用于調(diào)節(jié)HBV和TTR表達的組合物和方法技術(shù)

本文提供了具有綴合物基團的低聚化合物。在某些實施方案中，所述低聚化合物綴合至N-乙酰基半乳糖胺。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】用于調(diào)節(jié)HBV和TTR表達的組合物和方法序列表本申請連同序列表一起以電子格式提交。序列表提供為在2014年5月1日創(chuàng)建的名稱為BIOL0248WOSEQ_ST25.txt的文件，所述文件的大小為16Kb。電子格式的序列表中的信息以引用的方式整體并入本文。專利技術(shù)背景反義技術(shù)背后的原理是反義化合物與靶核酸雜交并且調(diào)節(jié)靶核酸的量、活性和/或功能。例如在某些情況下，反義化合物導(dǎo)致靶標的轉(zhuǎn)錄或翻譯改變。可通過例如靶mRNA降解或占位型(occupancy-based)抑制來實現(xiàn)表達的所述調(diào)節(jié)。通過降解實現(xiàn)的RNA靶功能的調(diào)節(jié)的實例為在與DNA樣反義化合物雜交時靶RNA的基于RNA酶H的降解。通過靶標降解實現(xiàn)的基因表達的調(diào)節(jié)的另一個實例為RNA干擾(RNAi)。RNAi是指通過利用RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)的機制實現(xiàn)的反義介導(dǎo)的基因沉默。RNA靶功能的調(diào)節(jié)的另一個實例為通過占位型機制，如微小RNA天然采用的機制。微小RNA為調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)編碼RNA的表達的小型非編碼RNA。反義化合物與微小RNA的結(jié)合防止微小RNA與其信使RNA靶標結(jié)合，因此干擾微小RNA的功能。微小RNA模擬物可增強天然微小RNA功能。某些反義化合物改變前體mRNA(pre-mRNA)的剪接。不管具體機制是什么，序列特異性均使反義化合物具有作為用于靶標驗證和基因功能化的工具以及用以選擇性調(diào)節(jié)涉及疾病發(fā)病機理的基因的表達的治療劑的吸引力。反義技術(shù)是用于調(diào)節(jié)一種或多種特定基因產(chǎn)物的表達的有效手段并且可因此證明在許多治療、診斷和研究應(yīng)用中是特別有用的。可將化學(xué)修飾的核苷摻入反義化合物中，以增強一種或多種性質(zhì)，如核酸酶抗性、藥物代謝動力學(xué)或?qū)Π泻怂岬挠H合力。在1998年，反義化合物(福米韋生(fomivirsen)；由IsisPharmaceuticalsInc.,Carlsbad,CA開發(fā))為第一種從美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)獲得銷售許可的反義藥物，并且目前為AIDS患者中巨細胞病毒(CMV)誘發(fā)的視網(wǎng)膜炎的治療。新的化學(xué)修飾改進了反義化合物的效力和效能，揭示了經(jīng)口遞送的可能性并且增強了皮下施用、減少了副作用的可能性并在患者方便性上產(chǎn)生改進。增加反義化合物的效力的化學(xué)修飾允許施用較低劑量，所述較低劑量減小了毒性的可能性并且降低治療的總成本。增加降解抗性的修飾使從體內(nèi)清除較慢，從而允許較不頻繁的給藥。不同類型的化學(xué)修飾可組合在一種化合物中以進一步優(yōu)化化合物的效能。專利技術(shù)概述在某些實施方案中，本公開提供包含與核酸轉(zhuǎn)錄物互補的反義寡核苷酸的綴合反義化合物。在某些實施方案中，本公開提供綴合反義化合物。在某些實施方案中，本公開提供包括使細胞與包含與核酸轉(zhuǎn)錄物互補的反義寡核苷酸的綴合反義化合物接觸的方法。在某些實施方案中，本公開提供包括使細胞與包含反義寡核苷酸的綴合反義化合物接觸并且降低細胞中核酸轉(zhuǎn)錄物的量或活性的方法。去唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)先前已有描述。參見例如，Park等，PNAS第102卷，第47期，第17125-17129頁(2005)。所述受體在肝臟細胞尤其是肝細胞上表達。此外，已顯示，包含三個N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)配體的聚簇的化合物能夠結(jié)合ASGP-R，從而導(dǎo)致化合物被攝取到細胞中。參見例如，Khorev等，BioorganicandMedicinalChemistry,16,9，第5216-5231頁(2008年5月)。因此，包含所述GalNAc聚簇的綴合物已用來促進將某些化合物攝取到肝臟細胞(確切地是肝細胞)中。例如，已顯示，某些含有GalNAc的綴合物在體內(nèi)增加雙鏈siRNA化合物在肝臟細胞中的活性。在所述情況下，含有GalNAc的綴合物通常連接至siRNA雙鏈體的有義鏈。因為在反義鏈最終與靶核酸雜交之前丟棄有義鏈，所以存在很少關(guān)于綴合物將干擾活性的問題。通常，綴合物連接至siRNA的有義鏈的3’末端。參見例如，美國專利8,106,022。