本發明專利技術公開了一種牛樟樹組織培養快速繁殖的方法，包括外植體的采集和消毒、無菌試管苗的獲得、試管苗繁殖培養、試管苗的生根培養、煉苗移栽等步驟。本發明專利技術得到的種苗健壯，成活率達到99.2%，滿足市場對牛樟樹的種苗的大量需求，有效解決牛樟樹規模化育苗問題。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術設及一種牛精樹組織培養繁殖的方法。
技術介紹
牛精（Cinnamomumkanehirae化y)屬精科(Xauraceae)精屬植物，又名黑精，為 臺灣特有常綠闊葉大喬木，樹干通直，樹體高聳及初生葉顏色多變，深具觀賞價值，是極具 發展潛力的景觀樹種。因其具有特殊的香味，且不易腐朽，材質細致，紋理交錯，牛精一直是 雕刻神像的最佳素材。牛精樹葉中含有獨特的Ξ祗類，對治療癌癥有顯著功效。牛精備受 關注的另一個主要原因在于極具商業價值的珍貴藥用真菌-牛精芝僅寄生于牛精樹樹干。 目前牛精天然林因過度開發W及人為盜伐已溯臨滅絕危機，常常一木難求。此外， 牛精樹體高大，種子采集困難，加上種子的發芽率低，人工繁育困難較大。因此，建立方法簡 單、生根率高的牛精樹組織培養快速繁殖體系，將對牛精的開發利用起到重要作用。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種種苗健壯，成活率高，滿足市場對牛精樹的種苗的大 量需求，有效解決牛精樹規模化育苗問題的牛精樹組織培養快速繁殖的方法。 本專利技術的技術解決方案是： 一種牛精樹組織培養快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步驟： (1)外植體的采集和消毒： 取帶蔽芽的莖段作為外植體，用質量百分數0. 05%的洗潔精浸泡5min，自來水沖 洗后，移置于超凈工作臺上；在75%乙醇中浸泡30秒，無菌水沖洗2遍后，用0. 1 %升隸消 毒lOmin，無菌水清洗3次后，再用無菌吸收紙去掉表面水分，切成0.8-lcm帶一個蔽芽的莖 段； (2)無菌試管苗的獲得： 將上述消毒過的外植體接種于芽分化培養基上30天誘導不定芽萌發，得到無菌 試管苗；培養溫度為26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h;分化培養 基WWPM為基本培養基，添加植物激素包括：6-芐基腺嚷嶺2. 〇111邑/1、嗎|噪下酸0. 1111邑/1、激 動素0. 2mg/L，薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L;培養基抑值為5.8; (3)試管苗繁殖培養： 將步驟（2)得到的無菌試管苗置于增殖培養基上得到大量不定芽；培養溫度為 26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h;增殖培養基是WWPM為基本培 養基，添加聚乙締化咯燒酬500mg/l、活性炭Ig/LW及植物激素6-芐基腺嚷嶺2. 5mg/lJ3| 噪下酸0. 3mg/l、靈發素0.Img/l，薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L;培養基抑值為 5. 8 ; (4)試管苗的生根培養： 將步驟（3)得到的不定芽，置于生根培養基中誘導生根；培養溫度為26-28°C，光 照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h;增殖培養基是WWPM為基本培養基，添 加聚乙締化咯燒酬0. 5g/L、活性炭1.Og/LW及植物激素：嗎I噪下酸0. 5-1.Omg/l、糞乙酸 0. 5mg/L、靈發素0.Img/L;薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L;培養基抑值為5.8; [001引巧）煉苗移栽： 將步驟（4)獲得的帶根的3cm高試管苗煉苗5-7山用綴子取出試管苗，洗凈根部的 培養基，移栽置滅菌后的質量比：賠石：泥炭上為1:1的基質中生長2個月后，再移栽大棚 進行管理。 所述WPM為木本植物用培養基，[001引 配方： 本專利技術得到的種苗健壯，成活率達到99. 2%，滿足市場對牛精樹的種苗的大量需 求，有效解決牛精樹規模化育苗問題。 下面結合實施例對本專利技術作進一步說明。【具體實施方式】 -種牛精樹組織培養快速繁殖的方法，包括下列步驟： (1)外植體的采集和消毒：取帶蔽芽的莖段作為外植體，用質量百分數0. 05%的洗潔精浸泡5min，自來水沖 洗后，移置于超凈工作臺上。在75%乙醇中浸泡30秒，無菌水沖洗2遍后，用0. 1 %升隸消 毒lOmin，無菌水清洗3次后，再用無菌吸收紙去掉表面水分，切成0.8-lcm帶一個蔽芽的莖 段。 (2)無菌試管苗的獲得： 將上述消毒過的外植體接種于芽分化培養基上30天誘導不定芽萌發，得到無菌 試管苗。培養溫度為26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期為12h/12h(光/暗）。分化 培養基WWPM為基本培養基，添加植物激素包括：6-芐基腺嚷嶺化-BA) 2. 〇111邑/1、嗎|噪下酸 (IBA)O.Img/L、激動素化Τ)0. 2mg/L。薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L。培養基抑 值為5.8。 (3)試管苗繁殖培養： 將步驟（2)得到的無菌試管苗置于增殖培養基上得到大量不定芽。