本發明專利技術公開了一種檢測牛奶中三聚氰胺(MEL)的化學發光酶聯免疫(CLEIA)試劑盒，其特征在于，所述化學發光板的各孔包被有抗三聚氰胺抗體；所述試劑包括：酶標三聚氰胺抗原濃縮液，酶標三聚氰胺抗原稀釋液，三聚氰胺系列標準品溶液，化學發光底物A、B液，濃縮洗滌液，濃縮復溶液；本發明專利技術的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒具有高靈敏度、特異性好、簡便快速、準確度高的特點，與傳統的ELISA法比較，操作時間大幅度減少，可用作牛奶中三聚氰胺的檢測。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術設及一種檢測牛奶中Ξ聚氯胺的化學發光免疫試劑盒，用于檢測牛奶中Ξ 聚氯胺的含量。屬于免疫學檢測領域。
技術介紹
Ξ聚氯胺（Melamine),化學式CsHeNe，IUPAC命名為：1，3, 5-Ξ嗦-2, 4, 6-Ξ胺，是 一種Ξ嗦類含氮雜環有機化合物，是一種低毒、無味的純白色單斜棱晶體，形似蛋白粉，廣 泛應用于塑料、染料、化肥的生產和紡織工業，含氮量高達66%，且慢性毒性不容易發現，故 經常被人為地添加到食品和動物飼料中W提高N含量，從而造成蛋白質水平虛高。Ξ聚氯 胺本身低毒，但其在酸性或堿性條件下，生成Ξ聚氯酸，Ξ聚氯胺和其共存物Ξ聚氯酸通過 氨鍵在腎臟內形成不溶性結晶，動物實驗結果表明，Ξ聚氯胺的攝入可能會導致繁殖障礙、 膀脫癌、慢性腎炎、腎結石，甚至是膀脫癌，長期攝入高濃度的Ξ聚氯胺，會導致腎衰竭甚至 死亡，特別是對兒童和青少年危害甚大。 聯合國負責制定食品安全標準的國際食品法典委員會為牛奶中Ξ聚氯胺含量設 定了新標準，每公斤液態嬰兒牛奶中Ξ聚氯胺含量不得超過0. 15毫克。我國禁止人為添加 Ξ聚氯胺到食品中，嬰兒配方食品中Ξ聚氯胺的限量值為Img/kg，其他食品中Ξ聚氯胺的 限量值為2. 5mg/kg，高于上述限量的食品一律不得銷售。 現檢測Ξ聚氯胺的方法主要有：高效液相色譜（HPLC)、液相色譜-質譜/質譜法 (LC-MS/MS法)和氣相色譜-質譜聯用法。 高效液相色譜（HPLC)是最常用的檢測方法，具有高效、快速、靈敏度高、假陽性低 等特點，定量限為2mg/kg。但該方法前處理復雜，所需儀器昂貴，操作繁瑣，需要專業技術人 員進行操作，不適合Ξ聚氯胺的快速檢測。 液相色譜-質譜/質譜法（LC-MS/MS法)，該方法靈敏度高、假陽性率低等特點，樣 品不需要衍生化處理，可對尿液、血液、肝臟、毛發和眼球樣品進行檢測，定量限為0.Olmg/ kg。但存在檢測儀器造價昂貴，操作步驟繁瑣，對操作人員專業素養要求高等問題，難W滿 足現場快速檢測的要求。 氣相色譜-質譜/質譜法（GC-MS/MS法)，靈敏度很高，假陽性率低，定量限為 0.05mg/kg。該方法的主要缺點是樣品需要衍生化運樣復雜的前期處理。雖然經過衍生化 處理的樣品能在質譜中給出更多的結構信息，但是衍生化會產生多個不同的產物并導致樣 品的部分丟失，造成實驗結果的偏差。而且檢測儀器造價昂貴，操作步驟繁瑣，樣本前處理 復雜、耗時，需要專業檢測技術人員進行操作等缺點，無法滿足現場快檢要求。
技術實現思路
本專利技術的目的在于，針對現有技術不足，提供一種檢測牛奶中Ξ聚氯胺的化學發 光免疫試劑盒，具有快速、靈敏度高、特異性好、重復性好、操作簡便、檢測成本低等優點，從 而滿足現場快速檢測的要求。 本專利技術的另一個目的在于，提供一種牛奶中Ξ聚氯胺的檢測方法，該方法操作簡 單，靈敏度高、特異性好。 本專利技術主要利用抗原與抗體的特異性免疫反應的基本原理來實現。化學發光免疫 分析方法是化學發光法和免疫分析法結合的產物，故其同時具有化學發光法的高靈敏度和 免疫分析法的高特異性。在整個反應過程中，樣品中Ξ聚氯胺含量越高，反應體系中發光強 度越弱；反之，樣品中Ξ聚氯胺含量越少，發光強度越高。 本專利技術一種檢測牛奶中Ξ聚氯胺的化學發光免疫試劑盒，包含W下成份： 包被有抗Ξ聚氯胺抗體的白色不透明96孔可拆卸或不可拆卸的聚苯乙締化學發光 板。 應用抑7.0-7. 5 0. 2-0.4%NaN3,0. 2-0. 3mol/L棚酸鹽緩沖液溶液稀釋Ξ聚氯 胺純品，得到的Ξ聚氯胺系列標準品溶液，濃度范圍至少包含了 ： 0.01-0. 