一種對11種人參皂苷類成分同時進行定性及定量的方法技術

本發明專利技術涉及一種利用高效液相色譜-蒸發光散射檢測聯用技術對11種人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rg2、Rh1、Ro、Rb1、Rc、Rb2、Rd、Rg3同時進行定性及定量測定的方法。本發明專利技術可用于同時定性及定量測定人參類藥材、飲片及復方制劑中不多于11種人參皂苷類成分。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉一種及利用高效液相-蒸發光散射檢測聯用法 對參附注射液和人參類藥材及相關中藥復方中不多于11種人參皂苷進行同時定性定量測 定的方法。
技術介紹
參附注射液是由紅參和黑順片兩味中藥經現代加工工藝制成的淡黃色或淡黃棕 色的澄明液體，具有回陽救逆，益氣固脫之功效，主要用于陽氣暴脫的厥脫癥(感染性、失血 性、失液性休克等）；也可用于陽虛(氣虛）所致的驚悸、怔忡、喘咳、胃疼、泄瀉、痹癥等。 人參是五加科人參屬植物，具有大補元氣，復脈固脫，補脾益肺，生津止渴，安神益 智之功效，是珍貴的中藥材，與三七、西洋參等著名藥用植物近緣。參附注射液和人參類藥 材含有多種人參皂苷類成分。人參皂苷是三萜皂苷，分為達瑪烷型和齊墩果烷型。達瑪烷類 型包括兩類：人參二醇型（A型)，苷元為20 (S)-原人參二醇，包含人參皂苷Rbl、Rb2、Rb3、 Rc、Rd、Rg3、Rh2等；人參三醇型（B型），苷元為20 (S)_原人參三醇，包含人參皂苷Re、Rgl、 Rg2、Rhl等。齊墩果烷型（C型)，苷元為齊墩果酸。參附注射液質量標準（ZG2013-4)收載 了總皂苷含量測定項，人參總皂苷以人參皂苷Ι^((：54Η92023)計，應為0. 6-1. 8mg。2010年版 《中國藥典》一部人參藥材質量標準收載了 3種人參皂苷含量測定項，其含量限度為本品按 干燥品計算，含人參皂苷Rgl(C42H72014)和人參皂苷Re(C4SHS201S)的總量不得少于0. 30%， 人參皂苷Rbl(C54H92023)不得少于0. 20%。 參附注射液和人參類藥材中含有多種人參阜苷，RbiR是其中的一種，雖然其含量 相對較高，但并不能代表所有人參皂苷，因為不同的人參皂苷其作用不盡相同，如總皂苷不 溶血，A型人參皂苷抗溶血，而B型、C型人參皂苷溶血。因此，建立能夠同時對這些人參皂 苷類成分進行同時定性定量的分析方法對于控制人參類藥材及含有相關藥材的中藥制劑 如參附注射液的質量具有重要意義。 高效液相色譜-二極管陣列檢測技術（HPLC-DAD)常用于各種有紫外吸收的化學 成分的含量測定，但對于無紫外吸收或者紫外吸收弱的化學成分，無法檢測或者檢測靈敏 度差。高效液相色譜-蒸發光檢測聯用技術（PLC-ELSD)對于無紫外吸收或者弱紫外吸收 的化學成分的檢測具有優勢，非常適合于人參皂苷類成分的定性及定量檢測。但是，由于部 分人參皂苷類成分結構非常相似，在高效液相色譜分離中，同時對多種人參皂苷類成分進 行良好分離，相當困難。截止目前，同時對包括Rgl、Re、Rf、Rg2、Rhl、Ro、Rbl、Rc、Rb2、Rd、 Rg3這11種成分進行定性定量的方法未見報道。
技術實現思路
本專利技術涉及一種利用高效液相-蒸發光散射檢測聯用法對參附注射液和人參類 藥材及相關復方制劑中不多于11種人參皂苷進行同時定性定量測定的方法。 其中所述的人參類藥材包括人參、西洋參等含有Rgl、Re、Rf、Rg2、Rhl、Ro、Rbl、 Rc、Rb2、Rd、Rg3這11種成分，或者同時含有這11種成分中任意2種以上成分的中藥材及 其飲片。 其中所述的相關復方制劑指制劑中含有Rgl、Re、Rf、Rg2、Rhl、Ro、Rbl、Rc、Rb2、 Rd、Rg3這11種成分，或者同時含有這11種成分中任意2種以上成分的復方制劑。其中所述的 11 種人參皂苷類成分指Rgl、Re、Rf、Rg2、Rhl、Ro、Rbl、Rc、Rb2、Rd、 Rg3這11中人參皂苷類成分。 下面通過詳細的實驗方法及數據，說明本方法對參附注射液和人參類藥材中不多 于11種人參阜苷進行同時定性定量測定： 儀器、藥品與試劑 1. 1儀器 安捷倫1260高效液相色譜儀（1260四元栗，柱溫箱，自動進樣器，通訊接口），Alltech2000蒸發光散色檢測器（ELSD)，METTLERXS105型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限 公司），超聲波清洗器(南京皇君達超聲電子設備有限公司）； 1. 