本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種金針菇固體轉(zhuǎn)液體的接種方法，經(jīng)（1）試管培養(yǎng)、（2）平板培養(yǎng)、（3）接種、（4）三角瓶液體培養(yǎng)后，即可用于生產(chǎn)或擴(kuò)繁。本發(fā)明專利技術(shù)工藝簡單，接種簡便，有效避免了雜菌感染的可能，同時(shí)還能最大限度保證菌種的活力，不會(huì)出現(xiàn)菌絲被燙死等情況，接種后的液體三角瓶長勢良好，菌球顆粒大小均勻，菌絲旺盛，適合進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及，屬于栽培技術(shù)類。
技術(shù)介紹
目前，固體菌種的生產(chǎn)工藝一般是由試管母種擴(kuò)繁成一級(jí)種，二級(jí)種、三級(jí)種，生產(chǎn)周期長、污染率高、成本高、需大量人工和場地，并且管理困難，很難適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)的需要。而液體菌種生產(chǎn)設(shè)備和技術(shù)已經(jīng)推廣多年，擁有液體菌種生產(chǎn)設(shè)備的單位和個(gè)人不計(jì)其數(shù)。液體菌種優(yōu)點(diǎn)很多，例如:食用菌菌種的液體培養(yǎng)可以大大的縮短周期，產(chǎn)量巨大，并且可以大規(guī)模生產(chǎn)，液體培養(yǎng)還可以減少雜菌污染，大大的為經(jīng)營這節(jié)約時(shí)間。但是，該液體菌種生產(chǎn)的技術(shù)依然存在不足，還需繼續(xù)研究，比如:實(shí)際上成功長期應(yīng)用于生產(chǎn)的仍很少，這說明液體菌種設(shè)備和技術(shù)在生產(chǎn)中存在較大的探討空間，究竟是設(shè)備問題還是技術(shù)問題、還是液體菌種與栽培技術(shù)的結(jié)合問題。本專利技術(shù)就金針菇固體轉(zhuǎn)液體的接種方法作探討，以期得到一個(gè)優(yōu)良的接種方法，避免液體菌種生產(chǎn)中出現(xiàn)的諸多問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)上述現(xiàn)存的技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供，通過斜面菌種接種到液體培養(yǎng)基中，以提高液體菌種生產(chǎn)的活力。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供的金針菇固體轉(zhuǎn)液體的接種方法，包括如下具體步驟: 一、試管培養(yǎng): (1-1)制作斜面試管:500ml斜面試管培養(yǎng)料的原料為:斜面試管專用培養(yǎng)基19.5g、細(xì)菌瓊脂2.5g、純凈水500ml，ph值自然，將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢瑁⒃谖⒉t中加熱至溶液呈透明狀后，取出分裝到20X200mm的試管中，每支試管裝13ml培養(yǎng)基，塞上膠塞封上報(bào)紙，于121°C條件下滅菌20min ； (1-2)接種:將滅菌后的試管趁熱擺成斜面，待溫度降至室溫后開始接種，接種前超凈工作臺(tái)紫外燈消毒20min，于超凈工作臺(tái)中接種，每支試管接種面積為3mmX3mmX3mm的正方體菌種塊； (1-3)培養(yǎng):將接種好的試管放于17°C下的恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)7天，即可用于接種平板培養(yǎng)基。