81ng/ml的濃度 區間。 酶標抗原濃縮液：是由Ξ聚氯胺與牛血清蛋白偶合制成的人工抗原與辣根過氧化 物酶偶聯制備得到。 酶標抗原稀釋液：0. 01-0. 02M憐酸鹽緩沖液，pH7. 0-8. 0, 0. 5-1%的牛血清蛋 白。 發光底物液。發光底物液分為A、B液。A液為化學發光底物-魯米諾和發光增強 劑-對甲苯酪溶液，B液為過氧化氨脈溶液。 濃縮復溶液。濃縮復溶液具體為2倍濃縮憐酸鹽緩沖液，使用前用雙蒸水稀釋至 工作濃度后使用，用于樣品前處理。 濃縮洗涂液。濃縮洗涂溶液具體為含有吐溫-20 (Tween-20)緩沖液的20倍濃縮 憐酸鹽緩沖液，使用前用雙蒸水稀釋至工作濃度后使用，用于實驗過程中洗涂化學發光板。 [001引本專利技術溶液的配制： 本專利技術試劑盒中設及的Ξ聚氯胺標準品溶液、酶標Ξ聚氯胺抗原溶液、化學發光溶液 及洗涂溶液及其配方對本專利技術試劑盒檢測的靈敏度影響很大；其中各溶液的主要成分及其 配制方法如下： 1、Ξ聚氯胺標準溶液：W常規方法將Ξ聚氯胺純品用抑=7. 0-7. 5 0. 2-0. 4% NaNs, 0. 2-0. 3mol/L棚酸鹽緩沖液配置，濃度分別為：0ng/ml, 0.Olng/ml, 0. 03ng/ml, 0. 09ng/ml, 0. 27ng/ml, 0. 81ng/ml的Ξ聚氯胺標準溶液。 2、酶標Ξ聚氯胺抗原溶液：用Ξ聚氯胺與偶聯蛋白偶聯制備的人工抗原與辣根過 氧化物酶偶聯制備得到，將所得酶標Ξ聚氯胺抗原用酶標Ξ聚氯胺稀釋液稀釋成1:4000 的工作濃度。 3、酶標抗原稀釋液：0. 01-0. 02Μ憐酸鹽緩沖液，pH7. 0-8. 0, 0. 5-1%的牛血清蛋 白。 4、化學發光溶液：A液為魯米諾含量為0. 01M、對甲苯酪含量為0. 001MpH8. 8的 Ξ(徑甲基）氨基甲燒溶液，B液為每100血溶液含巧樣酸2.Ig，無水胞2冊〇4 2. 82g，0. 75% 的過氧化氨脈0. 64mL的水溶液。 5、濃縮復溶工作液：胞&口〇4 · 2&0 5. 74邑、胞2冊〇4 · 12&0 32. 6g溶于1L的去離子 水中。 6、濃縮洗涂溶液：按體積分數0. 05%將吐溫-20添加至抑7. 4,0.Imol/L憐酸鹽 緩沖液中。 7、包被溶液：1. 59g碳酸鋼和2. 53g碳酸氨鋼溶于1L水中，調節抑9. 5。[002引 8、封閉溶液配制：lOgBSA溶于1L洗涂溶液中，再加入重量比為5%。的Nar^。 本專利技術化學發光板的包被： 本專利技術中包被化學發光板采用將抗Ξ聚氯胺抗體置于設定的包被溶液中，W設定的濃 度，在37 °C恒溫箱中反應包被。 本專利技術采用的是抑9.5的碳酸鋼-碳酸氨鋼緩沖溶液。本專利技術中微孔板中所包 被的抗Ξ聚氯胺抗體在堿性環境下可W很好的結合在微孔板塑料表面上，可W經受多次洗 板，采用的抗體包被濃度可W從5mg/m；L-20mg/ml。[002引包被好的微孔板可W用封閉溶液封閉，封閉液中惰性蛋白優選BSA，需加入Nar燦方 止變質。 酶標Ξ聚氯胺抗原溶液的制備： 本專利技術中酶標Ξ聚氯胺抗原溶液濃度是決定本專利技術中Ξ聚氯胺酶聯免疫檢測試劑盒 測定范圍及靈敏度的重要因素。 本專利技術中設及的酶標Ξ聚氯胺抗原溶液可W用酶標Ξ聚氯胺稀釋液稀釋成 1:4000的工作濃度。 按照上述酶標Ξ聚氯胺抗原溶液濃度制備的試劑盒可W達到很好的線性范圍 (標準線范圍可W達到0. 01-0. 81ng當前第1頁1 2 3 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種檢測牛奶中三聚氰胺的化學發光酶聯免疫試劑盒，其特征在于，所述化學發光板的各孔包被有抗三聚氰胺抗體；所述試劑包括：酶標三聚氰胺抗原濃縮液，酶標三聚氰胺抗原稀釋液，三聚氰胺系列標準品溶液，化學發光底物A、B液，濃縮洗滌液，濃縮復溶液。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：馮才偉，謝體波，石潔，陸葦，易重任，蒲小容，魏麗麗，王大敏，李乾，何方洋，
申請(專利權)人：貴州勤邦食品安全科學技術有限公司，
類型：發明
國別省市：貴州;52
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