2藥品與試劑 參附注射液(規格：50mL，四川雅安三九藥業有限公司）； 生曬參、白參、紅參、西洋參(購自河北安國）經北京大學藥學院屠鵬飛教授鑒定； 人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rg2、Rhl、Ro、Rbl、Rc、Rb2、Rd、Rg3 (上海司丹德生物科技有限 公司）乙腈為色譜純(美國Fisher公司），Milli-Q超純水，其他試劑為分析純； 方法與結果 2. 1對照品溶液 精密稱取對照品人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rg2、Rhl、Ro、Rbl、Rc、Rb2、Rd、Rg3適量，分別加 甲醇制成lmg·mL1的對照品儲備液； 2. 2供試品溶液 參附注射液用甲醇稀釋3倍，混勻，用0. 22Mm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得； 取生曬參、白參、紅參、西洋參、高麗參樣品lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲 醇10ml，密塞，稱定重量，浸泡1小時，超聲處理(功率500W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再 稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，用〇. 22μπι微孔濾膜過濾，取續濾 液。生曬參和高麗參樣品溶液用甲醇稀釋2倍，白參和紅參樣品溶液用甲醇稀釋5倍，西洋 參樣品溶液用甲醇稀釋20倍，備用； 2. 3色譜條件及系統適用性 色譜柱：SHISEID0capcellcoreADME(2.lmmX150mm，2.7Mm);流動相為乙臆-0.1% 甲酸水，梯度洗脫條件見表1 ;流速〇. 4mL·π?ηS柱溫45°C;ELSD漂移管穩定95°C;載氣流 速 2. 0L·min\ 進樣量 1〇μL。在此條件下，人參皂苷Rg、Re、Rf、Rg2、RhpRo、RbpRc、Rb2、 Rd、Rg3分離效果良好。參附注射液及人參類藥材中11種人參皂苷HPLC-ELSD色譜圖見圖 1 ： 表1參附注射液及人參類藥材中11種人參皂苷HPLC-ELSD梯度洗脫條件2.4方法學考察 2. 4. 1線性關系考察 將各對照品儲備液按一定比例混合后，配制成系列濃度梯度，精密吸取各濃度梯度混 合對照品溶液ιομL，注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積的對數值為縱坐標，濃度的對 數值為橫坐標，進行線性回歸，繪制標準曲線，以信噪比（S/N= 3)時測得的各對照品濃度 為檢測限，信噪比（S/N= 10)時測得的各對照品濃度為定量限，標準曲線、回歸系數、線性 范圍、檢測限和定量限的測定結果見表2 : 表2 11種人參皂苷的回歸方程、相關系數、線性范圍、定量限和檢測限&g/mL)2. 4. 2精密度 2.4. 2.1日內精密度 精密吸取高、中、低濃度對照品溶液各10KL，分別連續進樣6次，記錄峰面積，通過"表 2線性方程"計算各對照品濃度和各對照品濃度的RSD。日內精密度RSD均小于5% ; 2.4. 2. 2日間精密度 在第1天，第2天，第3天分別精密吸取高、中、低濃度對照品溶液各10μL，每日每濃 度測定3次，記錄峰面積，通過"表2線性方程"計算各對照品濃度和各對照品濃度的RSD。 日間精密度RSD均小于10% ; 日內日間精密度的RSD均小于10%，表明儀器精密度良好； 2. 4. 3重復性 平行制備參附注射液供試品本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種通過高效液相色譜—蒸發光散射檢測技術聯用，對人參類藥材、人參類飲片及復方制劑中不多于11種人參皂苷成分同時進行定性及定量分析的分析技術。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙炳祥，屠鵬飛，宋月林，張娜，史社坡，郝莉，趙云芳，
申請(專利權)人：華潤三九雅安藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：四川;51