒-豬偽狂犬病病毒載體包含一種或多種異源多核苷酸，其編碼
一種或多種豬偽狂犬病病毒抗原、多肽或其變體，其中，所述的豬偽狂
犬病病毒抗原包括gB蛋白、gD蛋白。
6.根據權利要求5所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的豬偽
狂犬病病毒抗原gB蛋白為序列SEQIDNO.3編碼的豬偽狂犬病病毒gB
蛋白，述的豬偽狂犬病病毒抗原gD蛋白為序列SEQIDNO.4編碼的gD
蛋白...

【專利技術屬性】
技術研發人員：田克恭，孫進忠，張超林，張許科，
申請(專利權)人：普萊柯生物工程股份有限公司，
類型：發明
國別省市：河南;41