本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種檢測屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的試劑盒及方法，試劑盒包括校準品、質(zhì)控品、生物素標記的屋塵螨過敏原溶液、堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE二抗溶液、鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液，利用所述試劑盒對屋塵螨過敏原特異性IgE抗體進行檢測。通過上述方式，本發(fā)明專利技術(shù)試劑盒中各試劑組分穩(wěn)定性良好，有效期可至一年以上，檢測靈敏度高、特異性能好、變異小。經(jīng)過大量實驗的工藝優(yōu)化，得到完善統(tǒng)一工藝，并嚴格按照標準生產(chǎn)操作規(guī)程和質(zhì)量控制規(guī)程進行生產(chǎn)。用戶僅需按照操作說明進行規(guī)范操作，就可得到可靠的結(jié)果。在臨床研究中與國外進口試劑的符合相關(guān)性高達90％以上，且費用僅為其1/2。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于醫(yī)療器械生物類免疫體外診斷領(lǐng)域，特別是設(shè)及一種檢測過敏原特異 性I姐抗體屋塵蛾的試劑盒及方法。
技術(shù)介紹
I姐抗體介導(dǎo)的I型過敏反應(yīng)性疾病相當普遍，世界各國變態(tài)反應(yīng)疾病的總發(fā)病 率約為15%-30%，我國大約有5-10%的人受過敏原的襲擾，是當前世界性的重大衛(wèi)生學(xué)問 題，被世界衛(wèi)生組織（WHO)列為二十一世紀重點防治的Ξ大疾病之一。 過敏性疾病是患者吸入、攝食入或者注入含有致敏成分的物質(zhì)，即稱為過敏原或 變應(yīng)原Allergen,后觸發(fā)機體的B細胞產(chǎn)生特異性免疫球蛋白E(ImmunoglobulinE， I姐)，從而引發(fā)過敏反應(yīng)(或稱變態(tài)反應(yīng)，Allergy)的疾病及相關(guān)癥狀，如過敏性哮喘、枯草 熱、等麻疹、過敏性鼻炎、濕疹、結(jié)膜炎及胃腸道I型過敏性疾病及嚴重過敏反應(yīng)等。上述過 敏性疾病的發(fā)生，I姐抗體起關(guān)鍵作用。 塵蛾中重要的致敏蛋白組分為Derpi和Derf2。塵蛾既有共同的過敏原組分， 也有種屬特異性的過敏原組分。蛾的一些致敏蛋白組分與無脊椎動物具有廣泛的交叉反應(yīng) 性。 陽〇化]在國內(nèi)，屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體（D1)檢測臨床上主要W國外進口試劑和免 疫組化試劑應(yīng)用為主，國外進口試劑價格非常昂貴，給患者帶來很大的經(jīng)濟負擔，不利于在 基層普及。具有自主知識產(chǎn)權(quán)的國產(chǎn)屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體（D1)免疫化學(xué)發(fā)光檢 測試劑盒目前還沒有。 因此，有待開發(fā)對屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體（D1)檢測靈敏度高與可靠性并能 降低檢測成本的檢測技術(shù)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)主要解決的技術(shù)問題是提供一種屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體的試劑盒 及方法，該試劑盒性能可靠，靈敏度高，線性范圍寬，可配合全自動儀器使用，能提高檢測靈 敏度及可靠性，并降低成本，延長有效期。 提供一種檢測屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體的試劑盒，包括校準品、質(zhì)控品、生物 素標記的屋塵蛾過敏原溶液、堿性憐酸酶標記的鼠抗人I姐二抗溶液、鏈霉親和素標記的 納米磁微粒懸浮液。 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，所述生物素標記的屋塵蛾過敏原溶液的濃度為 0. 1~1. 0ug/ml;所述鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液的濃度為0. 1~1. 0mg/ml;所述 堿性憐酸酶標記的鼠抗人I姐二抗溶液的濃度為0. 1~2. 0ug/ml。 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，所述校準品的濃度為：〇iu/ml、0. 35IU/ml、0. 7 IU/ml、3. 5IU/ml、17. 5IU/ml、50IU/ml、100lU/ml，所述校準品是I姐蛋白與 0.IM、抑值 為7.4的Tris-肥1緩沖液配制得到的；所述質(zhì)控品的濃度為：0. 7IU/ml、17. 5lU/ml，所述 質(zhì)控品是I姐蛋白與0.IM、抑值為7. 4的Tris-HCl緩沖液配制得到的。 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，所述屋塵蛾過敏原為能與人體內(nèi)屋塵蛾特異性I姐 蛋白結(jié)合的抗原，所述生物素標記的屋塵蛾過敏原的配制方法為：將屋塵蛾過敏原按1:20 摩爾比加入到溶于二甲基甲酯胺的生物素中，再用0. 01M、抑值為7. 4的憐酸鹽緩沖液透析 得到。 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，所述標記的鼠抗人I姐二抗為能與人體內(nèi)I姐蛋 白特異結(jié)合的抗體，所述堿性憐酸酶標記的鼠抗人I姐二抗的配制方法為：將濃度為 1. 0-5.Omg/血的堿性憐酸酶溶液與鼠抗人I姐二抗按摩爾比為2-10 :1進行混合后并純 化，得到堿性憐酸酶標記的鼠抗人I姐二抗，所述純化是用抑為8-9的碳酸氨鹽緩沖液平 衡并洗脫，再紫外檢測和記錄純化圖譜，再用0. 