本文描述的某些綴合物基團比先前描述的綴合物基團更有活性和/或更易于合成。在本專利技術(shù)的某些實施方案中，綴合物連接至單鏈反義化合物，包括但不限于基于RNA酶H的反義化合物和改變前體mRNA靶核酸的剪接的反義化合物。在所述實施方案中，綴合物應(yīng)該保持連接至反義化合物足以提供益處(攝取到細胞中的改進)的時間，但是隨后應(yīng)裂解或以其它方式不干擾對于活性所必需的后續(xù)步驟，如與靶核酸雜交以及與RNA酶H或與和剪接或剪接調(diào)節(jié)相關(guān)的酶相互作用。這種性質(zhì)平衡在單鏈反義化合物的環(huán)境中比在其中綴合物可簡單連接至有義鏈的siRNA化合物中更為重要。本文公開了與缺乏綴合物的相同反義化合物相比在體內(nèi)在肝臟細胞中具有改進效力的綴合的單鏈反義化合物。已知這些化合物所需的性質(zhì)平衡如改進的效力是令人驚奇的。在某些實施方案中，本文的綴合物基團包含可裂解部分。如所指出的，不希望受機制的束縛，合乎邏輯的是，綴合物應(yīng)在化合物上保持足以提供攝取增強的時間，但其后，希望綴合物的一些部分或理想的是綴合物的全部均裂解，從而釋放呈其最具活性形式的母體化合物(例如，反義化合物)。在某些實施方案中，可裂解部分為可裂解核苷。所述實施方案通過經(jīng)由一個或多個可裂解鍵(如具有磷酸二酯鍵聯(lián)的那些)通過核苷使綴合物的其余部分(聚簇)連接至反義寡核苷酸來利用細胞中的內(nèi)源性核酸酶。在某些實施方案中，聚簇通過磷酸二酯鍵聯(lián)與可裂解核苷結(jié)合。在某些實施方案中，可裂解核苷通過磷酸二酯鍵聯(lián)連接至反義寡核苷酸(反義化合物)。在某些實施方案中，綴合物基團可包含兩個或三個可裂解核苷。在所述實施方案中，所述可裂解核苷通過可裂解鍵(如具有磷酸二酯鍵聯(lián)的那些)彼此連接，連接至反義化合物和/或連接至聚簇。本文的某些綴合物不包含可裂解核苷而是包含可裂解鍵。顯示了通過至少一個在細胞中易受裂解的鍵(可裂解鍵)來提供綴合物自寡核苷酸的充分裂解。在某些實施方案中，綴合反義化合物為前藥。向動物施用所述前藥并且其最終代謝為更具活性的形式。例如，使綴合反義化合物裂解以去除綴合物的全部或部分，從而產(chǎn)生缺乏綴合物的全部或一些的反義化合物的活性(或更具活性)形式。在某些實施方案中，綴合物連接在寡核苷酸的5’末端。某些所述5’-綴合物比具有連接在3’末端的類似綴合物基團的對應(yīng)物更有效地裂解。在某些實施方案中，改進的活性可與改進的裂解相關(guān)。在某些實施方案中，在5’末端包含綴合物的寡核苷酸比在3’末端包含綴合物的寡核苷酸具有更大的效能(參見，例如，實施例56、81、83和84)。此外，5’-連接允許更簡單的寡核苷酸合成。通常，在固體載體上在3’至5’方向上合成寡核苷酸。為了制得3’-綴合寡核苷酸，通常將預(yù)先綴合的3’核苷連接至固體載體，然后按常規(guī)構(gòu)造寡核苷酸。然而，將所述綴合核苷連接至固體載體增加了合成的復(fù)雜性。此外，使用所述方法，綴合物則存在于寡核苷酸的整個合成中并且在后續(xù)步驟期間可能發(fā)生降解或可能限制可使用的反應(yīng)和試劑的種類。使用本文針對5’-綴合寡核苷酸所述的結(jié)構(gòu)和技術(shù)，可使用標準自動化技術(shù)合成寡核苷酸并且與最后(最5’)的核苷一起或在寡核苷酸從固體載體上裂解之后引入綴合物。鑒于現(xiàn)有技術(shù)和本公開，普通技術(shù)人員可簡單制得本文的任何綴合物和綴合寡核苷酸。此外，本文公開的某些所述綴合物和綴合寡核本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種包含修飾寡核苷酸和綴合物基團的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由8至80個連接核苷組成并且具有與編碼甲狀腺素運載蛋白(TTR)的SEQ?ID?NO:2至少85％、90％、95％或100％互補的核堿基序列。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2013.05.01 US 61/818,442;2013.05.15 US 61/823,826;1.一種化合物，其中所述化合物由下式：或其鈉鹽組成。2.一種組合物，其包含如權(quán)利要求1所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。3.如權(quán)利要求1所述的化合物或如權(quán)利要求2所述的組合物在制備用于治療受試者中HBV相關(guān)的疾病、病癥或病狀的藥物中的用途，其中所述疾病、病癥或病狀為黃疸、肝臟炎癥、肝纖維化、肝硬化、肝衰竭、肝癌、噬血細胞綜合征、HBV病毒血癥或肝病相關(guān)的移植。4.如權(quán)利要求1所述的化合物或如權(quán)利要求2所述的組...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：T·P·普拉卡什，P·P·塞思，E·E·斯韋茲，
申請(專利權(quán))人：ISIS制藥公司，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US