二、平板培養(yǎng): (2-1)制作平板培養(yǎng)基:500ml平板培養(yǎng)基培養(yǎng)料的原料為:斜面試管專用培養(yǎng)基19.5g、細(xì)菌瓊脂2.5g、純凈水500ml，ph值自然，將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢瑁⒃谖⒉t中加熱至溶液呈透明狀后，取出分裝到20 X 200mm的試管中，每支試管裝20ml培養(yǎng)基，塞上膠塞封上報(bào)紙，于121°C條件下滅菌20min ； (2-2)接種:將滅菌后的試管中的培養(yǎng)基趁熱倒入平板中，待平板凝固降至室溫后開始接種；接種前超凈工作臺(tái)紫外燈消毒20min，于超凈工作臺(tái)中接種；將接種針深入培養(yǎng)至7天的母種斜面試管，刮掉斜面表面的氣生菌絲，將靠近試管口沒有菌絲覆蓋的培養(yǎng)基質(zhì)切開棄除，選取靠近接種點(diǎn)附近布滿菌絲的培養(yǎng)基畫井字形，以長寬高各3_均勻切塊，然后放入平板培養(yǎng)基中央，封上密封條，一支試管轉(zhuǎn)接6個(gè)平板培養(yǎng)基； (2-3)培養(yǎng):將接種好的平板放于17°C下的恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)7天左右，即可用于液體三角瓶。三、接種: 3-1、液體準(zhǔn)備: (3-1-1)配料??每1000ml液體三角瓶培養(yǎng)液所需配料為:白糖20g、豆奶寶3.3g、磷酸二氫鉀0.66g、硫酸鎂0.66g，稱取各種原料進(jìn)行配料； (3-1-2)裝料:將配好的料裝入1000ml的三角瓶中，并充分?jǐn)嚢枞芙猓湃胍粋€(gè)轉(zhuǎn)子，然后用純水定容至600ml，且要求PH值在6.2至6.5之間； (3-1-3)滅菌:將裝好料的三角瓶塞上棉塞，并在棉塞外套上錫箔紙，確保錫箔紙完全包裹住棉塞，然后放于高壓滅菌鍋中，于121°C條件下滅菌60min后取出； (3-1-4)冷卻:將取出的三角瓶在超凈臺(tái)中冷卻至18°C至22°C即可準(zhǔn)備接種。3-2、接種培養(yǎng): (3-2-1)消毒:將超凈臺(tái)用紫外燈消毒30分鐘，且臺(tái)上的所有工具用酒精和紫外燈消毒后，由專人穿戴專用接種潔凈服，戴口罩及醫(yī)用手套，穿潔凈區(qū)工作鞋，風(fēng)淋后進(jìn)入潔凈區(qū)，在超凈工作臺(tái)上準(zhǔn)備滅菌操作； (3-2-2)滅菌:將打孔器，接種針?biāo)袝?huì)深入到平板內(nèi)的部分通過酒精燈火焰來回灼燒至通紅滅菌，然后放置一邊冷卻；將挑好的平板菌種放入超凈臺(tái)中，并靠近酒精燈火焰附近，撕掉封條，讓平板邊緣緩緩過火滅菌，切勿燒得過燙； (3-2-3)打孔取塊:將接種針深入平板培養(yǎng)基，刮掉斜面表面的氣生菌絲，再用直徑10mm的打孔器沿著菌絲蔓延生長的邊緣均勻打孔一圈；蓋上平板蓋備用； (3-2-4)接種:將冷卻后的液體三角瓶瓶口靠近酒精燈火焰，并取下錫箔紙和棉塞，快速用接種針分別從平板培養(yǎng)基內(nèi)選取4顆菌種，放置過程中接種針不要觸碰三角瓶內(nèi)壁；操作完成后分別將棉塞和錫箔紙?jiān)诨鹧嫔线^火后，再把三角瓶塞緊包好。四、三角瓶液體培養(yǎng): (4-1)重復(fù)步驟(3-2-2 )、(3-2-3 )、(3-2-4 )操作直至接種結(jié)束，每個(gè)平板可轉(zhuǎn)接2至3個(gè)三角瓶，然后將三角瓶放入搖床中震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20°C，振幅為250r/min ;培養(yǎng)至第四天取出三角瓶，將液體菌種打碎20s，然后放回繼續(xù)培養(yǎng)；培養(yǎng)至第9天取出三角瓶，將液體菌種打碎lOmin，即可用直接用于生產(chǎn)，也可用于液體轉(zhuǎn)固體或液體轉(zhuǎn)發(fā)酵罐的擴(kuò)繁。綜上所述，一般固體轉(zhuǎn)液體是用試管直接轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的接種方法進(jìn)行固體轉(zhuǎn)液體的接種，是由固體轉(zhuǎn)平板，再由平板轉(zhuǎn)液體培養(yǎng)基，具有以下優(yōu)點(diǎn): (1)由試管轉(zhuǎn)接平板再轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基，又多了一個(gè)選育的步驟，試管轉(zhuǎn)接平板時(shí)會(huì)挑選長勢良好，菌絲旺盛潔白的試管轉(zhuǎn)接，再轉(zhuǎn)接到平板培養(yǎng)基，培養(yǎng)好又進(jìn)一步挑選長勢良好，菌絲旺盛活力強(qiáng)的平板轉(zhuǎn)接，從而保證將最好的菌種用于生產(chǎn)之中。