與FcRn結合改變的Fc變體制造技術

本發明專利技術涉及包含相對于野生型人Fc區的至少一個修飾的變體Fc區，其中所述修飾選自由下列組成的組：434S、252Y/428L、252Y/434S和428L/434S，并且編號根據EU索引進行。

【技術實現步驟摘要】
與FcRn結合改變的Fc變體本申請是以下申請的分案申請：申請日：2008年12月22日；申請號：200880123009.4；專利技術名稱：同上。本申請根據35U.S.C.§119(e)要求2007年12月26日提交的USSN61/016,793、2008年2月25日提交的USSN61/031,353、2008年4月18日提交的USSN61/046,353、2008年5月2日提交的USSN61/050,172、2008年7月10日提交的USSN61/079,779、和2008年9月22日提交的USSN61/099,178的權益；并且是2007年10月31日提交的USSN11/932,151的部分繼續申請，USSN11/932,151是2006年5月17日提交的USSN11/436,266的部分繼續申請，USSN11/436,266根據35U.S.C.§119(e)要求2007年7月24日提交的USSN60/951,536的權益，并且是2005年11月14日提交的USSN11/274,065的部分繼續申請，USSN11/274,065根據35U.S.C.§119(e)要求下列專利申請的權益：2004年11月12日提交的USSN60/627,763；2005年1月11日提交的USSN,60/642,886；2005年2月2日提交的USSN60/649,508；2005年3月15日提交的USSN60/662,468；2005年4月6日提交的USSN60/669,311；2005年5月16日提交的USSN60/681,607；2005年6月13日提交的USSN60/690,200；2005年7月5日提交的USSN60/696,609；2005年7月27日提交的USSN60/703,018；以及2005年10月12日提交的USSN60/726,453，它們全部通過引用整體并入。
本申請涉及優化的IgG免疫球蛋白變體、用于制備它們的工程化方法、以及它們的應用，尤其是用于治療目的的應用。
技術介紹
抗體是各自與特異性抗原結合的免疫蛋白。在包括人和小鼠在內的大多數哺乳動物中，抗體是由成對的多肽重鏈和輕鏈構成的。每個鏈由各自的免疫球蛋白(Ig)結構域構成，因此將通用術語免疫球蛋白用于這種蛋白。每條鏈由兩個不同的區域構成，這兩個不同的區域稱為可變區和恒定區。輕鏈和重鏈可變區在抗體之間顯示明顯的序列多樣性，并且負責結合靶抗原。恒定區顯示較少的序列多樣性，并且負責結合許多天然蛋白以引發重要的生物化學事件。在人中，有5種不同種類的抗體，包括IgA(它包括IgA1和IgA2亞類)、IgD、IgE、IgG(它包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亞類)、以及IgM。這些抗體種類之間的區別特征為他們的恒定區，盡管V區也可能存在細微的不同。IgG抗體是由兩條重鏈和兩條輕鏈構成的四聚體蛋白。IgG重鏈由四個免疫球蛋白結構域從N-末端至C-末端以VH-CH1-CH2-CH3的順序連接構成，VH-CH1-CH2-CH3分別是指重鏈可變結構域、重鏈恒定結構域1、重鏈恒定結構域2、和重鏈恒定結構域3(也稱為VH-Cγ1-Cγ2-Cγ3，分別是指重鏈可變結構域、γ1恒定結構域、γ2恒定結構域、和γ3恒定結構域)。IgG輕鏈由兩個免疫球蛋白結構域從N-末端至C末端以VL-CL的順序連接構成，VL-CL分別是指輕鏈可變結構域和輕鏈恒定結構域。在IgG中，Fc上Cγ2和Cγ3結構域之間的位點介導與新生兒受體FcRn的相互作用。與FcRn的結合會從內體中將內吞的抗體再循環回血流中(Raghavan等人,1996,AnnuRevCellDevBiol12:181-220；Ghetie等人,2000,AnnuRevImmunol18:739-76，它們都通過引用整體并入)。這個過程結合由于全長分子的大尺寸所引起的腎過濾的排除致使有利抗體的血清半衰期介于1至3周。Fc與FcRn的結合還在抗體運輸中起關鍵作用。