培養溫度為 26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期為12h/12h(光/暗）。增殖培養基是WWPM為基 本培養基，添加聚乙締化咯燒酬（PVP)500mg/L、活性炭Ig/LW及植物激素6-芐基腺嚷嶺 化-BA)2. 5111邑/1、嗎|噪下酸（IBA)O. 3mg/L、靈發素（LF巧0.Img/L。薦糖和瓊脂濃度分別是 20g/L和6. 5g/L。培養基抑值為5.8。 (4)試管苗的生根培養：[003。 將步驟做得到的不定芽，置于生根培養基中誘導生根。培養溫度為26-28。光 照強度為15001UX，光照周期為12h/12h(光/暗）。增殖培養基是WWPM為基本培養基，添 加聚乙締化咯燒酬（PVP)O. 5g/l、活性炭1.Og/LW及植物激素：嗎I噪下酸（IBA)O. 5-1.Omg/ L糞乙酸（NAA)O. 5mg/l、靈發素（LF巧0.Img/L。薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L。 培養基抑值為5.8。[003引 妨煉苗移栽： 將步驟（4)獲得的帶根的長勢良好的試管苗（約3cm高）煉苗5-7山用綴子取出 試管苗，洗凈根部的培養基，移栽置滅菌后的賠石：泥炭±為1:1的基質中生長2個月后，再 移栽大棚進行管理。 所述WPM為木本植物用培養基， 配方：[003引得到的種苗健壯，成活率達到99. 2%。【主權項】1. 一種，其特征是：包括下列步驟： (1) 外植體的采集和消毒： 取帶腋芽的莖段作為外植體，用質量百分數0. 05%的洗潔精浸泡5min，自來水沖洗 后，移置于超凈工作臺上；在75 %乙醇中浸泡30秒，無菌水沖洗2遍后，用0. 1 %升汞消毒 lOmin，無菌水清洗3次后，再用無菌吸收紙去掉表面水分，切成0. 8-lcm帶一個腋芽的莖 段； (2) 無菌試管苗的獲得： 將上述消毒過的外植體接種于芽分化培養基上30天誘導不定芽萌發，得到無菌試管 苗；培養溫度為26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h ;分化培養基以 WPM為基本培養基，添加植物激素包括：6_芐基腺嘌呤2. Omg/L、吲哚丁酸0. lmg/L、激動素 0. 2mg/L，蔗糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L ;培養基pH值為5. 8 ; (3) 試管苗繁殖培養： 將步驟⑵得到的無菌試管苗置于增殖培養基上得到大量不定芽；培養溫度為 26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h ;增殖培養基是以WPM為基本培 養基，添加聚乙烯吡咯烷酮500mg/L、活性炭lg/L以本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種牛樟樹組織培養快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步驟：(1)外植體的采集和消毒：取帶腋芽的莖段作為外植體，用質量百分數0.05％的洗潔精浸泡5min，自來水沖洗后，移置于超凈工作臺上；在75％乙醇中浸泡30秒，無菌水沖洗2遍后，用0.1％升汞消毒10min，無菌水清洗3次后，再用無菌吸收紙去掉表面水分，切成0.8?1cm帶一個腋芽的莖段；(2)無菌試管苗的獲得：將上述消毒過的外植體接種于芽分化培養基上30天誘導不定芽萌發，得到無菌試管苗；培養溫度為26?28℃，光照強度為1500lux，光照周期：光/暗為12h/12h；分化培養基以WPM為基本培養基，添加植物激素包括：6?芐基腺嘌呤2.0mg/L、吲哚丁酸0.1mg/L、激動素0.2mg/L，蔗糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6.5g/L；培養基pH值為5.8；(3)試管苗繁殖培養：將步驟(2)得到的無菌試管苗置于增殖培養基上得到大量不定芽；培養溫度為26?28℃，光照強度為1500lux，光照周期：光/暗為12h/12h；增殖培養基是以WPM為基本培養基，添加聚乙烯吡咯烷酮500mg/L、活性炭1g/L以及植物激素6?芐基腺嘌呤2.5mg/L、吲哚丁酸0.3mg/L、靈發素0.1mg/L，蔗糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6.5g/L；培養基pH值為5.8；(4)試管苗的生根培養：將步驟(3)得到的不定芽，置于生根培養基中誘導生根；培養溫度為26?28℃，光照強度為1500lux，光照周期：光/暗為12h/12h；增殖培養基是以WPM為基本培養基，添加聚乙烯吡咯烷酮0.5g/L、活性炭1.0g/L以及植物激素：吲哚丁酸0.5?1.0mg/L、萘乙酸0.5mg/L、靈發素0.1mg/L；蔗糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6.5g/L；培養基pH值為5.8；(5)煉苗移栽：將步驟(4)獲得的帶根的3cm高試管苗煉苗5?7d，用鑷子取出試管苗，洗凈根部的培養基，移栽置滅菌后的質量比：蛭石:泥炭土為1:1的基質中生長2個月后，再移栽大棚進行管理。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王磊，王仲禮，宿紅艷，
申請(專利權)人：魯東大學，
類型：發明
國別省市：山東;37
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