一種西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括如下步驟：(1)取西南鳳尾蕨的成熟孢子作為外植體進(jìn)行消毒；(2)將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出原葉體；(3)將原葉體置于MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)獲得分化出苗的孢子體；(4)將所述分化出苗的孢子體置于1/2MS生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)得到完整的生根苗。(5)取完整的生根苗進(jìn)行煉苗后移栽至育苗大棚。采用本發(fā)明專利技術(shù)所述方法得到的植株粗壯、成活率高，能夠在短期內(nèi)提供大量優(yōu)質(zhì)的、適合栽培的西南鳳尾蕨種苗，有效的解決西南鳳尾蕨規(guī)模化育苗的問題。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖的方法
本專利技術(shù)涉及一種植物組織培養(yǎng)快速繁殖方法，特別是一種西南鳳尾組織培養(yǎng)快速繁殖的方法。
技術(shù)介紹
西南鳳尾蕨，為鳳尾蕨科鳳尾蕨屬西南鳳尾蕨(Pteriswallichiana)大型陸生植物，生于海拔800～2000m的林下溝谷或林緣。分布于臺灣、廣東、廣西、貴州、海南等地。味苦、澀，性涼。具有清熱止痢，定驚，止血的功能。主治痢疾，小兒驚風(fēng)，外傷出血等癥。西南鳳尾蕨葉形優(yōu)美、葉色青翠碧綠，具有較高的園林觀賞價值和一定的藥用價值。藥用蕨類植物含有生物堿、黃酮類、酚類等多種活性物質(zhì)，對許多疾病有明顯的治療作用。隨著觀賞植物的發(fā)展和對蕨類藥用植物的利用，人們對蕨類植物的需求量日益增大。蕨類傳統(tǒng)的繁殖方法主要是依靠孢子繁殖和分株繁殖，而孢子繁殖在自然環(huán)境中的成苗率很低，分株繁殖則需要時間長并且得到的苗數(shù)量少，不能在短期內(nèi)滿足大量種苗的需求。目前，由于繁育技術(shù)不過關(guān)，主要是通過野外采挖獲得，而野外采挖對野生蕨類植物資源造成嚴(yán)重的破壞，人類活動的干擾加之植物本身的原因使蕨類資源受到威脅。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，能夠有效縮短西南鳳尾蕨的生產(chǎn)周期，提高種苗質(zhì)量，減低生產(chǎn)成本，滿足西南鳳尾蕨生產(chǎn)上的需要。本專利技術(shù)通過以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的：一種西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：(1)外植體的選擇和消毒：取西南鳳尾蕨的成熟孢子作為外植體，將外植體在流水下緩慢沖洗，除去表面的污垢，放入燒杯中，先用2v/v％的洗潔精液浸泡15min后，再用流水沖洗10min，將外植體移至超凈工作臺上，用75v/v％的酒精表面消毒15s，再用添加了1-2滴吐溫-20的100ml濃度為0.1v/v％HgC12消毒8～15min，無菌水浸泡3次，用無菌濾紙吸干外植體表面水分后進(jìn)行接種，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；(2)孢子誘導(dǎo)：將步驟(1)得到的外植體接種到MS孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m-2·s-1，光照時間12h·d-1，離體誘導(dǎo)20d，孢子萌發(fā)獲得原葉體，其中MS孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加0.5～1.0mg/L的6-BA、0.1～2.0mg/L的NAA，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(3)增殖壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)得到的原葉體接種到增殖壯苗一體化的MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m-2·s-1，光照時間為12h·d-1的條件下培養(yǎng)，得到分化出苗的孢子體，所述的增殖壯苗一體化的MS培養(yǎng)基中還添加0.5～2.5mg/L的6-BA、0.1～2.0mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的孢子體接種到1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m-2·s-1，光照時間為12h·d-1的條件下培養(yǎng)，獲得根系發(fā)達(dá)的生根苗，其中1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0～0.5mg/L的6-BA、0～0.5mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖和4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(5)生根苗的煉苗與移栽：將步驟(4)中得到的生根苗放在的大棚內(nèi)，將瓶蓋打開，煉苗3d，取出生根苗，洗凈根部的培養(yǎng)基，于陰天傍晚移栽至平整精耕的育苗床上，育苗要求相對濕度為90～95％，溫度為23～30℃，光照為自然光，大棚上部覆蓋一層遮陽網(wǎng)，遮光度為15～30％。所述MS為MS基本培養(yǎng)基，BA為6-芐基腺嘌呤，NAA為萘乙酸，AC為活性炭。本專利技術(shù)的突出優(yōu)點(diǎn)在于：1、通過孢子離體誘導(dǎo)培養(yǎng)出無菌苗，在短時間內(nèi)培育出大量長勢良好的可供移栽的西南鳳尾蕨幼苗，提供優(yōu)質(zhì)種苗，滿足生產(chǎn)上的需要。2、通過增殖壯苗一體化的培養(yǎng)基，進(jìn)行西南鳳尾蕨的規(guī)劃育苗，縮短了培養(yǎng)時間，減少培養(yǎng)步驟，降低了培養(yǎng)成本，提高了西南鳳尾蕨組培種苗的生產(chǎn)效率。3、在增殖壯苗一體化的培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得分化出苗的孢子體健康粗壯、顏色翠綠、無玻璃化現(xiàn)象，接種到生根培養(yǎng)基上生根情況良好，生根率達(dá)到90％以上。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本專利技術(shù)的技術(shù)方案進(jìn)一步說明。實施例1本專利技術(shù)所述的西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個實例，包括如下步驟：(1)外植體的選擇和消毒：取西南鳳尾蕨的成熟孢子作為外植體，將外植體在流水下緩慢沖洗，除去表面的污垢，放入燒杯中，先用2v/v％的洗潔精液浸泡15min后，再用流水沖洗10min，將外植體移至超凈工作臺上，用75v/v％的酒精表面消毒15s，再用添加了1-2滴吐溫-20的100ml濃度為0.1v/v％HgC12消毒8～15min，無菌水浸泡3次，用無菌濾紙吸干外植體表面水分后進(jìn)行接種，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；(2)孢子誘導(dǎo)：將步驟(1)得到的外植體接種到MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m-2·s-1，光照時間12h·d-1，離體誘導(dǎo)20d，孢子萌發(fā)獲得原葉體。