一種卡貝縮宮素的純化方法技術

本發明專利技術公開了一種合成卡貝縮宮素的純化方法，該方法包括了采用半透膜透析純化與反相色譜純化相結合的純化方案，最終得到了純度大于99.5%的卡貝縮宮素。半透膜透析純化操作簡單，無需特殊設備，半透膜可重復使用，有利于降低成本。同時，采用半透膜技術進行初步純化，無需濃縮即可進行色譜純化，減少高溫濃縮步驟，降低多肽高溫降解幾率，確保收率和純度。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種多肽類藥物的純化方法，具體涉及一種合成卡貝縮宮素的純化方 法。
技術介紹
卡貝縮宮素為一種環狀多肽，結構式如下。 化學結構簡式如下。 卡貝縮宮素是一種合成的具有激動劑性質的長效催產素九肽類似物，對非妊娠的 子宮沒有作用，但是對妊娠的子宮和剛生產的子宮具有有效的子宮收縮作用，其臨床和藥 理特性與天然產生的催產素類似。像催產素一樣，卡貝縮宮素與子宮平滑肌的催產素受體 結合，引起子宮的節律性收縮，在原有的收縮基礎上，增加其頻率和增加子宮張力。在非妊 娠狀態下，子宮的催產素受體含量很低，在妊娠期間增加，分娩時達高峰。硬膜外或腰麻下 剖腹產術后可以立即單劑量靜脈給藥，以預防子宮張力不足和產后出血。 不論是靜脈注射還是肌肉注射卡貝縮宮素后，子宮迅速收縮，可在兩分鐘內達到 一個明確強度。單劑量靜脈注射卡貝縮宮素對子宮的活性作用可持續大約一個小時，因此 足以預防剛生產后的產后出血。產后給予卡貝縮宮素后，在收縮的頻率與幅度方面都比催 產素要長，并且對有出血傾向、需額外使用縮宮素者，卡貝縮宮素耐受性好，與縮宮素一樣 有效甚至更有效。目前臨床常用的促進子宮縮收藥物麥角新堿，會導致惡心、嘔吐、高血壓 和冠脈痙攣等。卡貝縮宮素是一種長效的類催產素藥物。與麥角新堿相比，使用卡貝縮宮 素在預防陰道分娩婦女的產后出血方面同樣有效，并且惡心、嘔吐、高血壓的發生比例顯著 降低。因此，卡貝縮宮素在臨床應用上，具有廣闊的市場前景。 卡貝縮宮素常用純化方法通常包括反相高效液相色譜法、凝膠法、離子交換法等， 采用任何一種單一方法，都很難分離得到高純產品（> 99%)，或者收率較低（小于50%)。目 前，很少有關于其分離純化方面的研究報道，程生強，馬亞平等在其研究中報道，以磷酸緩 沖液作為洗脫液，采用反相高效液相色譜法純化卡貝縮宮素，并采用離子交換法轉鹽，得到 醋酸卡貝縮宮素，收率為70%_75%，目的肽純度為98%。
技術實現思路
為了克服現有技術存在的收率低、純度低和純化困難的技術問題，本專利技術人進行 了大量的研究，從而完成了本專利技術。 本專利技術通過以下技術方案實現，具體而言，涉及，該方 法可制備出純度大于99%，單個雜質小于0. 1%的藥用原料藥。其特征在于，所述的方法包括 以下步驟： 步驟1、將卡貝縮宮素粗品用1%醋酸溶液溶解，制成溶液； 步驟2、將卡貝縮宮素的乙酸溶液裝入到半透膜中，置于緩沖液中，于20~30°C下攪拌 滲濾至緩沖液pH=2. 0~3. 0 ; 所述的半透膜為纖維素酯膜（即CE膜）或再生纖維素膜（即RC膜)，截留分子量為500 道爾頓。所述的緩沖液為醋酸鹽緩沖液（PH3. 5)，緩沖液與卡貝縮宮素的乙酸溶液的體積比 為 30~40:1 ; 步驟3、將含卡貝縮宮素的乙酸溶液的半透膜轉至純化水中，于20~30°C下攪拌滲濾至 半透膜內溶液pH=3. 5~4. 5,其中純化水與卡貝縮宮素的乙酸溶液的體積比為50~60:1 ; 步驟4、將半透膜中的卡貝縮宮素溶液取出，采用反相色譜法進行純化，收集含卡貝縮 宮素的洗脫餾分； 步驟5、將含卡貝縮宮素的洗脫餾分濃縮出75~85%，剩余物倒入凍干盤中，放入凍干機 進行冷凍干燥，得到卡貝縮宮素純品。 所述的濃縮條件為蒸餾溫度小于60°C，真空度為0. 085~0. 095Mpa。 根據上述的，步驟4中，所述的反向色譜法進行純化， 純化的具體色譜條件為： 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，柱子直徑和長度為50mmX 250mm 流動相：A : 1%冰醋酸水溶液 B:乙腈 檢測波長：230nm 流速：80ml/min 洗脫梯度： 根據上述的，步驟5中，所述的冷凍干燥，具體操作過 程為：預凍至-45~-40°c后保溫2h，開真空栗抽真空并使真空度恒定在IOOKPa以下。期 間自然升溫，真空干燥12h。 本專利技術的積極有益效果。 1、通過半透膜技術，將粗品中的部分小分子雜質及溶劑除去，簡化純化步驟。 2、采用半透膜技術進行初步純化，操作簡單，無需特殊設備，半透膜可重復使用， 有利于降低成本。同時，采用半透膜技術進行初步純化，無需濃縮即可進行色譜純化，減少 高溫濃縮步驟，降低多肽高溫降解幾率，確保收率和純度。 