本發明專利技術提供了一種提高銀杏類黃酮含量的方法，其步驟包括：用金雀異黃素處理銀杏。進一步的，本發明專利技術還提供了金雀異黃素在提高植物類黃酮含量中的應用。通過對銀杏施加金雀異黃素，改變了銀杏體內生理代謝水平、促進銀杏光合作用，從而促進類黃酮積累，提高銀杏類黃酮含量，提高銀杏的藥用和經濟價值，且操作簡便，成本低廉。經金雀異黃素處理的葉片，類黃酮、花青素含量、可溶性糖含量、葉綠素含量顯著提高，抗氧化酶活性、苯丙氨酸解氨酶、查爾酮合成酶及查爾酮異構酶活性明顯增強，因此不僅提高類黃酮含量，還大大提高了植物的抗性，從而提高植物產量和品質，具有良好的推廣應用前景。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于農業科技
，特別涉及一種提高銀杏類黃酮含量的方法及金雀 異黃素的應用。
技術介紹
銀杏(Ginkgo biloba L.)原產我國，銀杏科銀杏屬，落葉喬木，雌雄異株，又稱白 果樹、公孫樹。銀杏是目前世界上最古老的孑遺植物，有著"活化石"之稱?？茖W家早在上世 紀70年代已研究證明銀杏葉提取物對心腦血管疾病非常好的治療效果，自此銀杏的藥用價 值被人們廣泛關注，如今銀杏已經成為國際藥用植物研究開發的熱點之一。其中銀杏類黃 酮化合物是治療老年性癡呆癥的首選天然藥物，對高血壓、動脈粥樣硬化、糖尿病、心血管 疾病等也有十分顯著的治療效果。此外，黃酮類化合物廣泛分布于植物界，具有很多的生物 學功能，如調節植物生長，保護植物免受紫外線，抗氧化活性，抗衰老，抵御致病菌侵襲，影 響植物的生殖力和花粉的萌發。雖然銀杏類黃酮類化合物具有重要的藥理和生理活性，但 是在銀杏體內含量低，不易提取，所以提高銀杏葉類黃酮含量從而提高銀杏的抗性已經成 為研究重點。金雀異黃素(Genistein，GNT)又稱為染料木黃酮或染料木素，是一種大豆體內天 然存在的異黃酮類物質，還是酪氨酸蛋白激酶的抑制劑，被用來研究細胞G蛋白信號的轉 導。金雀異黃酮及其糖苷具有弱雌激素樣活性，具有良好的抗癌、抗氧化和抑制過氧化氫生 成、預防中老年骨質疏松癥、改善女性更年期綜合癥和心血管疾病、增加抗氧化酶活性等作 用，廣泛用作營養食品補充劑。 近年來眾多研究表明GNT可以促進畜禽類的生長，提高泌乳或產蛋性能，提高繁殖 力和增強機體免疫力，可以促進蟠桃果實著色，提高蟠桃糖酸比，促進蘋果果實著色和桃果 實著色，增加葡萄果實花青苷積累等。但是對于GNT在植物類黃酮方面的研究，未有任何相 關報道。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術提供了， 解決了銀杏葉片類黃酮含量極低的問題，提供了一種操作簡便，成本低，可以高效提高銀杏 類黃酮含量方法。 本專利技術第一方面提供了一種提高銀杏類黃酮含量的方法，其步驟包括：用金雀異 黃素處理銀杏。 本專利技術第二方面提供了金雀異黃素在提高植物類黃酮含量中的應用。 本專利技術的有益效果是:①本專利技術通過對銀杏施加金雀異黃素，改變了銀杏體內生 理代謝水平，促進銀杏光合作用，從而促進類黃酮積累，提高銀杏類黃酮含量，提高銀杏的 藥用和經濟價值，且操作簡便，成本低廉。 ②經金雀異黃素處理的葉片，類黃酮、花青素含量、可溶性糖含量、葉綠素含量顯 著提高，抗氧化酶活性、苯丙氨酸解氨酶、查爾酮合成酶及查爾酮異構酶活性明顯增強，因 此不僅提高類黃酮含量，還大大提高了植物的抗性，從而提高植物產量和品質，具有良好的 推廣應用前景?！揪唧w實施方式】本專利技術第一方面提供了一種提高銀杏類黃酮含量的方法，其步驟包括：用金雀異 黃素處理銀杏。對銀杏施加金雀異黃素，改變了銀杏體內生理代謝水平、促進銀杏光合作 用，從而促進類黃酮積累，提高銀杏類黃酮含量，且植物的花青素含量、可溶性糖含量、葉綠 素含量顯著提高，抗氧化酶活性、苯丙氨酸解氨酶、查爾酮合成酶及查爾酮異構酶活性明顯 增強。優選的，所述金雀異黃素配制為金雀異黃素的水溶液后處理銀杏，所述金雀異黃 素濃度為50-150ymol/L。一定范圍內隨著噴施金雀異黃素濃度的增高，銀杏葉片中的類黃 酮含量呈上升趨勢，而銀杏葉花青素、苯丙氨酸解氨酶含量呈現先上升后下降的趨勢，50-150ymol/L的濃度范圍內各個參數均較佳，更加有利于銀杏光合作用及體內生理代謝。 更加優選的，所述金雀異黃素水溶液中含有增溶劑。