Fc上的FcRn結合位點也是細菌蛋白A和G結合的位點。通常使用這些蛋白的緊密結合作為純化抗體的方法，該方法在蛋白純化期間采用蛋白A或蛋白G親和色譜進行。因此，Fc上這個區域的保真性對于抗體的臨床特性和它們的純化很重要。大鼠Fc/FcRn復合體(Burmeister等人,1994,Nature,372:379-383；Martin等人,2001,MolCell7:867-877，它們都通過引用整體并入)、以及Fc與蛋白A和G的復合體(Deisenhofer,1981,Biochemistry20:2361-2370；Sauer-Eriksson等人,1995,Structure3:265-278；Tashiro等人,1995,CurrOpinStructBiol5:471-481，它們都通過引用整體并入)的可用結構使得能夠深入了解Fc與這些蛋白的相互作用。FcRn受體還負責將IgG轉移到新生兒的腸和成人腸表皮腔(Ghetie和Ward,Annu.Rev.Immunol.,2000,18:739-766；Yoshida等人,Immunity,2004,20(6):769-783，它們都通過引用整體并入)。大鼠和人Fc結構域的研究證明了一些Fc殘基對FcRn結合的重要性。大鼠和人序列在Fc區(根據EU索引的編號為殘基237-443)具有約64％的序列同一性。關于大鼠/人的Fc、FcRn重鏈和FcRn輕鏈(β-2-微球蛋白)的比對參見圖3、4和5。已經從大鼠Fc/FcRn復合體的現有結構建立了人Fc/FcRn復合體的模型(Martin等人,2001,MolCell7:867-877，通過引用整體并入)。大鼠和人序列共有對于FcRn結合很關鍵的一些殘基，例如H310和H435(Medesan等人,1997J.Immunol.158(5):221-7；Shields等人,2001,J.Biol.Chem.276(9):6591-6604，它們都通過引用整體并入)。然而，在許多位置，人和大鼠蛋白具有不同的氨基酸，使得人序列中的殘基與大鼠序列中的殘基具有不同的環境，并且可能具有不同的特征。這種變異性限制了將特征從一個同源物轉移到另一同源物的能力。在鼠Fc中，在T252、T254、和T256位點的隨機突變和噬菌體展示選擇產生了三突變體T252L/T254S/T256F，該三突變體的FcRn親和力增加了3.5倍，血清半衰期增加了1.5倍(Ghetie等人,1997,Nat.Biotech.15(7):637-640，通過引用整體并入)。通過在位置253、310和435突變破壞Fc/FcRn的相互作用還導致體內半衰期降低(Medesan等人J.Immunol.1997158(5):2211-7，通過引用整體并入)。已經在人Fcγ中對一些對于與FcRn結合很重要的殘基進行了突變研究，并且已經證明它們具有增加的血清半衰期。在人Fcγ1中，Hinton等人將三個殘基分別突變為另外19種常見的氨基酸。Hinton等人發現某些點會突變為FcRn結合親和力增加的雙突變體(Hinton等人2004,J.Biol.Chem.279(8):6213-6216；Hinton等人J本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種包含相對于野生型人Fc區的至少一個修飾的變體Fc區，其中所述修飾選自由下列組成的組：252Y/428L、252Y/434S和428L/434S，其中編號根據EU索引進行。

【技術特征摘要】
2007.12.26 US 61/016793;2008.02.25 US 61/031353;201.抗體在制備藥物中的用途，其中所述抗體包含相對于野生型人Fc區具有兩個修飾的變體Fc區，其中所述修飾是428L和434S，其中所述抗體相比沒有所述修飾的抗體在哺乳動物中具有較長的半衰期，并且其中編號根據Kabat等的EU索引進行。2.根據權利要求1所述的用途，其中所述Fc區選自：IgG1、lgG2、lgG3和lgG4。3.根據權利要求2所述的用途，其中所述抗體包含IgG1Fc...

【專利技術屬性】
技術研發人員：A張伯倫，B達希亞特，JR德斯賈萊斯，SB卡基，GA拉扎，
申請(專利權)人：XENCOR公司，
類型：發明
國別省市：美國;US