一種能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用的化合物制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種化合物，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述化合物均能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用，具有抗流感病毒的功能。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種化合物，具體涉及一種能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用的化合物。
技術(shù)介紹
流感通過常規(guī)的季節(jié)性流行和在全球范圍的大流行在人群中造成相當(dāng)?shù)陌l(fā)病率和一定的死亡率。由于流感病毒可以通過基因突變抑或在不同亞型間基因重組來逃避疫苗的作用以及對抗藥物的抗病毒效果。因此，目前亟需新的藥物靶點和創(chuàng)新性的治療策略來推進抗流感病毒的療法。相關(guān)實施例揭示，高度保守的流感病毒蛋白與蛋白間相互作用是抗流感病毒藥物開發(fā)的潛在目標。流感病毒RNA聚合酶(RdRp)包含了PB1、PB2和PA三個亞基，并負責(zé)病毒基因組的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。在進入宿主的細胞核發(fā)揮功能之前,這三個亞基彼此間通過非共價鍵形成三元復(fù)合體。其中主要的蛋白-蛋白相互作用是通過PB1亞基的氨基端結(jié)構(gòu)域(PB1N)和PA亞基的羧基端結(jié)構(gòu)域(PAC)結(jié)合以及PB1亞基的羧基端結(jié)構(gòu)域(PB1C)和PB2亞基的氨基端結(jié)構(gòu)域(PB2N)結(jié)合構(gòu)成。PAC與PB1N的共結(jié)晶結(jié)構(gòu)已被成功解析。初略地說，PAC可以形成一個類似于“龍頭”的結(jié)構(gòu)，而“龍頭”的上下顎之間恰好形成了一個疏水性的凹槽。于是，PB1亞基通過其氨基端的首25個氨基酸多肽，插入“上下顎”得以和龍頭結(jié)合在一起。因此，PAC“龍頭”的“上下顎”成為了潛在的藥物靶點。通常來說，蛋白質(zhì)之間的相互作用需要較大的表面積和較多的氨基酸位點接觸以實現(xiàn)緊密的連接。不同的是，在PAC與PB1N復(fù)合體的相互作用中，只需要少數(shù)的氨基酸位點參與其中以貢獻大部分結(jié)合所需的自由能，這使得小分子化合物抑制劑的成藥成為可能。另外，相關(guān)實施例已經(jīng)表明替換PAC或者PB1N結(jié)構(gòu)域中參與蛋白相互作用的關(guān)鍵氨基酸位點將顯著抑制整個RNA聚合酶的活性。所以，由PAC-PB1N結(jié)構(gòu)域篩選而來的抗病毒藥物所誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥毒株的可能性會大大降低。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處而提供了一種化合物，所述化合物能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用，本專利技術(shù)還提供了所述化合物的用途。為實現(xiàn)上述目的，所采取的技術(shù)方案：一種能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用的化合物，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：所述式(Ⅱ)所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：所述式(Ⅲ)所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：將上述所述式(Ⅰ)所示的化合物命名為PAC-3，將上述所述式(Ⅱ)所示的化合物命名為PAC-3-A-1，將上述所述式(Ⅲ)所示的化合物命名為PAC-3-A-2，本專利技術(shù)所述式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)所示的化合物均對甲型流感病毒包括H1N1、H3N2、H5N1、H7N7、H7N9和H9N2等亞型提供廣譜抗病毒作用。BALB/c小鼠在感染致命劑量的H1N1流感病毒后接受PAC-3-A-1鼻腔給藥，能夠顯著提高存活率并減少肺組織中的病毒量。本專利技術(shù)提供了上述所述的化合物在制備抗流感病毒的藥物中的用途。優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型流感病毒。本專利技術(shù)的有益效果在于：本專利技術(shù)提供了一種化合物，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述化合物均能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用，具有抗流感病毒的功能。