一種倍半萜內(nèi)酯類化合物、其制備方法以及應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種倍半萜內(nèi)酯類化合物、其制備方法以及在癌癥治療中的應(yīng)用，該倍半萜內(nèi)酯類化合物的結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示。該倍半萜內(nèi)酯類化合物的制備方法包括：A、使用提取溶劑對藥材提取，得到提取液；B、將提取液濃縮，加水混懸，分別用極性由小到大的有機溶劑進行萃取，得到萃取液，萃取液濃縮，得到粗提物；C、粗提物上正相柱用洗脫劑進行洗脫；收集洗脫液，干燥，得到富含新穎倍半萜內(nèi)酯化合物的提取物；D、提取物進行反相中壓柱層析及制備型高效液相柱層析分離，得到所述的新穎倍半萜內(nèi)酯化合物。該制備方法操作簡單，生產(chǎn)成本低，得到的產(chǎn)品可用于癌癥治療藥物的制備，具有良好開發(fā)前景。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種倍半萜內(nèi)酯類化合物、其制備方法以及應(yīng)用
本專利技術(shù)屬于天然藥物活性成分
，涉及從中藥中提取、制備有效成分和應(yīng)用的領(lǐng)域，尤其是涉及一種菊科澤蘭屬植物中一個新穎倍半萜內(nèi)酯的制備方法及其癌癥治療應(yīng)用。
技術(shù)介紹
菊科(Compositae)澤蘭屬(EupatoriumL.)植物全世界約600余種，主要分布于中南美洲的溫帶及熱帶地區(qū)。我國有14種，若干個變種，除新疆、西藏外全國均產(chǎn)。澤蘭屬作為藥用的植物，目前應(yīng)用較多的有林澤蘭等八個種。該屬植物具有悠久的用藥歷史。野馬追為菊科澤蘭屬植物林澤蘭(EupatoriumlindleyanumDC.)的干燥地上部分，在我國分布較廣，具有多年用藥歷史，現(xiàn)被我國2015版藥典收載。野馬追，味苦性平，歸肺經(jīng)，具有清熱解毒，化痰止咳、平喘等功效。野馬追枝葉有解表祛濕，和中化濕之效，用于勞傷咳嗽、吐血咳血以及淋濁白帶、無名腫痛等治療。野馬追已被開發(fā)成顆粒劑、糖漿劑等多種中成藥廣泛應(yīng)用于臨床。野馬追糖漿是名優(yōu)中成藥，主要用于呼吸系統(tǒng)疾病的治療，產(chǎn)生了顯著的社會及經(jīng)濟效益。野馬追藥材中含有豐富的結(jié)構(gòu)新穎的倍半萜內(nèi)酯類成分，該類成分普遍含有“α-β不飽和羰基”結(jié)構(gòu)單元，為一類典型的邁克爾反應(yīng)受體分子(Michaeladditionacceptors)。邁克爾反應(yīng)受體分子具有顯著生物活性，特別是對細胞信號傳導(dǎo)通路中含有半胱氨酸殘基的蛋白、酶，如STAT3、CDK、Hsp90、NF-κB等具有抑制活性，邁克爾反應(yīng)受體分子已成為小分子生物藥物研究的熱點之一。迄今為止，雖然從澤蘭屬植物中分離得到了一系列倍半萜內(nèi)酯類化合物，但并沒有提供一種工藝簡單、科學合理，有效成分理化性質(zhì)穩(wěn)定、生物活性顯著的菊科澤蘭屬植物倍半萜內(nèi)酯類化合物及其制備方法。在野馬追糖漿等中成藥制劑的應(yīng)用方面，該類制劑多用于化痰、止咳、平喘等呼吸系統(tǒng)疾病的治療，檢測的指標成分或有效成分以黃酮、生物堿為主，野馬追及其制劑在癌癥治療方面的應(yīng)用鮮有報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種新穎倍半萜內(nèi)酯、其制備方法以及應(yīng)用，該倍半萜內(nèi)酯具有較好的抗癌活性，同時該制備方法工藝操作簡單、科學合理，能夠得到理化性質(zhì)穩(wěn)定，純度較高的倍半萜內(nèi)酯類化合物。