人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG及其應用，重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.9所示。該人源抗體能夠與唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9特異性結合；體外細胞實驗結果證實，人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9抗體能夠有效誘導唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9陽性細胞的凋亡，抑制細胞因子的分泌，因此本發明專利技術的單克隆抗體可應用于重癥哮喘、慢性阻塞性肺病、自身免疫性疾病、腫瘤等相關疾病的臨床治療及預防。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于單克隆抗體藥物
，設及一種抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集 素-9(thesurfacemoleculesialicacid-bindingimmunoglobulin-likelectin-9， Siglec-9)的全分子人源單克隆抗體及其被編碼的DM分子，W及該全分子人源單克隆抗 體在制備治療重癥哮喘、慢性阻塞性肺病、自身免疫性疾病和腫瘤等疾病藥物中的應用。
技術介紹
唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素（thesurfacemoleculesialicacid-binding immunoglobulin-1化electin,Siglec)是免疫球蛋白超家族的重要成員，可通過識別含有 唾液酸的糖鏈結構介導細胞與細胞或病原體間的相互作用。最近幾年研究顯示，siglec家 族在細胞活化、增殖W及細胞調亡發揮重要作用，同時，在固有免疫和適應性免疫中也發揮 重要的調控作用，此外也可W參與免疫耐受的調控。 Siglecs是免疫球蛋白超家族成員，其分子結構共同特點是具有結合誕酸的能 力。唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素，表達于免疫細胞表面，介導抑制性信號。與其他抑 制性免疫受體家族相似，如殺傷細胞免疫球蛋白樣受體和白細胞免疫蛋白樣受體，siglecs 是跨膜分子，在胞質尾區包含免疫受體酪氨酸抑制基序ITIMs(immunorecepto;rtyrosine basedinhibitorymotifs，ITIMs)，在胞外存在免疫球蛋白超家族區域。與其他免疫球蛋 白超家族相比，siglecs的特性是其高特異性的配體唾液酸化的碳水化合物，不同于大部 分其他免疫受體結合蛋白。人類已經發現14種siglec:唾液酸粘附素（sigleclCD169)， CD22(siglec2)，CD33(siglec3)和髓憐脂相關的糖蛋白（MAGsiglec4)W及新近的cd33相 關的siglec(siglec5-ll)。除了siglec4表達于神經細胞，大部分siglecs家族表達于造 血細胞。 唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素9 (siglec9)是I型跨膜蛋白，免疫球蛋白超級族 的重要成員，主要是由胞外一個N末端的V區和兩個C區免疫球蛋白樣結構域，跨膜區和胞 質內區構成，N-末端免疫球蛋白樣結構域V區介導唾液酸（SIA)的識別，胞質內區含有兩個 免疫酪氨酸抑制基序（ITIM)。近膜基序ITIM酪氨酸憐酸化，募集抑制性憐酸酶類，如Src 同源區2包括酪氨酸憐酸醋酶1 (SHP-1)、SHP-2和SH2肌醇憐酸酶（SHIP)，從而介導下游 酪氨酸激酶憐酸化，并向胞內傳遞抑制性或是致死性信號。 陽0化]Siglec-9在中性粒細胞和單核細胞高表達，在NK細胞、CD4+和CD8叮細胞的某些 亞群低表達。在骨髓造血干細胞分化的中晚期，中幼粒細胞膜表面即可出現Siglec-9的表 達，Siglec-9參與中性粒細胞的分化、發育和死亡等多個生理過程，是調節中性粒細胞固有 免疫的重要功能受體。肺組織大量嗜酸性粒細胞浸潤伴中性粒細胞增多是重癥哮喘重要的 病理生理特點，抗Siglec-9抗體的替代治療兼顧兩者PCD，可能在重癥哮喘、慢性阻塞性肺 病、自身免疫性疾病、腫瘤等疾病的治療中具有潛在的治療價值。
技術實現思路
解決的技術問題：本專利技術提供一種人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的 抗體IgG及其應用。 陽007] 技術方案：人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG，所述抗體的\ 鏈的互補決定區具有W下的CDRs氨基酸序列： 沈QIDNO. 10 所示的Vl-CDR1 ; 沈QIDNO. 11 所示的Vl-CDR2 ; SEQIDNO. 12 所示的Vl_CDR3 ; 并且所述抗體的Vh鏈的互補決定區具有W下的CDRs氨基酸序列： 沈QIDNO. 3 所示的Vh-CDR1 ; 沈QIDNO. 4 所示的Vh-CDR2 ; 沈QIDNO. 5 所示的Vh-CDR3。 