(2)試管轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基，實(shí)際使用中一次性會(huì)使用多支試管，由于試管之間的菌種長勢不一、菌絲狀態(tài)活力不一，導(dǎo)致接種培養(yǎng)后的液體菌種長勢不一致、生長不能一致統(tǒng)一、不便于工廠化管理，而加入平板轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基，所使用的平板培養(yǎng)基均轉(zhuǎn)自同一根試管，確保菌種長勢，活力一致，進(jìn)一步縮小了同一批液體菌種之間的差異性。(3)同(2)的原理一樣，試管轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基人工使用接種針勾取均勻小塊轉(zhuǎn)接，實(shí)際操作中，因環(huán)境、人為、操作方法等因素，勾取的接種快大小厚度不一，導(dǎo)致接入后的液體菌種長勢不一、菌球顆粒大小不均勻、甚至不萌發(fā)，而用平板培養(yǎng)基菌種轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基，使用的是專門的打孔器，勾取的菌種大小，厚度等完全一致統(tǒng)一，可有效避免雜菌感染的可能，同時(shí)還能最大限度保證菌種的活力，不會(huì)出現(xiàn)菌絲被燙死等情況，接種后的液體三角瓶長勢良好，菌球顆粒大小均勻，菌絲旺盛，適合進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)。【具體實(shí)施方式】下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步說明。本專利技術(shù)進(jìn)行固體轉(zhuǎn)液體的接種，可有效避免雜菌感染的可能，同時(shí)還能最大限度保證菌種的活力，不會(huì)出現(xiàn)菌絲被燙死等情況，具體步驟如下。—、試管培養(yǎng): (1-1)制作斜面試管:500ml斜面試管培養(yǎng)料的原料為:斜面試管專用培養(yǎng)基19.5g、細(xì)菌瓊脂2.5g、純凈水500ml，ph值自然，將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢瑁⒃谖⒉t中加熱至溶液呈透明狀后，取出分裝到20X200mm的試管中，每支試管裝13ml培養(yǎng)基，塞上膠塞封上報(bào)紙，于121°C條件下滅菌20min ； (1-2)接種:將滅菌后的試管趁熱擺成斜面，待溫度降至室溫后開始接種，接種前超凈工作臺(tái)紫外燈消毒20min，于超凈工作臺(tái)中接種，每支試管接種面積為3mmX3mmX3mm的正方體菌種塊； (1-3本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種金針菇固體轉(zhuǎn)液體的接種方法，其特征在于，包括如下具體步驟：一、試管培養(yǎng)：（1?1）制作斜面試管：500ml斜面試管培養(yǎng)料的原料為：斜面試管專用培養(yǎng)基19.5g、細(xì)菌瓊脂2.5g、純凈水500ml，ph值自然，將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢瑁⒃谖⒉t中加熱至溶液呈透明狀后，取出分裝到20×200mm的試管中，每支試管裝13ml培養(yǎng)基，塞上膠塞封上報(bào)紙，于121℃條件下滅菌20min；（1?2）接種：將滅菌后的試管趁熱擺成斜面，待溫度降至室溫后開始接種，接種前超凈工作臺(tái)紫外燈消毒20min，于超凈工作臺(tái)中接種，每支試管接種面積為3mm×3mm×3mm的正方體菌種塊；（1?3）培養(yǎng)：將接種好的試管放于17℃下的恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)7天，即可用于接種平板培養(yǎng)基；二、平板培養(yǎng)：（2?1）制作平板培養(yǎng)基：500ml平板培養(yǎng)基培養(yǎng)料的原料為：斜面試管專用培養(yǎng)基19.5g、細(xì)菌