一種倍半萜內(nèi)酯類化合物，結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：該化合物的結(jié)構(gòu)目前未見有文獻報道，同時MTT試驗表明該化合物對兩株人源乳腺癌細胞具有顯著的抑制作用，給藥24h后，對兩株人源腫瘤細胞株的半數(shù)抑制濃度(IC50)為：2.67～3.05μmol/L。具有抗腫瘤活性。本專利技術(shù)還提供了一種所述倍半萜內(nèi)酯類化合物的制備方法，包括下述步驟：(A)提取：采用提取溶劑對藥材進行提取，得到提取液；所述的藥材為菊科澤蘭屬植物的干燥地上部分和/或全草；(B)萃取：對步驟(A)得到的提取液進行濃縮，得到的濃縮物加水混懸，然后采用萃取溶劑進行萃取得到萃取液，萃取液經(jīng)過濃縮，得到粗提物；(C)柱層析：步驟(B)得到的粗提物上正相柱，用洗脫溶劑進行洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得到富含所述倍半萜內(nèi)酯化合物的提取物；(D)中壓柱層析：步驟(C)得到的提取物進行中壓柱層析分離，得到含有式(1)所示化合物的粗產(chǎn)品。所述的中壓柱層析中，色譜柱填料為十八烷基鍵合相硅膠；所述中壓柱層析流動相至少包括40～70％的甲醇水溶液；(E)制備型高效液相柱層析：步驟(D)得到的粗產(chǎn)品進行制備型高效液相柱層析，得到如式(1)所示的化合物。所述制備型高效液相柱層析中，色譜柱填料為十八烷基鍵合相硅膠；所述制備型高效液相柱層析流動相至少包括20～40％的乙腈水溶液。步驟A中，藥材的提取方法較多，包括滲漉法。滲漉法提取效率高，提取溶劑用量少，常溫提取能耗低，簡便可行。滲漉法在常溫下操作，亦不會造成熱敏性有效成分的破壞。步驟B中，萃取溶劑可以有多種選擇，但至少要包括乙酸乙酯。乙酸乙酯極性大于現(xiàn)有技術(shù)中的石油醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿，能夠?qū)商m屬植物提取物中倍半萜內(nèi)酯類成分萃取完全；乙酸乙酯極性小于現(xiàn)有技術(shù)中的正丁醇，不但能將倍半萜內(nèi)酯類成分完全萃取出來，還能夠剔除一些易溶于正丁醇的極性較大的苷類雜質(zhì)，從而使得澤蘭屬植物粗提物中倍半萜內(nèi)酯類活性成分的含量更高，純度更高。步驟C中，洗脫劑有比較嚴格的要求，并對體積比有限定，所述洗脫劑選擇性高，洗脫能力強，能夠保證得到理化性能穩(wěn)定、所述化合物分布集中的提取物。所述的洗脫劑包括由體積比為20～0：1的石油醚和乙酸乙酯組成的洗脫劑。步驟D中，所述的中壓柱層析為反相色譜，色譜柱填料為十八烷基鍵合相硅膠。所述中壓柱層析流動相至少包括40～70％的甲醇水溶液。步驟E中，所述的制備型高效液相柱層析亦為反相色譜，色譜柱填料為十八烷基鍵合相硅膠，流動相至少包括20～40％的乙腈水溶液。為了取得更好的專利技術(shù)效果，以下作為本專利技術(shù)的優(yōu)選：步驟(A)中，所述藥材為野馬追(EupatoriumlindleyanumDC.)的干燥全草，野馬追被2015版中國藥典收載，價廉易得。所述提取溶劑為水、醇中的一種或兩種，該提取溶劑使用安全、價廉、且具有較好的提取效率。進一步優(yōu)選，所述提取溶劑為含乙醇質(zhì)量分數(shù)為90～95％的乙醇水溶液。該提取溶劑的性質(zhì)非常適合于提取澤蘭屬植物干燥地上部分和/或全草，能夠更加高效、完全地獲取藥用部位中的倍半萜內(nèi)酯類活性成分，且能避免大量極性較大的非倍半萜內(nèi)酯類雜質(zhì)被提取出來。所述提取方法為溶劑提取法。進一步優(yōu)選，所述提取方法為滲漉法。藥材打粉，過40目篩，藥粉潤濕后裝柱，加90～95％乙醇冷浸24h，滲漉，提取溶劑與藥材的用量比為15～20L﹕1kg。該法提取效率高，提取溶劑用量少，常溫下提取能耗低，且能避免熱敏性活性成分的降解，滲漉設(shè)備簡單，也能大量節(jié)約生產(chǎn)成本。步驟(B)中，所述的萃取溶劑為石油醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水中的兩種以上。