巨大戟醇提取物的分離純化方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及巨大戟醇提取物的分離純化方法，屬于中藥提取分離領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是提供巨大戟醇提取物的分離純化方法。本發(fā)明專利技術(shù)巨大戟醇提取物的分離純化方法，包括如下步驟：a、將巨大戟醇提取物加堿水解后，加酸中和后，濃縮得到膏狀物；b、將步驟a得到的膏狀物進(jìn)行硅膠柱層析分離純化；c、將步驟b收集得到的巨大戟醇-乙酸乙酯溶液，減壓濃縮，靜置析出，過濾得巨大戟醇。本發(fā)明專利技術(shù)操作簡單，避免了多步萃取操作，收率得到提高，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了規(guī)模化連續(xù)生產(chǎn)。并且層析柱B中的硅膠可以重復(fù)使用2次以上，一定程度上減少了硅膠使用量和試劑消耗量，可大幅降低生產(chǎn)成本。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及，屬于中藥提取分離領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
巨大戟醇（ingenol)是一種四環(huán)二聰類天然產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)式如式I所示，來源于 大戟科大戟屬植物，W其為母核的衍生物表現(xiàn)出較好的抗癌、抗HIV等生物活性，其中W巨 大戟醇-3-當(dāng)歸酸醋為分子實(shí)體的新藥Picato已于2012年被抑A批準(zhǔn)上市，用于光化性 角化病的治療。 巨大戟醇結(jié)構(gòu)新奇復(fù)雜，在過去的30多年里，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和活性雖然引起 了眾多化學(xué)家的關(guān)注，也有相關(guān)全合成的報(bào)道，但合成路線大多步驟繁瑣，得率低，難 W適應(yīng)日益增長的市場需求；LEOF*ha;rma公司與ScrippsResearchInsti1:ute合作 ，由（+)-3-曹帰通過14步最終合成得到巨大戟醇，總收率達(dá)到 1.2%，但其合成路線仍然處于實(shí)驗(yàn)室階段，且合成過程中需要用到劇毒試劑四氧化餓和二 氧化砸，該工藝用于放大生產(chǎn)還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。 目前市場上，巨大戟醇仍然主要來源于大戟科植物的提取分離。 中國專利CN102126941A對提取浸膏采用萃取、反萃取、堿水解、調(diào)抑、減壓濃縮， 然后對濃縮后的浸膏采用硅膠柱層析，結(jié)合重結(jié)晶手段純化得到高純度的巨大戟醇，該方 法前期有多次萃取操作，耗時(shí)長，轉(zhuǎn)移率低，損失較大，且用到價(jià)格昂貴的有毒性的萃取試 劑己臘，成本高，不利于環(huán)保，也不適合規(guī)模化生產(chǎn)，而且硅膠柱層析采用了石油離/己酸 己醋（1:1)洗脫除雜，然后加入己酸己醋洗脫，在除雜的過程中由于己酸己醋的加入會(huì)將 部分巨大戟醇化合物帶出，降低產(chǎn)率。 專利CN103694096A對提取浸膏同樣采用了萃取操作，萃取物濃縮后先后經(jīng)過娃 膠柱層析和制備液相純化，最終得到高純度的巨大戟醇單體，由于千金子藥材中巨大戟醇 主要W其醋類衍生物形式存在，該純化工藝未采用水解步驟，因而最終產(chǎn)品收率極低，難W 滿足規(guī)模化生產(chǎn)要求。 專利WO2013050365Al中對千金子藥材粉末直接加堿攬拌水解，中和后再依次用 石油離和四氨巧喃萃取，然后采用硅膠柱層析純化得到高純度的巨大戟醇，該方法雖簡化 了純化步驟，但因其用藥材粉末直接加堿攬拌水解，無法保證藥材里的巨大戟醇衍生物都 能浸提出來并水解完全。 上述專利均采用了多步萃取操作，因千金子中富含油類成分，萃取時(shí)容易乳化，需 大量溶劑多次萃取才能將目標(biāo)成分萃取完全，萃取效率低，導(dǎo)致提取率低；萃取所用萃取劑 石油離沸點(diǎn)低，減壓濃縮回收率低，也在一定程度上增加了生產(chǎn)成本；而且現(xiàn)有技術(shù)中柱層 析大多采用石油離和己酸己醋混合洗脫劑洗脫，雖然能夠有效的除去極性小的雜質(zhì)，由于 混合洗脫劑中己酸己醋的加入，目標(biāo)化合物巨大戟醇也會(huì)隨著雜質(zhì)被帶出，降低了生產(chǎn)產(chǎn) 率。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是提供。 本專利技術(shù)的技術(shù)方案：，包括如下步驟： a、將巨大戟醇提取物加堿水解后，加酸中和，然后濃縮得到膏狀物；K將步驟a得到的膏狀物在硅膠柱層析裝置中進(jìn)行分離純化，所述硅膠柱層析裝 置包括層析柱A和層析柱B，層析柱A和層析柱B之間采用H通閥進(jìn)行連接；硅膠柱層析具 體操作如下：調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，在層析柱A中上樣，然后，層析 柱A采用石油離洗脫除雜，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接，向?qū)游鲋鵄中加入己 酸己醋洗脫，收集巨大戟醇-己酸己醋混合液；C、將步驟b得到的巨大戟醇-己酸己醋混合液減壓濃縮后，靜置析出，過濾得到巨 大戟醇。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟a中所述巨大戟醇提取物為大戟科大戟屬植物藥材采用提取 溶劑提取得到；所述提取溶劑為甲醇、己醇、丙麗、己離或氯仿。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟a中所述巨大戟醇提取物的制備方法如下；取大戟科大戟屬 植物藥材，粉碎或切段，按料液比1:5~20w/v加入提取溶劑進(jìn)行回流提取，提取1~4次， 每次0. 