瓊脂2.5g、純凈水500ml，ph值自然，將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢瑁⒃谖⒉t中加熱至溶液呈透明狀后，取出分裝到20×200mm的試管中，每支試管裝20ml培養(yǎng)基，塞上膠塞封上報(bào)紙，于121℃條件下滅菌20min；（2?2）接種：將滅菌后的試管中的培養(yǎng)基趁熱倒入平板中，待平板凝固降至室溫后開始接種；接種前超凈工作臺(tái)紫外燈消毒20min，于超凈工作臺(tái)中接種；將接種針深入培養(yǎng)至7天的母種斜面試管，刮掉斜面表面的氣生菌絲，將靠近試管口沒有菌絲覆蓋的培養(yǎng)基質(zhì)切開棄除，選取靠近接種點(diǎn)附近布滿菌絲的培養(yǎng)基畫井字形，以長寬高各3mm均勻切塊，然后放入平板培養(yǎng)基中央，封上密封條，一支試管轉(zhuǎn)接6個(gè)平板培養(yǎng)基；（2?3）培養(yǎng)：將接種好的平板放于17℃下的恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)7天左右，即可用于液體三角瓶；三、接種：3?1、液體準(zhǔn)備：（3?1?1）配料：每1000ml液體三角瓶培養(yǎng)液所需配料為：白糖20g、豆奶寶3.3g、磷酸二氫鉀0.66g、硫酸鎂0.66g，稱取各種原料進(jìn)行配料；（3?1?2）裝料：將配好的料裝入1000ml的三角瓶中，并充分?jǐn)嚢枞芙猓湃胍粋€(gè)轉(zhuǎn)子，然后用純水定容至600ml，且要求PH值在6.2至6.5之間；（3?1?3）滅菌：將裝好料的三角瓶塞上棉塞，并在棉塞外套上錫箔紙，確保錫箔紙完全包裹住棉塞，然后放于高壓滅菌鍋中，于121℃條件下滅菌60min后取出；（3?1?4）冷卻：將取出的三角瓶在超凈臺(tái)中冷卻至18℃至22℃即可準(zhǔn)備接種；3?2、接種培養(yǎng)：（3?2?1）消毒：將超凈臺(tái)用紫外燈消毒30分鐘，且臺(tái)上的所有工具用酒精和紫外燈消毒后，由專人穿戴專用接種潔凈服，戴口罩及醫(yī)用手套，穿潔凈區(qū)工作鞋，風(fēng)淋后進(jìn)入潔凈區(qū)，在超凈工作臺(tái)上準(zhǔn)備滅菌操作；（3?2?2）滅菌：將打孔器，接種針?biāo)袝?huì)深入到平板內(nèi)的部分通過酒精燈火焰來回灼燒至通紅滅菌，然后放置一邊冷卻；將挑好的平板菌種放入超凈臺(tái)中，并靠近酒精燈火焰附近，撕掉封條，讓平板邊緣緩緩過火滅菌，切勿燒得過燙；（3?2?3）打孔取塊：將接種針深入平板培養(yǎng)基，刮掉斜面表面的氣生菌絲，再用直徑10mm的打孔器沿著菌絲蔓延生長的邊緣均勻打孔一圈；蓋上平板蓋備用；（3?2?4）接種：將冷卻后的液體三角瓶瓶口靠近酒精燈火焰，并取下錫箔紙和棉塞，快速用接種針分別從平板培養(yǎng)基內(nèi)選取4顆菌種，放置過程中接種針不要觸碰三角瓶內(nèi)壁；操作完成后分別將棉塞和錫箔紙?jiān)诨鹧嫔线^火后，再把三角瓶塞緊包好；四、三角瓶液體培養(yǎng)：（4?1）重復(fù)步驟（3?2?2）、（3?2?3）、（3?2?4）操作直至接種結(jié)束，每個(gè)平板可轉(zhuǎn)接2至3個(gè)三角瓶，然后將三角瓶放入搖床中震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20℃，振幅為250r/min；培養(yǎng)至第四天取出三角瓶，將液體菌種打碎20s，然后放回繼續(xù)培養(yǎng)；培養(yǎng)至第9天取出三角瓶，將液體菌種打碎10min，即可用直接用于生產(chǎn)，也可用于液體轉(zhuǎn)固體或液體轉(zhuǎn)發(fā)酵罐的擴(kuò)繁。...
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：范伯圣，朱志林，厲芳，張俊，廖光陽，池和彬，丁虎，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江蘇康盛農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32
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