人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG，重鏈可變區的氨基酸序列 如SEQIDNO. 2所示；輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQIDNO. 9所示。W及上述序列經一 個或多個氨基酸添加、刪除、替換、修飾的保守性突變而獲得的保守性變異體。 人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG，重鏈恒定區的氨基酸序列 如SEQIDNO. 7所示；輕鏈恒定區的氨基酸序列如SEQIDNO. 14所示。W及上述序列經一 個或多個氨基酸添加、刪除、替換、修飾的保守性突變而獲得的保守性變異體。 編碼人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG的核巧酸序列，編碼重 鏈可變區的核酸序列為SEQIDNO. 1所示，編碼輕鏈可變區的核酸序列為SEQIDNO. 8所 /J、- 〇 編碼人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG的核巧酸序列，編碼重 鏈恒定區的核酸序列為SEQIDNO. 6所示，編碼輕鏈恒定區的核酸序列為SEQIDNO. 13所 /J、-〇 上述人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG在制備預防或治療重 癥哮喘、慢性阻塞性肺病、自身免疫性疾病和/或腫瘤藥物中的應用。 一種預防或治療重癥哮喘的藥物，有效成分為所述的人源抗唾液酸結合免疫球蛋 白樣凝集素-9的抗體IgG。 一種預防或治療慢性阻塞性肺病的藥物，有效成分為所述的人源抗唾液酸結合免 疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG。 一種預防或治療自身免疫性疾病的藥物，有效成分為所述的人源抗唾液酸結合免 疫球蛋白樣凝集素-9的抗體IgG。 一種預防或治療腫瘤的藥物，有效成分為所述的人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣 凝集素-9的抗體IgG。 有益效果：本專利技術提供了一種具有高保護性、高特異性、良好親和力的抗唾液酸結 合免疫球蛋白樣凝集素-9的人源單克隆抗體。對該全分子人源抗體做功能鑒定，結果顯示 該人源抗體能夠與唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9特異性結合；體外細胞實驗結果證 實，人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9抗體能夠有效誘導唾液酸結合免疫球蛋白 樣凝集素-9陽性細胞的調亡，抑制細胞因子的分泌，因此本專利技術的單克隆抗體可應用于重 癥哮喘、慢性阻塞性肺病、自身免疫性疾病、腫瘤等相關疾病的臨床治療及預防。【附圖說明】 圖1純化后抗體IgG的SDS-PAGE檢測； 陽0%] 圖2抗Siglec-9抗體的ELISA檢測；圖 3 抗Siglec-9 抗體的Westernblot檢測； 圖4抗Siglec-9抗體與抗原結合的親和力檢測； 陽029] 圖5抗Siglec-9抗體誘導的中性粒細胞調亡檢測； 圖6FACS檢測抗Siglec-9抗體誘導的中性粒細胞R0S。【具體實施方式】 需要說明的是，該抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區均為人源抗體，并將其與人源 抗體的恒定區連接，因此稱之為全分子人源抗體。 本專利技術W唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9為祀分子，在隧菌體抗體庫技術的 基礎上制備人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-9抗體IgG。下面結合具體實施例來進 一步描述本專利技術，本專利技術的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但是應理解所述實施例 僅是范例性的，不對本專利技術的保護范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解本文檔來自技高網...
【技術保護點】
人源抗唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素?9的抗體IgG，其特征在于：所述抗體的VL鏈的互補決定區具有以下的CDRs氨基酸序列：SEQ?ID?NO.10所示的VL?CDR1；SEQ?ID?NO.11所示的VL?CDR2；SEQ?ID?NO.12所示的VL?CDR3；并且所述抗體的VH鏈的互補決定區具有以下的CDRs氨基酸序列：SEQ?ID?NO.3所示的VH?CDR1；SEQ?ID?NO.4所示的VH?CDR2；SEQ?ID?NO.5所示的VH?CDR3。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：周林福，朱進，陳子，王怡雯，
申請(專利權)人：朱進，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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