本發明專利技術公開了一種通過補充培養基原料提高冬蟲夏草菌液體發酵菌絲體產量的方法。本發明專利技術所提供的方法，包括如下步驟：將冬蟲夏草菌進行液體發酵，待培養體系中碳源和氮源的含量均下降至初始濃度的50％-60％時，向所述培養體系中補充所述碳源和所述氮源，繼續培養，以得到產量提高的冬蟲夏草菌絲體。實驗證明，該方法具有操作簡便、生長速度快、周期短、產率高(18天可到17.5g/L)等優點。采用本發明專利技術所述方法所得的冬蟲夏草菌絲體可更大地滿足市場對冬蟲夏草的需求，緩解了市場需求對自然資源的壓力。基于上述優點，本發明專利技術可產生較好的社會及經濟效益，市場前景廣闊。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種通過補充培養基原料提高冬蟲夏草菌液體發酵菌絲體產量的方 法。
技術介紹
冬蟲夏草是我國著名的傳統中藥，屬于子囊菌口 (Ascomycota)、肉座菌目（Hypocreales)、蛇形蟲草科（Ophiocordycipitaceae)。有關冬蟲 夏草的記錄歷史悠久。"冬蟲夏草"最早出現在1694年成書的《本草備要》中，其藥用功效 被記載為"甘平，保肺益腎，止血化姨，已勞咳。"在《本草從新》（1757)中也明確記載"冬蟲 夏草味甘平，入肺、腎二經，保肺益腎，補精髓、止血化姨，已勞咳，治福癥皆良。"在《中華人 民共和國藥典》(2000年版）中則被解釋為；"冬蟲夏草味甘，平。歸肺、腎經；功能為補肺益 腎，止血化姨。用于久咳虛喘，勞嗽咯血，陽邊遺精，腰膝酸痛。"現代研究結果證明冬蟲夏草 具有巧姨平喘、免疫調節、保肝護腎、抗腫瘤等多種藥理作用。但是冬蟲夏草是青藏高原特 有的菌物，因寄主特異性、地理分布局限性導致其天然產量非常有限，加之長期采挖過度、 其賴W生存的生態環境遭到破壞，送種珍貴藥材的分布范圍和發生數量已經出現明顯的萎 縮趨勢。由于良好的治療與保健效果，目前國內外市場對冬蟲夏草需求量激增。送一供需 矛盾進一步刺激其價格昂貴，并繼續上漲。目前已有研究表明通過人工發酵得到的冬蟲夏 草與天然蟲草的功效相似，因此，通過發酵生產冬蟲夏草菌粉W代替天然冬蟲夏草，也成為 緩解自然資源壓力，調節供需平衡、創造經濟價值的很有潛力的途徑。DNA分子研究結果表明，目前市面上很多稱為"冬蟲夏草菌絲體"的發酵產品與天 然冬蟲夏草沒有聯系，因此其培養基和培養條件不能應用于真正的冬蟲夏草菌種；而用冬 蟲夏草菌種進行發酵生產，仍存在發酵周期長、產率低、成本高的問題。關于冬蟲夏草菌種 液體發酵技術有待優化，關于其培養方式仍有很大的改進空間。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種通過補充培養基原料提高冬蟲夏草菌液體發酵菌絲體 產量的方法。本專利技術所提供的通過補充培養基原料提高冬蟲夏草菌液體發酵菌絲體產量的方 法，為；在將冬蟲夏草菌進行液體發酵的過程中，向培養體系中補充碳源和氮源，從而得到 產量提高的冬蟲夏草菌絲體。 該方法具體可包括如下步驟；將冬蟲夏草菌進行液體發酵，待培養體系中碳源和 氮源的含量均下降至初始濃度的50% -60% (如55% -58% )時，向所述培養體系中補充 所述碳源和所述氮源（即所述補充培養基原料），繼續培養，從而得到產量提高的冬蟲夏草 菌絲體。 在本專利技術中，所述碳源為單糖，具體如葡萄糖；所述氮源為復合氮源，具體為魚蛋 白腺和酵母提取物。 在本專利技術中，上述方法中的所述氮源的含量具體是W氨基氮含量計的。 在本專利技術中，所述"待培養體系中碳源和氮源的含量均下降至初始濃度的 50%-60% (如55%-58% )"時，具體為；所述培養體系中所述碳源的含量下降至初始濃度 的58%，同時所述培養體系中所述氮源的含量（W氨基氮含量計）下降至初始濃度的55% 時。 在所述方法中，所述將冬蟲夏草菌進行液體發酵的培養基為半合成培養基； 所述半合成培養基的溶劑為水，溶質及其濃度如下；葡萄糖30. 0-50.OgA,魚蛋白腺 5. 0-10.Og/l，酵母提取物 1. 0-3.OgA,磯酸二氨鐘 1.O-lg/l，硫酸鎮 0. 5-1.Og/L。 在本專利技術的一個實施例中，所述半合成培養基的溶劑為水，溶質及其濃度具體 如下；葡萄糖50. 