05M、抑值為6. 0的MES緩沖液對堿性憐酸 酶標記的鼠抗人I姐抗體稀釋。 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，所述鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液的制備過 程為：將鏈霉親和素標記的納米磁微粒用磁分離器沉淀，再用0. 01M、抑值為7. 4的憐酸鹽 緩沖液重懸，混勻磁分離沉出，并重復(fù)清洗，清洗后的納米磁微粒分散于0. 01M、抑值為7. 4 的憐酸鹽緩沖液。 提供一種納米磁微粒化學(xué)發(fā)光法定量檢測血清屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體的 方法，包括步驟為： (1) 將磁微粒試劑、生物素標記的屋塵蛾過敏原和待檢樣本混勻并反應(yīng)，反應(yīng)后置于磁 場中靜置并去上清，得到第一溶液； (2) 向所述第一溶液中加入堿性憐酸酶標記的鼠抗人I姐二抗混勻并反應(yīng)，反應(yīng)后置 于磁場中靜置并去上清，得到第二溶液； (3) 向所述第二溶液中加入發(fā)光底物并反應(yīng)，測發(fā)光強度； (4) 利用已知濃度的校準品繪制發(fā)光強度標準曲線，根據(jù)步驟（3)得到的發(fā)光強度對照 所述標準曲線，計算得出待測血清樣本中特異性I姐的含量。 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，步驟（1)中所述反應(yīng)的條件為37°C下反應(yīng)15分鐘， 所述靜置的時間為3分鐘；步驟（1)中還包括對所述第一溶液用清洗液進行清洗，置于磁場 中靜置并去上清，清洗重復(fù)2次；步驟（2)中所述反應(yīng)的條件為37°C下反應(yīng)15分鐘，所述靜 置的時間為3分鐘；步驟（2)中還包括對所述第二溶液用清洗液進行清洗，置于磁場中靜置 并去上清，清洗重復(fù)2次；步驟（3)中所述反應(yīng)的條件為37°C下反應(yīng)5分鐘，在化學(xué)發(fā)光分 析/測定儀中測定發(fā)光強度。 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，所述定量檢測方法在全自動化學(xué)發(fā)光儀Lumiray系 列上進行，所述Lumiray系列為Lumiray1200、Lumiray1220、Lumiray1260 或Lumiray 1280ο 在本專利技術(shù)一個較佳實施例中，所述定量檢測方法包括的步驟為： (1) 將所述試劑盒放入全自動化學(xué)發(fā)光儀的試劑倉里并進行識別； (2) 將校準品置于所述全自動化學(xué)發(fā)光儀的儀器樣本倉，識別校準品信息，分配校準品 位置； (3) 將質(zhì)控物或待測樣本置于儀器樣本倉，編輯檢測信息； (4) 啟動運行程序，所有校準品/質(zhì)控物/待測樣本自動進行處理得到結(jié)果。 本專利技術(shù)的有益效果是：本專利技術(shù)的檢測屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體的試劑盒及方 法，試劑盒中各試劑組分穩(wěn)定性良好，有效期可至一年W上，檢測靈敏度高、特異性能好、變 異小。經(jīng)過大量實驗的工藝優(yōu)化，得到完善統(tǒng)一工藝，并嚴格按照標準生產(chǎn)操作規(guī)程和質(zhì)量 控制規(guī)程進行生產(chǎn)。用戶僅需按照操作說明進行規(guī)范操作，就可得到可靠的結(jié)果。在臨床 研究中與國外進口試劑的符合相關(guān)性高達90%W上，且費用僅為其1/2。【附圖說明】 為了更清楚地說明本專利技術(shù)實施例中的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使 用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本專利技術(shù)的一些實施例，對于 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可W根據(jù)運些附圖獲得其它 的附圖，其中： 圖1是本專利技術(shù)的實施例一中檢測屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體的試劑盒的標準曲線 圖； 圖2是本專利技術(shù)的屋塵蛾過敏原特異性I姐抗體（D1)檢測試劑盒與進口試劑的性能對 比圖。【具體實施方式】 下面將對本專利技術(shù)實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施 例僅是本專利技術(shù)的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術(shù)中的實施例，本領(lǐng)域普通 技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本專利技術(shù)保護的范 圍。 實施例一： 提供一種基于納米磁微粒全自動化學(xué)發(fā)光法定量檢測屋塵蛾過敏原特異性I姐抗本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種檢測屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的試劑盒，其特征在于，包括校準品、質(zhì)控品、生物素標記的屋塵螨過敏原溶液、堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE二抗溶液、鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：韓霜，錢林，何曉靜，丁俊榮，羅薇，李慶春，
申請(專利權(quán))人：蘇州浩歐博生物醫(yī)藥有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32
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