5~2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮得巨大戟醇提取物。其中，w/v的單位為kg/L。 進(jìn)一步地，優(yōu)選所述大戟科大戟屬植物為甘遂、乳漿大戟、千金子或南歐大戟。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟a所述堿水解、酸中和的操作如下：取巨大戟醇提取物，加入 甲醇或無水己醇稀釋，甲醇或無水己醇的體積為巨大戟醇提取物體積的0. 5~2倍，加堿水 解0. 5~24小時(shí)，每升混合溶液中堿的含量為5~40g，水解完畢，加酸調(diào)節(jié)抑至7得到水 解液，然后將水解液濃縮得膏狀物。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟a中所述堿為氨氧化鋼、氨氧化鐘、甲醇鋼或己醇鋼；所述酸 為磯酸、鹽酸、醋酸或甲酸。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟b中所述硅膠柱層析操作為： 調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，裝填層析柱A和層析柱B，層析柱A 采用石油離洗脫平衡至無氣泡，層析柱B采用己酸己醋洗脫平衡至無氣泡，然后上樣，樣品 裝入層析柱A，然后采用石油離洗脫；洗脫完畢，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接， 向?qū)游鲋鵄中加入己酸己醋洗脫，得到巨大戟醇-己酸己醋混合液。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟b中所述硅膠柱層析操作為：調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，層析柱A先裝填0~1/2柱體積的 層析用硅膠，并用石油離洗脫平衡至無氣泡，層析柱B裝填1個(gè)柱體積層析用硅膠并用己酸 己醋洗脫平衡至無氣泡，另將拌樣硅膠與步驟a得到的膏狀物按質(zhì)量比1~1. 5:1混合拌 勻，得到樣品I，取樣品I裝入A柱，上樣量為層析柱A柱體積的1/2~1，用2~6個(gè)柱體 積的石油離洗脫；然后，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接，用2~6個(gè)柱體積的己酸 己醋洗脫，收集巨大戟醇-己酸己醋混合液； 或調(diào)節(jié)H通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，層析柱A裝填1個(gè)柱體積層析用 硅膠并用石油離洗脫平衡至無氣泡；層析柱B裝填1個(gè)柱體積層析用硅膠并用己酸己醋洗 脫平衡至無氣泡，另將步驟a得到的膏狀物用石油離稀釋得到樣品II，石油離的體積為膏 狀物體積的0. 5~3倍，將1/2~1個(gè)柱體積的樣品II上樣至層析柱A，用2~6個(gè)柱體積 的石油離洗脫；然后，調(diào)節(jié)H通閥，使層析柱A和層析柱B連接，用2~6個(gè)柱體積的己酸己 醋洗脫，收集巨大戟醇-己酸己醋混合液。硅膠柱層析中，優(yōu)選最終收集合并巨大戟醇純度> 80%的巨大戟醇-己酸己醋混 合液。純度是通過高效液相（HHX)檢測的。 進(jìn)一步地，為了達(dá)到更好的柱層析效果，優(yōu)選步驟b中各洗脫劑的洗脫速度為每 小時(shí)0. 5~5個(gè)柱體積。 進(jìn)一步地，優(yōu)選所述步驟b完成后，拆出層析柱A中硅膠，保留層析柱B中硅膠，重 新裝填層析柱A，然后取新的一批步驟a得到的膏狀物按照步驟b的操作進(jìn)行硅膠柱層析分 離純化，進(jìn)行連續(xù)操作。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟b中所述硅膠柱層析裝置中層析柱A連接泉；更進(jìn)一步地，優(yōu) 選濕法上樣、洗脫溶劑石油離或己酸己醋采用泉送加入。 硅膠柱層析濕法上樣時(shí)可通過泉送加入。濕法上樣即將膏狀物加石油離稀釋后上 樣，即樣品II。 進(jìn)一步地，優(yōu)選步驟C中所述靜置析出，優(yōu)選在-20~5C下靜置0~2地。 本專利技術(shù)所具有的有益效果如下： 1、操作步驟簡單，采用本專利技術(shù)方法石油離洗脫除雜，然后采用己酸己醋洗脫得到 目標(biāo)化合物，不僅可W省去多步萃取操作，并且最終的巨大戟醇的純度仍能將純度提高到 99. 9%，由于萃取步驟的省去，操作更為簡單、產(chǎn)品損失少，收率得到提高。 2、水解時(shí)間大為縮短，在0. 5-24小時(shí)內(nèi)，可大幅縮短產(chǎn)品的生產(chǎn)周期。 3、本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
巨大戟醇提取物的分離純化方法，其特征在于：包括如下步驟：a、將巨大戟醇提取物加堿水解后，加酸中和，然后濃縮得到膏狀物；b、將步驟a得到的膏狀物在硅膠柱層析裝置中進(jìn)行分離純化，所述硅膠柱層析裝置包括層析柱A和層析柱B，層析柱A和層析柱B之間采用三通閥進(jìn)行連接；硅膠柱層析具體操作如下：調(diào)節(jié)三通閥，將層析柱A和層析柱B斷開連接，在層析柱A中上樣，然后，層析柱A采用石油醚洗脫除雜，調(diào)節(jié)三通閥，使層析柱A和層析柱B連接，向?qū)游鲋鵄中加入乙酸乙酯洗脫，收集巨大戟醇?乙酸乙酯混合液；c、將步驟b得到的巨大戟醇?乙酸乙酯混合液減壓濃縮后，靜置析出，過濾得到巨大戟醇。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郭建龍，鄺彬，謝海峰，胡云嶺，冉波，徐雷，
申請(專利權(quán))人：成都普瑞法科技開發(fā)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：四川;51