0邑/1，魚蛋白腺10.Og/l，酵母提取物3.OgA,磯酸二氨鐘IgA,硫酸鎮 0.5g/L〇 在所述方法中，所述將冬蟲夏草菌進行液體發酵，具體為：將所述冬蟲夏草菌的種 子液按照1 : (7-11)，如1:9,的體積比（種子液；培養基）接入到所述半合成培養基中，進行 液體發酵。 進一步，向所述培養體系中補充所述碳源和所述氮源的時間具體為將所述冬蟲夏 草菌的種子液接入到所述半合成培養基中進行液體發酵的第5-10天（如第9天）。 在所述方法中，向所述培養體系中補充所述碳源和所述氮源具體為：向每50mL 初始培養體系中補充8-12mL(如10. 2mL)液體；所述8-12mL(如10. 2mL)液體中含有 0. 8-1. 6g(如1. 6g或0.Sg)作為碳源的所述葡萄糖、0. 35-0. 7g(如0. 7g或0. 35g)作為氮 源的所述魚蛋白腺和0. 105-0. 21g(如0. 21g或0. 105g)作為氮源的所述酵母提取物，余量 為水。 更加具體的，在本專利技術的一個實施例中，所述8-12mL液體具體為10. 2mL液體； 所述10. 2mL液體具體為如下（a) - (d)中任一 ：(a) 1. 6mL濃度為500g/L的葡萄糖水溶液、 7. 0血含有lOOg/L魚蛋白腺和30g/L酵母提取物的混合物水溶液，W及1. 6血水；化）1. 6血 濃度為500g/L的葡萄糖水溶液、3. 5mL含有lOOg/L魚蛋白腺和30g/L酵母提取物的混合物 水溶液，W及5.ImL水；（C) 3. 2mL濃度為500g/L的葡萄糖水溶液、3. 5mL含有lOOg/L魚蛋 白腺和30g/L酵母提取物的混合物水溶液，W及3. 5mL水；（d) 3. 2mL濃度為500g/L的葡萄 糖水溶液，W及7.OmL含有lOOg/L魚蛋白腺和30g/L酵母提取物的混合物水溶液。在上述方法中，所述培養具體為15-18°C(如18°C)U00-150巧m(如I(K)巧m)、黑 暗條件下振蕩培養。 在上述方法中，所述培養的時間具體為6-9天（如9天）。 在上述方法中，所述冬蟲夏草菌的種子液具體是按照包括如下步驟的方法制備得 到； (al)將所述冬蟲夏草菌原始菌種接種于含有固體菌種培養基的平板中， 15-18°C(如15°C)黑暗培養90-120天（如90天），獲得冬蟲夏草菌菌種； 其中，所述冬蟲夏草菌原始菌種在所述固體菌種培養基斜面上，4C黑暗保存，接 種時由接種針挑取表面積約為1平方厘米的菌絲體轉接入所述固體菌種培養基中。 (a2)將所述冬蟲夏草菌菌種用水制成菌懸液，將所述菌懸液接種于液體菌種培養 基中，15-18°C(如18°C)UOO-150巧m(如100巧m)、黑暗條件下振蕩培養12-16天（如14 天），得到冬蟲夏草菌第一菌種液； 其中，水的用量為IOml;將所述菌懸液接種于液體菌種培養基中為將所述菌懸液 按照1: (2-6)，如1:4,的體積比接種于液體菌種培養基中。[002引（曰3)將所述冬蟲夏草菌第一菌種液按照1;(7-11)，如1:9的體積比接種于所述液 體菌種培養基中，15-18°C(如18°C)U00-150巧m(如I(K)巧m)、黑暗條件下振蕩培養12-16 天（如14天），得到冬蟲夏草菌第二菌種液；所述冬蟲夏草菌第二菌種液即為所述冬蟲夏 草菌的種子液。進一步，每升所述固體菌種培養基的組成如下；30. 0-50.Og(如50.Og)麥款、 200.Og±豆、10. 0-20.Og(如 20.Og)葡萄糖、3. 0-5.Og(如 5.Og)魚蛋白腺、1.0-2.Og(如 1.Og)酵母提取物、20.Og瓊脂，余量為水。每升所述液體菌種培養基的組成如下；30. 0-50.Og(如50.O本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種提高冬蟲夏草菌液體發酵菌絲體產量的方法，為：在將冬蟲夏草菌進行液體發酵的過程中，向培養體系中補充碳源和氮源，從而得到產量提高的冬蟲夏草菌絲體。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：姚一建，李瀟英，任蜀豫，
申請(專利權)人：中國科學院微生物研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11
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