所述的孢子MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加0.5mg/L的6-BA、1.0mg/L的NAA，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，誘導(dǎo)率為45％；(3)增殖壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)得到的原葉體接種到增殖壯苗一體化的MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m-2·s-1，光照時間為12h·d-1的條件下培養(yǎng)，得到分化出苗的孢子體，所述的增殖壯苗一體化的MS培養(yǎng)基中還添加1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，增殖倍數(shù)為5.53；(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的孢子體接種到1/2MS生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m-2·s-1，光照時間為12h·d-1的條件下培養(yǎng)，獲得根系發(fā)達(dá)的生根苗，其中1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖和4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(5)生根苗的煉苗與移栽：將步驟(4)中得到的生根苗取出20瓶，每瓶10株，共200株，在大棚內(nèi)打開瓶蓋，向瓶中加入適量的水，煉苗3d。洗凈根部殘留培養(yǎng)基后統(tǒng)計生根植株為181株，生根率為90.5％，于陰天傍晚將181株生根苗移栽至育苗大棚，大棚內(nèi)濕度為90～95％，溫度為23～30℃，光照為自然光，大棚上部覆蓋一層遮陽網(wǎng)，遮光度為15～30％。實施例2本專利技術(shù)所述的西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個實例，包括如下步驟：(1)外植體的選擇和消毒：取西南鳳尾蕨的成熟孢子作為外植體，將外植體在流水下緩慢沖洗，除去表面的污垢，放入燒杯中，先用2v/v％的洗潔精液浸泡15min后，再用流水沖洗10min，將外植體移至超凈工作臺上，用75v/v％的酒精表面消毒15s，再用添加了1-2滴吐溫-20的100ml濃度為0.1v/v％HgC12消毒8～15min，無菌水浸泡3次，用無菌濾紙吸干外植體表面水分后進(jìn)行接種，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；(2)孢子誘本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：(1)外植體的選擇和消毒：取西南鳳尾蕨的成熟孢子作為外植體，將外植體在流水下緩慢沖洗，除去表面的污垢，放入燒杯中，先用2v/v％的洗潔精液浸泡15min后，再用流水沖洗10min，將外植體移至超凈工作臺上，用75v/v％的酒精表面消毒15s，再用添加了1?2滴吐溫?20的100ml濃度為0.1v/v％HgC12消毒8～15min，無菌水浸泡3次，用無菌濾紙吸干外植體表面水分后進(jìn)行接種，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；(2)孢子誘導(dǎo)：將步驟(1)得到的外植體接種到MS孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m?2·s?1，光照時間12h·d?1，離體誘導(dǎo)20d，孢子萌發(fā)獲得原葉體，其中MS孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加0.5～1.0mg/L的6?BA、0.1～2.0mg/L的NAA，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(3)增殖壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)得到的原葉體接種到增殖壯苗一體化的MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m?2·s?1，光照時間為12h·d?1的條件下培養(yǎng)，得到分化出苗的孢子體，所述的增殖壯苗一體化的MS培養(yǎng)基中還添加0.5～2.5mg/L的6?BA、0.1～2.0mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的孢子體接種到1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m?2·s?1，光照時間為12h·d?1的條件下培養(yǎng)，獲得根系發(fā)達(dá)的生根苗，其中1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0～0.5mg/L的6?BA、0～0.5mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖和4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(5)生根苗的煉苗與移栽：將步驟(4)中得到的生根苗放在的大棚內(nèi)，將瓶蓋打開，煉苗3d，取出生根苗，洗凈根部的培養(yǎng)基，于陰天傍晚移栽至平整精耕的育苗床上，育苗要求相對濕度為90～95％，溫度為23～30℃，光照為自然光，大棚上部覆蓋一層遮陽網(wǎng)，遮光度為15～30％。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種西南鳳尾蕨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：(1)外植體的選擇和消毒：取西南鳳尾蕨的成熟孢子作為外植體，將外植體在流水下緩慢沖洗，除去表面的污垢，放入燒杯中，先用2v/v％的洗潔精液浸泡15min后，再用流水沖洗10min，將外植體移至超凈工作臺上，用75v/v％的酒精表面消毒15s，再用添加了1-2滴吐溫-20的100ml濃度為0.1v/v％HgCl2消毒8～15min，無菌水浸泡3次，用無菌濾紙吸干外植體表面水分后進(jìn)行接種，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；(2)孢子誘導(dǎo)：將步驟(1)得到的外植體接種到MS孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為22～28℃，光照強(qiáng)度20～30μmol·m-2·s-1，光照時間12h·d-1，離體誘導(dǎo)20d，孢子萌發(fā)獲得原葉體，其中MS孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加0.5～1.0mg/L的6-BA、0.1～2.0mg/L的NAA，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；(3)增殖壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)得到的原葉體接種到增殖壯苗一體化的MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王一諾，韋坤華，韋瑩，李翠，李林軒，李磊，肖冬，
申請(專利權(quán))人：廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，
類型：發(fā)明
國別省市：廣西;45
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。