萃取時按極性由小到大依次使用單一溶劑進行萃取。進一步優(yōu)選，所述的萃取溶劑為石油醚、乙酸乙酯，萃取時按極性大小依次使用單一溶劑等體積進行萃取。根據(jù)相似相溶原理，分別通過上述萃取溶劑萃取，以使步驟A得到的藥材提取液濃縮加水混懸后的溶液按照極性由小到大分離，通過薄層色譜(TLC)、LC-MS檢識，澤蘭屬植物萃取液中的倍半萜內(nèi)酯主要集中在乙酸乙酯萃取液中，其它萃取溶劑主要用于去除藥材提取物中非倍半萜內(nèi)酯類雜質(zhì)，以得到富含倍半萜內(nèi)酯的粗提物。因此，進一步優(yōu)選，將乙酸乙酯萃取液濃縮，乙酸乙酯提取物上正相柱進一步純化，其余的可以忽略，從而減少生產(chǎn)成本。步驟(C)中，所述正相柱填料為100～200目的柱層析用硅膠或氧化鋁。所述的洗脫劑包括由體積比為20﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑、由體積比為15﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑、由體積比為10﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑、由體積比為6﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑、由體積比為3﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑、由體積比為2﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑、由體積比為1﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑、由體積比為0﹕1的石油醚和乙酸乙酯組成的混合溶劑，并按極性由小到大依次進行梯度洗脫。采用石油醚和乙酸乙酯組成的洗脫劑，并按極性由小到大依次進行梯度洗脫，該洗脫體系選擇性高，洗脫能力強，通過T本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種倍半萜內(nèi)酯類化合物，其特征在于，結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：

【技術(shù)特征摘要】
1.一種倍半萜內(nèi)酯類化合物，其特征在于，結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：2.一種如權(quán)利要求1所述的倍半萜內(nèi)酯類化合物的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：(A)提取：采用醇溶劑對藥材進行提取，得到提取液；所述的藥材為野馬追的地上部分和/或全草；(B)萃取：對步驟(A)得到的提取液進行濃縮，得到的濃縮物加水混懸，然后采用萃取溶劑進行萃取得到萃取液，萃取液經(jīng)過濃縮，得到粗提物；步驟(B)中，萃取采用石油醚和乙酸乙酯分別進行，對乙酸乙酯萃取液進行濃縮得到粗提物；(C)柱層析：步驟(B)得到的粗提物上正相柱用洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得到富含所述倍半萜內(nèi)酯的提取物；步驟(C)中，所述的正相柱所用的填料為100～200目的柱層析硅膠；步驟(C)中，洗脫方式為梯度洗脫，洗脫劑由體積比為20～0:1的石油醚和乙酸乙酯組成，含有目標產(chǎn)物的洗脫液通過TLC或LC-MS進行檢識；(D)中壓柱...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊波，趙華軍，周東恒，趙亞萍，
申請(專利權(quán))人：浙江中醫(yī)藥大學，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江;33