所述增溶劑可增加金雀異黃 素在水溶液中的溶解度，分散更加均勻，有利于植物對金雀異黃素的吸收。 進一步優選的，所述增溶劑為吐溫，所述吐溫占金雀異黃素水溶液的體積百分比 為0.05-0.2% 〇 優選的，所述處理的方法為在銀杏發芽一個月后將金雀異黃素噴布于銀杏葉片表 面。施用金雀異黃素的最佳時機為銀杏發芽一個月后，此時對銀杏作用的效果更加顯著。 更加優選的，所述金雀異黃素的用量為1-5μπι〇1。 本專利技術第二方面提供了金雀異黃素在提高植物類黃酮含量中的應用。 優選的，所述植物為銀杏。 更加優選的，所述應用的步驟包括:在銀杏發芽一個月后，將金雀異黃素配制為金 雀異黃素的水溶液后噴布于銀杏葉片表面，所述金雀異黃素濃度為50-150ymol/L，所述金 雀異黃素水溶液中含體積百分比為〇. 05-0.2 %的吐溫。 下面將結合實施例對本專利技術提供的一種提高銀杏類黃酮含量的方法及金雀異黃 素的應用予以進一步說明。 實施例1 1測試方法 本實施例中各測定方法如下，實施案例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規 條件，或按照制造廠商所建議的條件。 1.1銀杏葉綠素含量測定按照下列方法進行葉綠素 a，葉綠素 b含量的測定。取3g鮮葉、打孔取樣、研磨、加入 80%丙酮浸提，定容后在663nm和645nm波長下測量，根據C(mg · L-4 = 20.31 OD 645+8.04 00 663，（00為分光值)計算葉綠素濃度。最后用公式:￥〇1^(11^2)=換算成葉綠素含量。進行3次重復測定，取平均值。 1.2花青素含量的測定 利用分光光度法對葉片花青素的含量進行測定，進行3次重復測定，取平均值。 1.3銀杏可溶性糖含量的測定采用蒽酮比色法測定可溶性糖，四組處理分別稱量IOg銀杏葉烘干，取Ig烘干后的 葉片用IOml乙醇溶液研磨成勻漿，靜置30min后，4500rpm離心15min，取上清液3ml到25ml容 量瓶加水定容。然后取Iml稀釋液加入5ml蒽酮試劑，煮沸lOmin，冷卻后在620nm測定吸光 值。 1.4銀杏苯丙氨酸解氨酶活性的測定 用紫外分光光度法測定銀杏苯丙氨酸解氨酶活性，取2.Og新鮮銀杏葉片，加入3ml 硼酸緩沖液和〇. 5g PVP，研磨，10 OOOrpm離心15min，取上清。取O . 5mL苯丙氨酸溶液加入 0.5ml上清液。然后加入IOml蒸餾水，在40°C的水浴中加熱30min，再在沸水中煮5min終止反 應，在290nm下測定分光光度值，以吸收變化0.01所需酶量作為一個酶活性單位(U)。進行3 次重復測定，取平均值。 1.5銀杏類黃酮含量的測定紫外分光光度法測定提取物中總黃酮含量，稱取銀杏鮮葉I . 0 g后烘干，加 10ml70 %乙醇浸泡、抽濾，重復三次。合并濾液，定容至50ml待測。吸取5ml 100ug/L蘆丁溶 液、30%乙醇 10ml、0.7ml 5%NaN〇2、混勻后加入0.7ml 10%AlCl3(35min后加5ml 40%Na0H， 30%乙醇定容25ml。35°(3水浴IOmin后，510nm波長測定吸光度。以蘆丁為標樣，類黃酮含量 以百分比表示。 1.6銀杏抗氧化酶活性的測定采用氮藍四唑法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性，以抑制NBT光化學還原的50 %為 一個酶活性單位(U);采用愈創木酚顯色法測定過氧化物酶(POD)活性，以每分鐘內470nm下 的光密度(D470nm)變化0.1為一個酶活性單位(U);采用紫外吸收法測定過氧化氫酶(CAT)活性，以Imin內A24q降低0.1為一個酶活性 單位(U);利用APX在H2O2存在的條件下使抗壞血酸量減少的原理測定酶活性，紫外本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種提高銀杏類黃酮含量的方法，其步驟包括：用金雀異黃素處理銀杏。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：許鋒，葉家保，楊湘虹，張威威，廖詠玲，陳強文，
申請(專利權)人：長江大學，
類型：發明
國別省市：湖北;42
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