附圖說明圖1為本專利技術(shù)實施例1中本專利技術(shù)所述化合物PAC-3和PAC-3-A-1的體外抗病毒效果圖；圖2為本專利技術(shù)實施例1中本專利技術(shù)所述化合物PAC-3-A-1的體內(nèi)抗病毒效果圖；圖3為本專利技術(shù)實施例1中本專利技術(shù)所述化合物PAC-3-A-1的抗病毒機制相關(guān)圖。具體實施方式為更好的說明本專利技術(shù)的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點，下面將結(jié)合具體實施例對本專利技術(shù)作進一步說明。實施例11、材料和方法1.1細胞、病毒犬腎細胞(MDCK)和人胚腎細胞(HEK-293T)在包含有10％熱滅活胎牛血清(FBS)，50單位/毫升青霉素和50微克/毫升鏈霉素(P/S)的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。MDCK在病毒感染后，在含有1微克/毫升的TPCK胰蛋白酶但不含有胎牛血清的MEM中培養(yǎng)。總共8株/6種亞型的流感病毒株，即A/HK/415742/09(H1N1)、A/HongKong/1/1968(H3N2)、A/Shenzhen/406H/2006(H5N1)、A/HongKong/156/97(H5N1)、A/Vietnam/1194/2004(H5N1)、A/Netherlands/219/2003(H7N7)、A/Anhui/1/2013(H7N9)和A/HK/1073/1999(H9N2)分別在MDCK細胞中增殖并在本研究中使用。此外，還有一株在BALB/c小鼠體內(nèi)多次傳代獲得的小鼠致死性流感病毒株A/HK/415742Md/09(H1N1)，是在雞胚中增殖并應(yīng)用于本次研究的動物實驗的。病毒的滴度通過空斑試驗(plaqueassay)測定后，分裝并保存在-80攝氏度。所有與活病毒相關(guān)試驗是在生物安全2級或3級設(shè)施中進行的。該實驗所涉及的多肽購自合肥賽曼諾生物科技有限公司(中國安徽)。1.2選擇性指數(shù)選擇性指數(shù)(selectivityindex)是通過50％的細胞毒性濃度(CC50)除以50％的病毒抑制濃度(IC50)計算而來的，該指標數(shù)值越高則指示該藥物有越好的臨床應(yīng)用前景。我們通過MTT法測定了本專利技術(shù)所述化合物的CC50，再通過空斑減數(shù)試驗確定IC50值，最終得到了本專利技術(shù)所述化合物的選擇性指數(shù)。1.3多周期病毒生長試驗MDCK細胞在接種了感染復(fù)數(shù)(MOI)為0.002的流感H1N1病毒后，在含有20微摩的本專利技術(shù)所述化合物以及1微克/毫升TPCK胰蛋白酶的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。感染后0、6、21、25、32、47和54小時后，收集病毒上清液并使用空斑法測定病毒滴度。1.4交叉保護力試驗本專利技術(shù)所述化合物針對多個亞型的流感病毒，包括甲型H1N1、H3N2、H5N1、H7N7、H7N9和H9N2的抗病毒效果也進行了測試。簡單地說，MDCK細胞在接種0.002個MOI的流感病毒后1小時，用PBS洗凈，并將培養(yǎng)基置換成新鮮的含有不同濃度(20、5、1.25、0.31微摩)本專利技術(shù)所述化合物的MEM培養(yǎng)基。病毒接種24小時候后，收集細胞上清液，并采用反轉(zhuǎn)錄-實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-qPCR)技術(shù)測定病毒的滴度。1.5本專利技術(shù)所述化合物體內(nèi)抗病毒療效評估本實驗采用6-8周齡本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用的化合物，其特征在于，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：所述式(Ⅱ)所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：所述式(Ⅲ)所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：

【技術(shù)特征摘要】
1.一種能夠抑制流感病毒聚合酶亞基PA與PB1相互作用的化合物，其特
征在于，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)
所示的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：
所述式(Ⅱ)所示的化合物的...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：鄭伯建，袁碩峰，高一村，周婕，吳子柏，
申請(專利權(quán))人：香港神農(nóng)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：中國香港;81