3、采用半透膜純化和反向色譜法純化相結合工藝，確保成品符合純度大于99%，單 個雜質小于0. 1%的藥用原料藥標準。【附圖說明】： 圖1本專利技術實施例1所得卡貝縮宮素的有關物質圖譜。【具體實施方式】 。 下面結合具體實施例對本專利技術進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術 人員進一步理解本專利技術，但不以任何形式限制本專利技術。應當指出的是，對本領域的普通技術 人員來說，在不脫離本專利技術構思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本專利技術 的保護范圍。 實施例1。 步驟1、取5g卡貝縮宮素粗肽，加入1%醋酸溶液50ml，配制成10%卡貝縮宮素粗 肽溶液。 步驟2、將卡貝縮宮素的乙酸溶液裝入到截留分子量為500道爾頓RC半透膜中，裝 量為半透膜裝量體積的70%，置于2L醋酸鹽緩沖液（pH3. 5)緩沖液中，于20~30°C下攪拌滲 濾至緩沖液pH=2. 0~3. 0。 步驟3、將含卡貝縮宮素的乙酸溶液的半透膜轉至3L純化水中，于20~30°C下攪拌 滲濾至半透膜袋內溶液pH=3. 5~4. 5。 步驟4、將半透膜中的卡貝縮宮素溶液取出，采用反相色譜法進行純化，收集含卡 貝縮宮素的洗脫餾分，具體色譜條件如下； 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，柱子直徑和長度為50mmX 250mm 流動相：A : 1%冰醋酸水溶液 B:乙腈 檢測波長：230nm 流速：80ml/min 洗脫梯度： 步驟5、將含卡貝縮宮素的洗脫液濃縮出75~85%，控制溫度小于60°C，真空度為 0. 09Mpa，濃縮結束后，將剩余物倒入凍干盤中，放入凍干機中，預凍至-45~-40°C后保溫 2h，開真空栗抽真空并使真空度恒定在IOOKPa以下。期間自然升溫，真空干燥12h，冷凍干 燥結束后，得到卡貝縮宮素純品。 實施例2。 步驟1、取5g卡貝縮宮素粗肽，加入1%醋酸溶液50ml，配制成10%卡貝縮宮素粗 肽溶液。 步驟2、將卡貝縮宮素的乙酸溶液裝入到截留分子量為500道爾頓CE半透膜中，裝 量為半透膜裝量體積的70%，置于2L醋酸鹽緩沖液（pH3. 5)緩沖液中，于20~30°C下攪拌滲 濾至緩沖液pH=2. 0~3. 0。 步驟3、將含卡貝縮宮素的乙酸溶液的半透膜轉至3L純化水中，于20~30°C下攪拌 滲濾至半透膜袋內溶液pH=3. 5~4. 5。 步驟4、將半透膜中的卡貝縮宮素溶液取出，采用反相色譜法進行純化，收集含卡 貝縮宮素的洗脫餾分，具體色譜條件如下； 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，柱子直徑和長度為50mmX 250mm 流動相：A : 1%冰醋酸水溶液 B:乙腈 檢測波長：230nm 流速：80ml/min 洗脫梯度： 步驟5、將含卡貝縮宮素的洗脫液濃縮出75~85%，控制溫度小于60°C，真空度大 于-〇. 095Mpa，濃縮結束后，將剩余物倒入凍干盤中，放入凍干機中，預凍至-45~_40°C后 保溫2h，開真空栗抽真空并使真空度恒定在IOOKPa以下。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種卡貝縮宮素的純化方法，該方法可制備出純度大于99%，單個雜質小于0.1%的藥用原料藥，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：步驟1、將卡貝縮宮素粗品用1%醋酸溶液溶解，制成溶液；步驟2、將卡貝縮宮素的乙酸溶液裝入到半透膜中，置于緩沖液中，于20~30℃下攪拌滲濾至緩沖液pH=2.0~3.0；步驟3、將含卡貝縮宮素的乙酸溶液的半透膜轉至純化水中，于20~30℃下攪拌滲濾至半透膜內溶液pH=3.5~4.5，其中純化水與卡貝縮宮素的乙酸溶液的體積比為50~60:1；步驟4、將半透膜中的卡貝縮宮素溶液取出，采用反相色譜法進行純化，收集含卡貝縮宮素的洗脫餾分；步驟5、將含卡貝縮宮素的洗脫餾分濃縮出75~85%，剩余物倒入凍干盤中，放入凍干機進行冷凍干燥，得到卡貝縮宮素純品。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：毛影，李運鐸，李沁沁，朱贊梅，張佳美，婁麗麗，
申請(專利權)人：鄭州大明藥物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：河南;41